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枯草芽孢杆菌CF-3抑菌蛋白的分离与鉴定

现代食品科技 2016年第12期32卷 145-150,92页

作者：徐新星曾轩李培中曾晴尹京苑高海燕上海大学生命科学学院上海200444 上海市能源作物育种及应用重点实验室上海200444 上海大学计算机学院上海200444

本研究采用硫酸铵分级盐析、交联葡聚糖凝胶分子层析（Sephadex G-75）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等方法对生防菌枯草芽孢杆菌CF-3无菌发酵液对复端孢霉F中的主要抑菌蛋白进行了分离与鉴定。结果表明：CF-3无菌发酵液中抑菌蛋白... 详细信息

本研究采用硫酸铵分级盐析、交联葡聚糖凝胶分子层析（Sephadex G-75）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）等方法对生防菌枯草芽孢杆菌CF-3无菌发酵液对复端孢霉F中的主要抑菌蛋白进行了分离与鉴定。结果表明：CF-3无菌发酵液中抑菌蛋白的硫酸铵最佳沉淀饱和度为60%~70%,蛋白质沉淀量为149.03μg/mL,极显著高于其他浓度（p≤0.01）;利用60%~70%饱和度的硫酸铵提取的粗蛋白质经Sephadex G-75凝胶柱层析后获得2个吸收峰,8管收集液,其中第2管峰收集液抑菌活性显著高于其他管（p≤0.05）;将流分2收集液进一步分离纯化后,将抑菌效果最好的2.3号流分的两条蛋白条带割胶回收,利用生物质谱技术鉴定为γ-谷氨酰转肽酶和胞内丝氨酸蛋白酶,分子量分别约为42.5 ku和33.9 ku。以上结果可为该菌株及其抑菌蛋白的开发应用奠定基础。

关键词：枯草芽孢杆菌抑菌蛋白分离纯化凝胶过滤层析

枯草芽孢杆菌B9601-Y_2抑菌蛋白活性及产生条件的研究

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植物病理学报 2005年第1期35卷 30-36页

作者：汪澈何月秋张永庆云南农业大学植物保护学院昆明650201

枯草芽孢杆菌B9601 -Y2 抑菌蛋白可以使棉花红腐病原菌菌丝畸形,呈念珠状,胞壁穿孔,不规则消解,内含物外泄,失活。B9601- Y2 菌株产抑菌蛋白的最适培养条件为:pH 7 0, 37℃培养 48h。菌株的马铃薯蔗糖培养液经 (NH4 )2SO4 至80%饱和度... 详细信息

枯草芽孢杆菌B9601 -Y2 抑菌蛋白可以使棉花红腐病原菌菌丝畸形,呈念珠状,胞壁穿孔,不规则消解,内含物外泄,失活。B9601- Y2 菌株产抑菌蛋白的最适培养条件为:pH 7 0, 37℃培养 48h。菌株的马铃薯蔗糖培养液经 (NH4 )2SO4 至80%饱和度盐析能得到 0 1mg/mL以上的粗蛋白,粗蛋白的产量与培养过程中供氧条件、产菌量呈正相关。粗蛋白能耐80℃高温和pH9 0的碱性,在 4℃下,抑菌活性 60d内基本不变。

关键词：枯草芽孢杆菌抑菌蛋白活性产生条件

枯草芽胞杆菌NCD-2菌株抑菌蛋白的分离及鉴定

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植物病理学报 2018年第3期48卷 395-401页

作者：张晓云郭庆港鹿秀云赵卫松王培培李社增马平河北省农林科学院植物保护研究所河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

枯草芽胞杆菌NCD-2菌株对灰葡萄孢菌具有较强的抑菌活性,抑菌蛋白是其产生的抑菌物质之一。本研究为明确NCD-2菌株所产抑菌蛋白的作用方式和特性,采用牛津杯法测定抑菌蛋白的抑菌活性及其对病原菌菌丝生长的影响,采用混合培养法测定其... 详细信息

枯草芽胞杆菌NCD-2菌株对灰葡萄孢菌具有较强的抑菌活性,抑菌蛋白是其产生的抑菌物质之一。本研究为明确NCD-2菌株所产抑菌蛋白的作用方式和特性,采用牛津杯法测定抑菌蛋白的抑菌活性及其对病原菌菌丝生长的影响,采用混合培养法测定其对病原菌分生孢子萌发的影响,同时采用阴离子交换层析和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对其进行分离纯化,并利用MALDI-TOF-MS进行鉴定。结果表明,NCD-2菌株产生的粗蛋白能够显著抑制灰葡萄孢菌分生孢子的萌发和菌丝生长,并导致病原菌菌丝分枝增多、局部膨大肿胀。通过分离纯化获得具抑菌活性的蛋白组分D1-3,经鉴定该蛋白的肽指纹图谱与leucyl aminopeptidase[Bacillus subtilis](WP_041057629.1)的氨基酸序列匹配率最高,达到65%,相对分子质量为53.936 k Da,功能分析表明组分D1-3可能是一种新的抑菌蛋白。

关键词：枯草芽胞杆菌抑菌蛋白抑菌机制鉴定

枯草芽孢杆菌CAB-1抑菌蛋白对黄瓜白粉病的防治作用

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中国生物防治学报 2012年第3期28卷 375-380页

作者：张晓云李宝庆郭庆港鹿秀云李社增马平河北省农林科学院植物保护研究所/河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心/农业部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室保定071000

采用子叶喷雾法分别测定了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAB-1所产抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉病的保护和治疗生物活性。结果表明该抑菌蛋白粗提物能显著降低黄瓜白粉病的病情指数,其保护和治疗作用的效果分别为73.33%和76.85%;EC50分别... 详细信息

采用子叶喷雾法分别测定了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAB-1所产抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉病的保护和治疗生物活性。结果表明该抑菌蛋白粗提物能显著降低黄瓜白粉病的病情指数,其保护和治疗作用的效果分别为73.33%和76.85%;EC50分别为175μ***-1和125μ***-1。利用曲利苯兰染色法检测抑菌蛋白粗提物对黄瓜白粉菌Sphacrotheca fuliginea生长的影响,结果表明该抑菌蛋白粗提物能有效降低白粉菌分生孢子的萌发率及萌发的芽管个数,造成菌丝顶端畸形膨大呈球状并减少新生分生孢子的个数。接菌3 d后,对照的孢子萌发率为36.98%,而经抑菌蛋白粗提物处理后的孢子萌发率仅为4.8%;接菌7 d后对照每个分生孢子梗上串生孢子个数最多为7个,多数5～6个;而抑菌蛋白粗提物处理后每个分生孢子梗上串生孢子个数最多为2个,大部分为1个。

关键词：枯草芽孢杆菌抑菌蛋白白粉病菌抑制作用

芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

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植物保护学报 2012年第5期39卷 438-442页

作者：龙贤梨王中康陈玉龙殷幼平重庆大学生物工程学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室重庆400030

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白... 详细信息

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框(GenBank登录号为JQ309841),编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌***的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。

关键词：芽胞杆菌CQBS03 柑桔溃疡病菌 TasA基因抑菌蛋白基因克隆

枯草芽孢杆菌体外抑菌试验及其抑菌蛋白的鉴定

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畜牧与兽医 2022年第12期54卷 57-63页

作者：尹杨燕彭昊李小宁李军李常挺白慧丽马春霞钟舒红陶立兰美益韦天超廖玉英广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西南宁530001

旨在深入研究枯草芽孢杆菌发挥抑菌作用的相关抑菌蛋白,进一步了解枯草芽孢杆菌抑菌机制。本研究以枯草芽孢杆菌GX20200511-1株为研究对象,采用体外共培养及牛津杯法测定体外抑菌活性,低温离心和超滤法初步分离枯草芽孢杆菌的胞外蛋白,... 详细信息

旨在深入研究枯草芽孢杆菌发挥抑菌作用的相关抑菌蛋白,进一步了解枯草芽孢杆菌抑菌机制。本研究以枯草芽孢杆菌GX20200511-1株为研究对象,采用体外共培养及牛津杯法测定体外抑菌活性,低温离心和超滤法初步分离枯草芽孢杆菌的胞外蛋白,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定枯草芽孢杆菌发酵产物中的抑菌成分。结果表明枯草芽孢杆菌GX20200511-1对沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌效果,显著降低共培养24 h后的指示菌数量。经LC-MS/MS鉴定分析,共检索出455种蛋白质,通过Uniprot蛋白数据库对所有蛋白质进行分析,检测出6种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是壳聚糖酶(chitosanase)、聚酮生物合成3-羟基-3-甲基戊二酰ACP合成酶PksG(polyketide biosynthesis 3-hydroxy-3-methylglutaryl-ACP synthase PksG)、伊枯草菌素合成酶(iturin synthetase)、表面活性素合成酶(surfactin synthetase)、丰原素合成酶(fengycin synthetase)和tRNA核酸酶WapA(tRNA nuclease WapA),分子量分别为31.395、46.766、296.6、402.43、48.86和173.525 kDa。本研究枯草芽孢杆菌GX20200511-1可能通过代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。

关键词：枯草芽孢杆菌体外抑菌抑菌蛋白超滤法液相色谱串联质谱

解淀粉芽孢杆菌YN-1抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

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基因组学与应用生物学 2010年第5期29卷 823-828页

作者：杨丽荣王正军薛保国刘红彦马建岗郑亚平河南省农业科学院植物保护研究所郑州450002 西安交通大学生命科学院西安710049

本文以解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株为研究对象,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出编码TasA抑菌基因的全长DNA,并构建pGEX-4T2/TasA原核表达载体,获得TasA-GST融合表达的抑菌蛋白。测序结果表明,解淀粉芽孢杆菌YN-1TasA基因核苷酸序列全长为786... 详细信息

本文以解淀粉芽孢杆菌YN-1菌株为研究对象,利用PCR方法从基因组DNA中扩增出编码TasA抑菌基因的全长DNA,并构建pGEX-4T2/TasA原核表达载体,获得TasA-GST融合表达的抑菌蛋白。测序结果表明,解淀粉芽孢杆菌YN-1TasA基因核苷酸序列全长为786bp(GenBank登录号:EU131674),编码261个氨基酸残基;同源性分析表明,它与解淀粉芽孢杆菌*** FZB42(YP_001421886)序列的同源性最高,达98%,预测蛋白分子量为31kD。SDS-PAGE分析表明,TasA基因能在大肠杆菌BL21中表达,Western印迹分析pGEX-4T2/TasA原核表达载体,检测到约57kD的TasA-GST融合外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量大小相符。表达产物细胞裂解液上清经Ni柱层析,表明浓度为500mmol/L咪唑洗脱缓冲液时获得较高浓度和纯度的纯化蛋白。进一步抑菌活性分析表明表达产物对黄瓜灰霉病病原菌检测平板上显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为今后深入研究TasA抑菌蛋白基因以及抗病转基因工程提供了参考。

关键词：解淀粉芽孢杆菌抑菌蛋白基因克隆原核表达

产抑菌蛋白的丁酸梭菌的筛选和鉴定及体外益生功能研究

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中国畜牧杂志 2015年第13期51卷 75-81页

作者：王腾浩宗鑫宋德广汪以真浙江大学饲料科学研究所浙江杭州310058 重庆民泰香料化工有限责任公司重庆400063

试验旨在筛选产高效抑菌蛋白的丁酸梭菌,并研究其体外生物学特性,为其在动物生产中的应用奠定基础。采用厌氧培养法进行菌种分离,孔穴琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,并通过形态学、生理生化特性和16S r DNA基因序列同源性分析进行菌种鉴... 详细信息

试验旨在筛选产高效抑菌蛋白的丁酸梭菌,并研究其体外生物学特性,为其在动物生产中的应用奠定基础。采用厌氧培养法进行菌种分离,孔穴琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,并通过形态学、生理生化特性和16S r DNA基因序列同源性分析进行菌种鉴定。选取丁酸梭菌ZJU-1进行体外抗逆性和益生功能研究,采用试剂盒进行酶活测定,顶空-气相色谱发测定挥发性脂肪酸。结果表明:从盲肠内容物中分离到6株丁酸梭菌,其中3株菌种对大肠杆菌K88、金黄色葡萄球菌ATCC25923均具有明显抑制作用。目标菌株ZJU-F1经鉴定结果为丁酸梭菌。丁酸梭菌ZJU-F1具有较好人工胃液、人工肠液、胆盐和抗生素耐受性;分泌淀粉酶和蛋白酶,活性分别达2 515.43 U/m L和93.72 U/m L;并具有分泌挥发性脂肪酸的功能,其中乙酸和丁酸的分泌量分别达2.29 g/L和1.87g/L。本试验获得的丁酸梭菌ZJU-F1具有较强的抗逆性和益生功能,作为潜在的抗生素替代物具有巨大的开发利用价值.

关键词：丁酸梭菌抑菌蛋白抑菌活性筛选鉴定

枯草芽孢杆菌SH7抑菌蛋白的分离纯化及对烟草青枯病菌的抑制作用

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中国烟草科学 2010年第1期31卷 13-15页

作者：张秀玉孔凡玉王静张成省李佰乐国家烟草专卖局烟草病虫害监测与综合治理重点开放实验室中国农业科学院烟草研究所青岛266101

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析及聚丙烯凝胶电泳,从枯草芽孢杆菌SH7代谢物中分离纯化出一种相对分子质量为33.6 kD的蛋白,该活性物质具有淀粉酶活力,对烟草青枯病菌具有一定的抑制... 详细信息

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析及聚丙烯凝胶电泳,从枯草芽孢杆菌SH7代谢物中分离纯化出一种相对分子质量为33.6 kD的蛋白,该活性物质具有淀粉酶活力,对烟草青枯病菌具有一定的抑制作用。

关键词：枯草芽孢杆菌抑菌蛋白纯化拮抗作用