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MicroRNA-30a在胃癌组织的表达分析及其靶基因成纤维活化蛋白α的鉴定

第三军医大学学报 2016年第6期38卷 560-563页

作者：龚莉左钱飞余婷汪莉娜肖斌曾浩第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达。通过miRNA靶基因预测数据库Target Scan预测miR-30a的靶基因。构建含有miR-30a结合位... 详细信息

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达。通过miRNA靶基因预测数据库Target Scan预测miR-30a的靶基因。构建含有miR-30a结合位点的3'UTR片段的荧光素酶载体(p MIR-FAPα),通过荧光素酶报告实验对预测靶基因进行检测。利用Western blot和qRT-PCR对预测靶基因成纤维活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)的表达进行检测。结果 miR-30a在胃癌组织样本中的表达明显下调,通过生物信息学预测(Target Scan)和荧光素酶实验表明miR-30a mimic可与FAPα基因结合,qRT-PCR和Western blot结果表明miR-30a mimic可抑制FAPαmRNA和蛋白质水平的表达。结论 miR-30a在人胃癌组织样本中表达下调,FAPα是其靶基因。

关键词：胃癌 miR-30a 成纤维活化蛋白α

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成纤维活化蛋白α和尿激酶型纤溶酶原激活物在宫颈癌中的表达和意义

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中国妇幼保健 2015年第24期30卷 4206-4209页

作者：王小玲张梦真郑州大学第一附属医院妇产科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室河南郑州450052

目的探讨成纤维活化蛋白α(FAPα)和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组织化学方法检测90例宫颈癌组织、35例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、20例慢性宫颈炎组织中FAPα和uPA的表达情况。结果 FAPα在... 详细信息

目的探讨成纤维活化蛋白α(FAPα)和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组织化学方法检测90例宫颈癌组织、35例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、20例慢性宫颈炎组织中FAPα和uPA的表达情况。结果 FAPα在宫颈癌中阳性表达率为86.67%,显著高于CIN(57.14%)及慢性宫颈炎(5.00%),差异有统计学意义(P<0.05);uPA在宫颈癌中的阳性表达率为84.44%,显著高于CIN(62.86%)及慢性宫颈炎(0.00%),差异有统计学意义(P<0.05);FAPα与宫颈癌的肌层浸润深度及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05);uPA与宫颈癌的FIGO分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FAPα和uPA可能共同参与宫颈癌的发生、发展和浸润转移。

关键词：宫颈癌成纤维活化蛋白α 尿激酶型纤溶酶原激活物免疫组织化学浸润转移

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宫颈癌和宫颈上皮内瘤变组织中成纤维活化蛋白α的表达

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郑州大学学报（医学版） 2015年第3期50卷 375-377页

作者：徐丽伟张梦真郑州大学第一附属医院妇产科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州450052

目的:检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中成纤维活化蛋白α(FAPα)的表达情况。方法:采用免疫组化SP法检测10例宫颈炎、40例CIN及81例宫颈癌组织中FAPα的表达。结果:FAPα在宫颈炎组织中不表达,宫颈癌组织中FAPα阳性表达率高于CI... 详细信息

目的:检测宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中成纤维活化蛋白α(FAPα)的表达情况。方法:采用免疫组化SP法检测10例宫颈炎、40例CIN及81例宫颈癌组织中FAPα的表达。结果:FAPα在宫颈炎组织中不表达,宫颈癌组织中FAPα阳性表达率高于CIN组织(χ2=81.706,P<0.001)。不同组织学类型(Z=2.069,P=0.039)、淋巴结转移情况(Z=3.382,P=0.001)和浸润深度(Z=2.185,P=0.029)的宫颈癌组织中FAPα表达水平比较,差异有统计学意义。结论:FAPα可能参与了宫颈癌的发生发展。

关键词：宫颈癌宫颈上皮内瘤变成纤维活化蛋白α 浸润转移

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MicroRNA-30a调控靶基因FAPα的表达及抑制胃癌增殖和转移的作用机制初探

MicroRNA-30a调控靶基因FAPα的表达及抑制胃癌增殖和转移的作用...

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作者：龚莉第三军医大学

学位级别：硕士

背景癌症是全球主要死亡原因之一,根据世界卫生组织最新数据显示,在2012年造成820万人死亡。因罹患胃癌造成的死亡人数排名位居第三,仅次于肺癌和肝癌。在男性最常见确诊癌症中胃癌位居第四,同时在女性最常见确诊癌症中胃癌位居第五[1]... 详细信息

背景癌症是全球主要死亡原因之一,根据世界卫生组织最新数据显示,在2012年造成820万人死亡。因罹患胃癌造成的死亡人数排名位居第三,仅次于肺癌和肝癌。在男性最常见确诊癌症中胃癌位居第四,同时在女性最常见确诊癌症中胃癌位居第五[1]。根据世界卫生组织-2014年癌症国家概况显示,在中国,胃癌在男性和女性中的死亡率分别占总的肿瘤死亡率的15.5%和13.3%。并且,其发病率居于第三位[2]。根据病因学和流行病学研究表明人胃组织癌变过程主要涉及以下四个阶段:慢性胃炎;萎缩;肠上皮化生;异型增生。其发生、发展与基因和环境因素的相互作用密切相关[3;4]。胃上皮细胞发生恶性转化生成恶性肿瘤的过程。而此过程中所涉及的具体机制目前并不十分清楚。因此,针对胃癌致病机制的深入研究,有助于寻找稳定可靠的生物标志物以及治疗靶点,用于胃癌的早期检测及治疗以提高患者预后。。microRNA是一类长度大约为22nt的内源性非编码RNA,通过与基因的3’UTR片段结合从而靶向调控基因的表达,参与了细胞凋亡、增殖、代谢等多个生理过程。近年来,microRNA作为肿瘤研究中的热点,一系列与胃癌发生和发展相关的 miRNAs,如 miR-25、 miR-141和 miR-22等相继被报道[5-7]。本课题组在前期基因芯片结果中发现多个microRNA在胃癌组织中异常表达,包括 miR-30a。 miR-30a属于 miR-30家族,其他成员还包括 miR-30b、 miR-30c、 miR-30d、 miR-30e,目前 miR-30家族在结肠癌,肺癌,肾细胞癌等多种肿瘤中已有报道,但它们在肿瘤中发挥的作用不尽相同[8-10]。虽然多数肿瘤研究中 miR-30a表达下调,但在其胃癌中的表达水平及作用机制还有待阐明。尤其是 miR-30a在调控胃癌发展过程中其关键靶基因的鉴定。因此,本研究针对 miR-30a在胃癌中的作用及其机制进行了初步的研究探讨。目的明确 miR-30a在人胃癌组织以及癌旁正常胃粘膜组织中的表达情况,预测和鉴定 miR-30a新的靶基因,阐明 miR-30a在胃癌发展进程中可能通过对靶基因的调控影响肿瘤细胞生长、转移,以及 miR-30a可能作为新的胃癌诊断标志物和治疗靶点。方法1.分析 miR-30a在胃癌中的表达情况以及其表达水平与临床特征相关性Trizol法提取病人胃癌组织及其癌旁组织样本中的总RNA,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)相对定量方法检测 miR-30a的表达水平。结合相应临床资料,分析 miR-30a表达水平的高低与胃癌患者的年龄、TNM分期以及淋巴结转移有无相关性。统计分析TCGA数据库中 miR-30a在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况。2.检测 miR-30a对胃癌细胞增殖、转移能力的影响在SGC-7901和BGC-823两株胃癌细胞株中转染 miR-30amimic或 miR-30ainhibitor对其进行过表达或抑制其表达,检测其对肿瘤细胞增殖、转移能力的影响。在SGC-7901细胞中转染 miR-30aagomir,检测其肿瘤细胞腹腔播散转移的情况。3.鉴定 miR-30a在胃癌中新的靶基因及其功能利用Target Scan数据库预测 miR-30a的靶基因,结合文献调研在组织样本中对候选靶基因FAPα、PDGFRB和WISP1进行初筛。构建含有 miR-30a结合位点的FAPα3’UTR片段,连接荧光素酶报告载体,通过双荧光素酶报告基因活性实验鉴定FAPα为 miR-30a的靶基因。统计分析TCGA数据库中胃癌组织中FAPα的表达情况。在SGC-7901细胞中转染 miR-30a mimic,通过q RT-PCR和Western blot对FAPα的表达水平进行检测。在BGC-823和SGC-7901细胞中转染含有FAPαCDS区域的质粒,检测其对胃癌细胞增殖、转移的影响。将过表达FAPα质粒与 miR-30a mimic共转染SGC-7901细胞,验证 miR-30a对FAPα的功能调节。结果1. miR-30a在29例人胃癌组织样本中的表达水平显著低于之配对的癌旁正常组织(P<0.05)。 miR-30a表达水平的高低与胃癌患者的TNM分期有统计学差异(P<0.05),而与患者的年龄以及淋巴结转移情况的无统计学差异。对TCGA数据库中胃癌组织样本分析发现, miR-30a胃癌组织样本中的表达显著低与癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。2.在SGC-7901和BGC-823过表达 miR-30a后,SGC-7901和BGC-823细胞的增殖能力和转移能力受到明显抑制(P<0.05)。而在抑制了 miR-30a的表达后,两株细胞的增殖能力和转移能力相对于NC组有了显著增强(P<0.05)。在腹腔播散实验

关键词：胃癌 microRNA-30a 成纤维活化蛋白α

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