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尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化与性质鉴定

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中国水产科学 2015年第4期22卷 638-644页

作者：单瑞后王松王骏王军汝少国中国海洋大学海洋生命学院中国水产科学研究院黄海水产研究所山东出入境检验检疫局

采用Sephacryl S-300过滤层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合的方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)成熟卵子匀浆液中分离纯化出了一种高分子量的蛋白。该蛋白能被Schiff试剂、甲基绿和苏丹黑B着色,Western blot显... 详细信息

采用Sephacryl S-300过滤层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析相结合的方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)成熟卵子匀浆液中分离纯化出了一种高分子量的蛋白。该蛋白能被Schiff试剂、甲基绿和苏丹黑B着色,Western blot显示能被金鱼卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)多克隆抗血清特异性识别,在非变性条件下分子量约为560 k D,在SDS变性条件下分子量约为112 k D,结果表明分离纯化的蛋白是一种含有糖、磷、脂基团的蛋白,符合鱼类Lv的性质,且与金鱼Lv有免疫交叉反应,从蛋白的性质和免疫原性以及分子量大小等角度判断,本研究获得的高纯度蛋白为尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白;纯化的罗非鱼Lv在反复冻融、37℃及60℃处理条件下均未出现降解,表明罗非鱼Lv比鱼类卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vtg)更为稳定。研究结果为罗非鱼Lv抗体的制备奠定了基础。

关键词：尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白纯化性质鉴定

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抗pS2/TFF1单克隆抗体的性质鉴定

中国免疫学杂志 2002年第10期18卷 688-689页

作者：刘彩云杜红孙素莲北京大学临床肿瘤学院乳癌中心北京市肿瘤防治研究所北京100034

乳腺癌发病率在女性恶性肿瘤中占首位并呈逐年上升趋势，激素依赖性乳腺癌适于激素疗法。睢激素调节蛋白pS2~+患者的无病生存期和总生存期比pS2~-患者长并有较好的预后，同时检测乳腺癌中ER（雌激素受体）、PR（孕激素受体）、pS2蛋白... 详细信息

乳腺癌发病率在女性恶性肿瘤中占首位并呈逐年上升趋势，激素依赖性乳腺癌适于激素疗法。睢激素调节蛋白pS2~+患者的无病生存期和总生存期比pS2~-患者长并有较好的预后，同时检测乳腺癌中ER（雌激素受体）、PR（孕激素受体）、pS2蛋白水平能指导医生更有效地进行内分泌治疗，提高治愈率。pS2蛋白水平检测常用简单、明确的IHC法，所用pS2 McAb均为进口单抗，价格昂贵，批间不稳定，而国内尚无pS2 McAb制品。本文制备的pS2 McAbS，可用于乳腺癌组织中pS2蛋白检测。

关键词： pS2 TFF1 单克隆抗体性质鉴定

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典型废油指纹分布特征及性质鉴定

广西大学学报（自然科学版） 2021年第4期46卷 1091-1100页

作者：吴烈善杨肖娜王鑫平刘小萍李青倩梁柳玲广西大学资源环境与材料学院广西南宁530004 国家海洋局北海环境监测中心山东青岛266033 广西壮族自治区生态环境监测中心广西南宁530028

为了研究废油指纹分布特征,并对废油性质进行鉴定,采用气相色谱质谱联用仪对5种典型废油样中的正构烷烃、多环芳烃、生物标志类化合物信息及物理性质进行分析研究。结果表明:废制动机油样品中未检测出正构烷烃、甾烷和萜烷类化合物,为... 详细信息

为了研究废油指纹分布特征,并对废油性质进行鉴定,采用气相色谱质谱联用仪对5种典型废油样中的正构烷烃、多环芳烃、生物标志类化合物信息及物理性质进行分析研究。结果表明:废制动机油样品中未检测出正构烷烃、甾烷和萜烷类化合物,为非矿物油,其他4种油样含有矿物油特有的指纹信息,通过物理性质比对判断为废矿物油。废齿轮油、自动变速器油、废机油2#中萜类化合物含量最为丰富,在废制动机油分布较为丰富;废机油2#的甾类化合物含量最为丰富,废齿轮油次之;废制动机油中不含有任何种类的生物标志化合物。多环芳烃的指纹分析中,废机油1#的萘类化合物含量最高,其他3种废矿物油菲类含量最高。研究成果对完善废矿物油指纹分布特征、性质鉴定具有重要意义。

关键词：废油性质鉴定指纹分布

酶解海鲈鱼鳞制备抗氧化肽的工艺研究和性质鉴定

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中国食品添加剂 2021年第10期32卷 29-37页

作者：洪燕婷黎明职业大学轻工学院泉州362000

采用响应曲面法优化海鲈鱼鳞酶解制备抗氧化肽的工艺并对其活性性质进行表征研究。以海鲈鱼鳞为原料,经物理处理后,采用生物酶解制备抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验考察料液比、酶解pH、酶添加量、酶解温度、酶... 详细信息

采用响应曲面法优化海鲈鱼鳞酶解制备抗氧化肽的工艺并对其活性性质进行表征研究。以海鲈鱼鳞为原料,经物理处理后,采用生物酶解制备抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为评价指标,采用单因素试验考察料液比、酶解pH、酶添加量、酶解温度、酶解时间对制备多肽的抗氧活性的影响,在单因素基础上选择响应面优化确定酶解工艺条件,并对最优工艺下酶解的多肽的氨基酸组成和分子量分布进行检测。结果表明,在试验范围内,复合蛋白酶酶解效果最佳,其在料液比11.5∶1,酶解pH8,酶添加量8000U/g,酶解温度45℃、酶解时间3h的工艺条件下,制备的多肽DPPH自由基清除能力最强,达到69.10%;相对分子质量主要分布区间为在180~1000u,其中180~500u占比最高,达到47.19%;富含甘氨酸、脯氨酸、谷氨酸、丙氨酸等17种氨基酸,且含有色氨酸以外的7种人体必需氨基酸。

关键词：海鲈鱼鳞酶解抗氧化肽性质鉴定

长白山核桃楸种仁球蛋白分离纯化、性质鉴定及其功能性质研究

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长白山核桃楸种仁球蛋白分离纯化、性质鉴定及其功能性质研究

作者：王晓飞吉林农业大学

学位级别：硕士

球蛋白是长白山核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)种仁贮藏蛋白主要组分之一,也是深度开发和利用核桃蛋白资源深加工产品的主要成分。本文以脱脂核桃粕为原料,采用改进的Osborne法提取核桃楸球蛋白(JMG)。首先通过单因素试验研究提取... 详细信息

球蛋白是长白山核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)种仁贮藏蛋白主要组分之一,也是深度开发和利用核桃蛋白资源深加工产品的主要成分。本文以脱脂核桃粕为原料,采用改进的Osborne法提取核桃楸球蛋白(JMG)。首先通过单因素试验研究提取液种类、料液比、提取液pH对核桃球蛋白提取率和纯度的影响。最后通过正交试验,确定提取核桃楸球蛋白最佳组合为:提取液的种类为PBS,料液比为1:10,提取液pH为7.5,此条件下所得球蛋白纯度为80.71±1.02%。随后对球蛋白粗品进行分离纯化。先用弱阴离子交换柱层析,洗脱液分别为A:50mmol/L KH2P04‐Na2HP04,pH7.5(PBS),B:50mmol/L KH2P04‐Na2HP04,0.6mol/L NaCl pH7.5,用梯度0-0.6mol/L NaCl进行线性梯度洗脱15倍柱体积,流速1.0mL/min,5 mL/管分管收集。再用HiPrep16/60 Sephacryl S-200 HR分子筛过滤柱层析,洗脱液为C:含有0.2 mol/L NaCl的50mmol/L KH2P04‐Na2HP04,pH7.5,上样体积为2.0 mL,以0.2mL/min的流速洗脱。将纯化所得核桃11S球蛋白(JSG)分别进行还原型SDS-PAGE和非还原型SDS-PAGE检测。还原型SDS-PAGE显示两条带,亚基分子量分别为3kDa和0kDa。非还原型电泳条带显示为单一条带,分子量约为0kDa。将两个亚基分别进行MALDI-TOF/TOF MS鉴定,3kDa亚基和0kDa与NCBI数据库中的Juglans regia 11S球蛋白有很高的序列同源性。本文对长白山核桃楸11S球蛋白的性质进行鉴定。氨基酸组分分析显示,JSG包含所有的必须氨基酸,其中赖氨酸是第一限制氨基酸。差示扫描量热(DSC)图谱仅出现单一吸热峰,JSG的变性温度为96.83℃,焓值(ΔH)为12.07 J/g。圆二色谱(CD)结果显示JSGβ-折叠含量最高,α-helices含量最低。JSG荧光光谱扫描显示,在盐酸胍和尿素的作用下,光谱发生明显红移,且盐酸胍对核桃11S球蛋白的变性程度较强,此外当pH大于10或pH值小于5时,最大荧光强度迅速降低且发生明显红移。将核桃楸球蛋白功能性质与大豆分离蛋白做对比,进行全面分析,为其在食品加工中的应用提供理论依据。核桃楸球蛋白必须氨基酸含量基本符合FAO/WHO成人推荐值;差示扫描量热仪析表明核桃球蛋白干粉出现两个吸热峰,变性温度分别为98.1℃和155.2℃,对应的焓值为13.06J/g、764.80J/g;傅立叶红外光谱分析其二级结构以α-螺旋为主;除起泡性和吸水性明显低于大豆分离蛋白外,溶解性、吸油性、起泡性、乳化性及乳化稳定性均与基本其相当,甚至优于大豆分离蛋白。

关键词：核桃楸球蛋白 11S球蛋白分离纯化性质鉴定功能性质

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银杏果仁中抗菌蛋白的分离纯化及性质鉴定

银杏果仁中抗菌蛋白的分离纯化及性质鉴定

作者：牛卫宁西北农林科技大学

学位级别：硕士

植物在生长过程中需要从富含微生物的环境中获取全部营养物质，但它们却很少被感染。这是因为植物在长期进化过程中形成了各自特有的抗菌途径，例如，为了抵御病原微生物的感染，植物生成了多类具有抗菌作用的次生代谢产物或蛋白质。其... 详细信息

植物在生长过程中需要从富含微生物的环境中获取全部营养物质，但它们却很少被感染。这是因为植物在长期进化过程中形成了各自特有的抗菌途径，例如，为了抵御病原微生物的感染，植物生成了多类具有抗菌作用的次生代谢产物或蛋白质。其中，抗菌蛋白在植物防御反应中扮演非常重要的角色。我们发现银杏具有很强的抗病能力，因此，本实验的目的旨在从银杏果仁中分离纯化出一种抗菌蛋白并对其性质进行研究，从而为克隆其基因和研究其抗菌机理奠定基础。本实验以银杏果仁为研究材料，经磷酸缓冲液抽提，40％-80％(NH)SO分级盐析、CM-52离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤等步骤分离纯化到一种抗菌蛋白。并对其分子量、等电点、氨基酸组成、抗菌活性、热稳定性等性质进行了分析，主要获得以下结果： 1、从150g银杏果仁中纯化到4.4mg抗菌蛋白。该蛋白在SDS-PAGE上显示单一条带，其表观分子量为13000Da。 2、该蛋白在等电聚焦电泳中显示单一条带，等电点为9.5，是一种碱性蛋白。 3、氨基酸组成分析表明，此蛋白富含精氨酸和丙氨酸，而缺少半胱氨酸。碱性氨基酸占22％，与等电聚焦所测定蛋白质等电点较高的结果相一致。氨基酸残基总数为101个。 4、纯化的蛋白对黄瓜镰刀孢菌(Fusarium oxysporum)、瓜类炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、小麦全蚀病菌(Caeumannomyces graminis)等真菌有很强的抑制作用，而且对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia Coli等细菌也有一定的抑制作用。 5、该蛋白具有较高的热稳定性，在90℃下处理30min，对供试的黄瓜镰刀孢菌仍保持很强的抑制作用。

关键词：银杏抗菌蛋白蛋白质纯化性质鉴定

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶2709的纯化与性质鉴定

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研究生教育研究 1992年第S1期 63-72页

作者：郑屹

本文报导了目前国内酶制剂工业的主要产品——地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的纯化方法的建立,并从蛋白质工程的需要对2709蛋白酶进行了酶学性质的研究。结果表明,2709蛋白酶具有比活高,热稳定性好,耐碱能力较强等优点。因此地衣芽孢杆菌(Baci... 详细信息

本文报导了目前国内酶制剂工业的主要产品——地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的纯化方法的建立,并从蛋白质工程的需要对2709蛋白酶进行了酶学性质的研究。结果表明,2709蛋白酶具有比活高,热稳定性好,耐碱能力较强等优点。因此地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)2709是一个极具有遗传工程改造潜力的优良菌株,将成为新的蛋白质工程材抖。

关键词：碱性蛋白酶纯化性质鉴定地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶2709

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鲭鱼抗氧化肽的性质鉴定及稳定性研究

武汉轻工大学学报 2023年第3期42卷 16-22页

作者：颜阿娜洪燕婷蔡琪琪王琳王毅毅黄茂坤黎明职业大学轻工学院泉州362000

在酶解鲭鱼蛋白制取抗氧化肽的基础上,测定蛋白肽的相对分子质量分布情况、氨基酸含量、研究温度、pH、金属离子、食品辅料、食品添加剂对鲭鱼多肽抗氧化活性的影响。结果表明:鲭鱼抗氧化肽分子量主要分布在180~1 000 Da,其中180~500 D... 详细信息

在酶解鲭鱼蛋白制取抗氧化肽的基础上,测定蛋白肽的相对分子质量分布情况、氨基酸含量、研究温度、pH、金属离子、食品辅料、食品添加剂对鲭鱼多肽抗氧化活性的影响。结果表明:鲭鱼抗氧化肽分子量主要分布在180~1 000 Da,其中180~500 Da占比最高,达61.92%;鲭鱼抗氧化肽含甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸等17种氨基酸,且含有8种人体必需氨基酸。适当升温(70℃左右)能提高鲭鱼多肽抗氧化活性,但超高温不利于其抗氧化活性的稳定;鲭鱼抗氧化肽最适宜加工pH为4~6,金属离子Ca^(2+)和低浓度的K+对鲭鱼多肽抗氧化活性影响不显著,Cu^(2+)和Mg^(2+)则会降低其抗氧化活性。低浓度的NaCl和蔗糖对鲭鱼多肽抗氧化活性影响小,苯甲酸钠和山梨酸钾在规定使用浓度范围内,鲭鱼多肽自由基清除能力变化不大。经胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,DPPH自由基清除能力保持率分别为84%和65%。该研究对鲭鱼抗氧化肽作为功能性配料用于食品开发具有指导意义。

关键词：鲭鱼抗氧化肽性质鉴定稳定性

蚯蚓纤溶酶的提取、性质鉴定和溶介血栓的研究

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兰州大学学报(自然科学版) 1986年第1期 95-100页

作者：路英华金汝成

从不同品种蚯蚓中提纯了两种以上纤溶酶,具有强烈的溶介纤维蛋白的作用.测定了此酶在蚯蚓体内的活性分布、鉴定了它的各种物化性质,如最适 PH、合适操作温度、PH 和温度稳定范卫、分子量、等电点等.测定了它对多种底物的作用,被各种抑... 详细信息

从不同品种蚯蚓中提纯了两种以上纤溶酶,具有强烈的溶介纤维蛋白的作用.测定了此酶在蚯蚓体内的活性分布、鉴定了它的各种物化性质,如最适 PH、合适操作温度、PH 和温度稳定范卫、分子量、等电点等.测定了它对多种底物的作用,被各种抑制剂抑制的程度,说明此酶很可能是含金属的胰蛋白酶类酶.做了此酶的溶血栓作用、药理毒理试验,证明长期口饲动物是安全无毒的,有希望作为新溶栓药应用于临床.

关键词：小白鼠蚯蚓活性分布祛风湿药纤溶酶血栓腹腔注射性质鉴定磷酸缓冲液胰蛋白酶抑制剂纤溶活性毒性试验生理盐水口饲匀浆静注