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基于RNA测序探讨养心通脉方治疗冠心病心气虚证的作用机制

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中医学报 2024年

作者：黎妍张磊宋佳园王建国湖南中医药大学湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室

目的：基于RNA测序技术并结合生信分析，筛选冠心病心气虚证型大鼠的潜在生物标志物，寻找养心通脉方干预冠心病心气虚证的作用靶点。方法：采用大鼠力竭游泳并皮下注射异丙肾上腺素的方法建立冠心病心气虚证大鼠模型。采用RNA测序的方... 详细信息

目的：基于RNA测序技术并结合生信分析，筛选冠心病心气虚证型大鼠的潜在生物标志物，寻找养心通脉方干预冠心病心气虚证的作用靶点。方法：采用大鼠力竭游泳并皮下注射异丙肾上腺素的方法建立冠心病心气虚证大鼠模型。采用RNA测序的方法寻找冠心病心气虚证大鼠差异基因并进行分析。采用观察大鼠宏观行为表现、超声心电图检测、心功能检测、ELISA、组织染色切片等方法对养心通脉方治疗冠心病心气虚证的作用进行验证。结果：造模组大鼠出现明显心气虚证的宏观行为表现，与空白组相比，模型组大鼠心电图显示出QRS波变宽、ST段抬高（P＜0.01）；与空白组相比，造模组大鼠血清cAMP和ANP水平显著提高（P＜0.01）；与空白组相比，模型组大鼠EF、FS水平显著降低（P＜0.01），LVIDd、LVIDs水平明显升高（P＜0.01）；与模型组相比，中药养心通脉方处理后，大鼠EF、FS水平均明显上升（P＜0.01），而LVIDd、LVIDs均显著下降（P＜0.01）；HE染色结果显示，心肌横纹在造模组中显示出明显的变性、坏死，以及间质纤维结缔组织增生和炎细胞浸润，但中药组明显改善。RNA测序结果显示共有1057个差异基因参与养心通脉方治疗冠心病心气虚证大鼠的作用过程。对差异基因进行GO分析，发现差异表达基因富集于细胞周期、有丝分裂细胞周期、染色体分离、蛋白质结合等重要生物过程；KEGG结果显示表达差异基因可富集于人T细胞白血病病毒1感染、细胞黏附分子、细胞周期、DNA复制、T细胞受体信号等重要通路。通过互作分析筛选出5个核心基因：Mcm7（Mini chromosome maintenance 7，微小染色体维持基因7）、Mcm4（Mini chromosome maintenance 4，微小染色体维持基因4）、Mcm6（Mini chromosome maintenance 6，微小染色体维持基因6）、Rfc3（Replication Factor C Subunit 3，复制因子C亚基3）、Rfc5（Replication Factor C Subunit 5，复制因子C亚基5）。结论：冠心病心气虚证大鼠存在差异表达基因，养心通脉方可能通过调控Mcm7、Mcm4、Mcm6、Rfc3、Rfc5等差异基因干预冠心病心气虚证的发生发展。

关键词：冠心病心气虚证 RNA测序养心通脉方

芪附益心方治疗慢性心力衰竭心气虚证患者的临床疗效

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中国实验方剂学杂志 2023年第23期29卷 98-105页

作者：徐朝辉钟逸航史天云杨佳慧柳智瑞万琪琪刘永明上海中医药大学附属曙光医院上海201203 安徽省中西医结合医院上海中医药大学附属曙光医院安徽医院合肥230011

目的:探讨芪附益心方治疗慢性心力衰竭(简称慢性心衰)心气虚证患者的临床疗效及安全性,为芪附益心方治疗慢性心衰提供客观的、科学的临床证据,旨在推动芪附益心方的临床应用和转化。方法:选取上海中医药大学附属曙光医院2022年9月至2023... 详细信息

目的:探讨芪附益心方治疗慢性心力衰竭(简称慢性心衰)心气虚证患者的临床疗效及安全性,为芪附益心方治疗慢性心衰提供客观的、科学的临床证据,旨在推动芪附益心方的临床应用和转化。方法:选取上海中医药大学附属曙光医院2022年9月至2023年5月符合标准的慢性心衰心气虚证患者106例,随机分为观察组及对照组(每组各53例)。两组均予以慢性心衰西医常规治疗,观察组在此基础上予以芪附益心方加载治疗,对照组则予以安慰剂,治疗疗程为12周。通过观察患者治疗前后纽约心脏协会(NYHA)心功能分级、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、可溶性生长刺激表达基因蛋白2(sST2)、左室射血分数(LVEF)、舒张早期二尖瓣血流最大流速(E)与舒张早期二尖瓣环运动速度(e')的比值(E/e')、左心室舒张末期内径(LVEDD)、中医证候积分、运动耐量评价指标6 min步行试验(6MWT)、生活质量评价指标明尼苏达心力衰竭生活质量调查表(MLHFQ)和堪萨斯心肌病患者生活质量量表(KCCQ)及其他安全性指标。结果:最终完成试验观察病例102例,观察组和对照组各51例;观察组治疗后心功能分级改善显效及有效患者42例,总有效率为82.35%;对照组治疗后心功能分级改善显效及有效患者32例,总有效率为62.75%,观察组治疗后心功能疗效总有效率明显优于对照组(χ^(2)=4.923,P心气虚证患者的心功能、中医证候、运动耐量及生活质量,其机制可能与抑制心肌纤维化程度有关。

关键词：慢性心力衰竭心气虚证芪附益心方心肌纤维化临床疗效

基于非靶向代谢组学探讨冠心病心气虚证尿液潜在生物标志物及生物学基础

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基于非靶向代谢组学探讨冠心病心气虚证尿液潜在生物标志物及生物...

作者：秦士焱湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:(1)研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)心气虚证大鼠尿液代谢组学特征,挖掘潜在生物标志物,探讨证候实质与科学内涵,为中医临床诊治CHD心气虚证提供实验依据。(2)建立养心通脉方干预组与酒石酸美托洛尔干预组的中、西药干预模型,... 详细信息

目的:(1)研究冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)心气虚证大鼠尿液代谢组学特征,挖掘潜在生物标志物,探讨证候实质与科学内涵,为中医临床诊治CHD心气虚证提供实验依据。(2)建立养心通脉方干预组与酒石酸美托洛尔干预组的中、西药干预模型,分析两种药物对CHD心气虚证大鼠尿液代谢产物的影响差异。通过数据库寻找可能的代谢通路,进一步探索该证型辨证的物质基础和客观指标。从分子水平上阐明CHD中医证候的多因素调控。方法:对大鼠进行CHD心气虚证造模,分为健康空白对照组、CHD心气虚证模型组、养心通脉方干预组和酒石酸美托洛尔干预组,采用控食、强迫负重游泳及大剂量心得安法造模,连续力竭游泳21天,心得安灌胃4天,异丙肾上腺素皮下注射5天。模型验证后中、西药组分别给予养心通脉方汤剂、酒石酸美托洛尔悬浊液灌胃14天。待采集各组尿液样本后,运用超高效液相色谱-质谱联合技术(UPLC-MS)进行非靶向代谢物检测,使用多元统计和单变量统计方法鉴定差异代谢物,筛选潜在生物标志物。通过KEGG分析、MSEA分析、拓扑分析及趋势分析寻找差异代谢通路和最相关的通路。结果:(1)CHD心气虚证模型组尿液代谢组学情况:共鉴定出249种差异代谢物,28种物质上调,221种物质下调。3种潜在生物标志物:盐酸吡哆醇、1-甲基-6-氧代吡啶-3-甲酰胺、2-氧代-3-苯基丙酸酯。最相关的4条代谢通路:维生素B6代谢、烟酸盐和烟酰胺代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢。(2)养心通脉方干预组尿液代谢组学情况:共鉴定出20种差异代谢物,12种物质上调,8种物质下调。2种潜在生物标志物:6-磷酸葡萄糖酸、尿嘧啶。最相关的2条代谢通路:磷酸戊糖途径、嘧啶代谢。(3)酒石酸美托洛尔干预组尿液代谢组学情况:共鉴定出37种差异代谢物,32种物质上调,5种物质下调。3种潜在生物标志物:1-甲基-6-氧代吡啶-3-甲酰胺、D-谷氨酰胺、尿嘧啶。最相关的3条代谢通路:烟酸盐和烟酰胺代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、嘧啶代谢。结论:(1)3种小分子化合物可作为CHD心气虚证模型的潜在生物标志物,其与辅因子和维生素代谢、氨基酸代谢、碳水化合物代谢有关。(2)养心通脉方干预心气虚证可纠正2种异常代谢物的趋向,其治疗机制可能与碳水化合物代谢、核苷酸代谢有关。(3)酒石酸美托洛尔干预心气虚证可纠正3种异常代谢物的趋向,其治疗机制可能与氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢、核苷酸代谢有关。

关键词：冠心病心气虚证尿液代谢组学养心通脉方酒石酸美托洛尔

基于LC-MS/MS探讨冠心病心气虚证大鼠心肌组织潜在生物标志物

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基于LC-MS/MS探讨冠心病心气虚证大鼠心肌组织潜在生物标志物

作者：朴林湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:(1)通过建造冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary heart disease,CHD)心气虚大鼠模型,利用代谢组学探讨心肌组织代谢物特征,探讨中医证候的可能生物学机制。(2)通过检测养心通脉方干预后模型大鼠心肌组织的特异代谢物以及相关通路,... 详细信息

目的:(1)通过建造冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary heart disease,CHD)心气虚大鼠模型,利用代谢组学探讨心肌组织代谢物特征,探讨中医证候的可能生物学机制。(2)通过检测养心通脉方干预后模型大鼠心肌组织的特异代谢物以及相关通路,探讨养心通脉方治疗CHD心气虚证的潜在机制。为进一步探讨临床治疗的分子机制提供参考。方法:40只大鼠分为2组,每组10只。正常组10只,余下30只建造CHD心气虚证模型,方法如下:采用控食、强迫负重游泳及大剂量心得安联合造模,连续力竭游泳21天,心得安灌胃4天,异丙肾上腺素皮下注射5天。模型验证后,将模型大鼠分为三组,模型组,养心通脉方组和酒石酸美托洛尔组。对后两组分别给予养心通脉方、酒石酸美托洛尔悬浊液灌胃14天。干预结束后,处死大鼠,采集心肌组织样本,运用UPLC-MS技术进行非靶向代谢物检测,使用多元和单变量统计方法鉴定差异代谢物,筛选潜在生物标志物。通过KEGG、MSEA、拓扑及趋势分析寻找差异代谢相关通路。结果:(1)CHD心气虚证模型组心肌代谢组学情况:模型组与正常组间共鉴定出115种差异代谢物,8种潜在生物标志物,35种代谢集,12条代谢通路。(2)养心通脉方中药干预组心肌组织代谢组学情况:养心通脉方组和模型组间共鉴定出41种差异代谢物,5种潜在生物标志物,1种代谢集,1条代谢通路。(3)酒石酸美托洛尔西药干预组心肌组织代谢组学情况:西药组和模型组间共鉴定出81种差异代谢物,8种潜在生物标志物,9种代谢集,6条代谢通路。结论:CHD心气虚证模型大鼠存在相关代谢物,而且中药养心通脉方干预后代谢物有变化,提示中药通过调控代谢途径其作用,进一步深入研究尤其在临本中验证以上问题是必要的。

关键词：冠心病心气虚证养心通脉方酒石酸美托洛尔心肌代谢组学

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心气虚证左室舒张功能的临床及实验研究

中国中西医结合杂志 1993年第3期13卷 139-143页

作者：程伟史载祥武泽民张铁中王兵周明湖北中医学院附属医院心内科中日友好医院

采用微机检测心机械图,获取心功能参数。结果64例心气虚证与正常人比较,左室舒张和收缩功能均低下(P<0.01),而肺、脾胃、肾气虚证与正常人比较左室舒张功能参数无显著差别;心气虚证患者,左室舒张性能指标舒张时间振幅指数(DATI)较收缩... 详细信息

采用微机检测心机械图,获取心功能参数。结果64例心气虚证与正常人比较,左室舒张和收缩功能均低下(P气虚证与正常人比较左室舒张功能参数无显著差别;心气虚证患者,左室舒张性能指标舒张时间振幅指数(DATI)较收缩性能指标左室射血前期/左室射血期(PEP/LVET)更为敏感,DATI和PEP/LVET异常率无显著差别,但两者正常、异常间有交叉,说明心气虚证有单纯心收缩或舒张功能异常。随机双盲法证实,益心补气的益心合剂能改善心气虚证异常的心收缩和舒张性能。实验选用狗急性心肌缺血动物模型,尝试性探讨缺血心肌的"心气"变化,短暂心肌缺血及复灌过程中"心气虚"表现,同临床结果一致。

关键词：心气虚证左心室功能病理

心气虚证模型大鼠脑内β淀粉样蛋白及其前体蛋白mRNA表达的变化

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中国老年学杂志 2012年第8期32卷 1637-1638页

作者：陈久林林水淼赵红彬邢三丽刘特郁志华上海市中医老年医学研究所上海200031

目的观察心气虚证模型大鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积及其前体蛋白(APP)mRNA表达。方法采用强迫跑步结合灌服盐酸普萘洛尔片(心得安)的方法建立心气虚证模型大鼠,将75只SD大鼠随机分为正常对照组、疲劳对照组、小、中和大剂量心得安+疲... 详细信息

目的观察心气虚证模型大鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积及其前体蛋白(APP)mRNA表达。方法采用强迫跑步结合灌服盐酸普萘洛尔片(心得安)的方法建立心气虚证模型大鼠,将75只SD大鼠随机分为正常对照组、疲劳对照组、小、中和大剂量心得安+疲劳组,用ELISA法检测其大鼠脑内Aβ1～40蛋白表达,用RT-PCR法检测脑内APP mRNA的表达。结果与正常对照组比较,在模型大鼠脑内Aβ1～40明显升高(P心气虚证模型大鼠大脑皮层可出现Aβ表达增高,可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有关。

关键词：心气虚证 β淀粉样沉积阿尔茨海默病

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心气虚证中医辨证规律的临床研究

中西医结合杂志 1990年第2期10卷 78-81页

作者：林谦霍艳明郭维琴郭自强屈贤琴王硕仁吕晞莹鲁伟星于维杰王兆海曹继萍王军华徐西廖家桢北京中医学院东直门医院

本文通过344例心气虚证患者(含19个西医病种)的分析,表明心气虚证的共性症状为疲乏、气短、心悸等。心气虚伴有心脏病者有血瘀、痰湿,水邪等兼证者最为常见,其中冠心病兼血瘀者多,风湿性心脏病兼水湿者多。心气虚不伴有心脏病者最常见... 详细信息

本文通过344例心气虚证患者(含19个西医病种)的分析,表明心气虚证的共性症状为疲乏、气短、心悸等。心气虚伴有心脏病者有血瘀、痰湿,水邪等兼证者最为常见,其中冠心病兼血瘀者多,风湿性心脏病兼水湿者多。心气虚不伴有心脏病者最常见的症状是心神不宁,多有失眠、健忘、多梦等表现。为此作者建议将前者称为"心气虚证",后者称为"心神不宁",以资区别。心脏病患者首先出现的证型是心气虚证;其最常见的标证是血瘀;水邪为患是心气虚证进一步恶化的征象。

关键词：心血管病心气虚证辨证规律

心气虚证模型大鼠学习记忆和脑内胆碱能系统变化

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中国老年学杂志 2010年第19期30卷 2782-2784页

作者：郁志华林水淼陈久林上海市中医老年医学研究所

目的观察心气虚证模型大鼠学习记忆和脑内皮层部位胆碱能系统的变化,探讨心气虚证模型大鼠学习记忆能力下降的机制,阐明中医"心主神明"的物质基础。方法 SD大鼠随机分为5组:正常对照组、疲劳对照组、小剂量普萘洛尔+疲劳组、中剂量普萘... 详细信息

目的观察心气虚证模型大鼠学习记忆和脑内皮层部位胆碱能系统的变化,探讨心气虚证模型大鼠学习记忆能力下降的机制,阐明中医"心主神明"的物质基础。方法 SD大鼠随机分为5组:正常对照组、疲劳对照组、小剂量普萘洛尔+疲劳组、中剂量普萘洛尔+疲劳组和大剂量普萘洛尔+疲劳组,采用强迫跑步加灌服普萘洛尔的方法建立心气虚证大鼠模型,采用Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,生化比色法检测乙酰胆碱酯酶(AchE),放免法检测M受体。结果大剂量普萘洛尔+疲劳组出现学习能力的降低,皮层AchE活性显著增高,M受体Rt值显著降低。结论心气虚证模型大鼠出现脑内胆碱能功能紊乱,可能是造成学习记忆能力下降的物质基础。

关键词：心气虚证乙酰胆碱酯酶 M受体

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心气虚证的因子分析研究

时珍国医国药 2013年第2期24卷 457-458页

作者：杨涛丁以艳黄磊吴承玉南京中医药大学江苏南京210046

目的探明心气虚证的主症、次症和舌脉表现,客观揭示心气虚证的本质,以指导临床辨证,并为病证的规范化及客观化服务。方法搜集古今文献及临床病案资料621例心气虚证患者,建立数据库,利用因子分析的方法对资料进行分析。结果心气虚证是以... 详细信息

目的探明心气虚证的主症、次症和舌脉表现,客观揭示心气虚证的本质,以指导临床辨证,并为病证的规范化及客观化服务。方法搜集古今文献及临床病案资料621例心气虚证患者,建立数据库,利用因子分析的方法对资料进行分析。结果心气虚证是以神疲乏力、胸闷、心悸为主症,以头晕、目眩、自汗、失眠等为次证、舌脉表现多见舌淡白、苔薄白、脉细弱等,心气虚可以进一步发展为心阳虚,也可波及肺、肾等其他脏腑,从而出现病位相兼与病性相兼。结论因子分析法可以应用于五脏系统病证规范研究,可以为病证规范化提供方法学研究平台。

关键词：心气虚证证素因子分析