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康氏木霉诱变菌株纤维素酶系的分离纯化与酶学特性研究

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现代食品科技 2015年第12期31卷 149-155,184页

作者：葛飞石贝杰唐尧朱龙宝李婉珍陶玉贵安徽工程大学生物与化学工程学院安徽芜湖241000

探讨来源于康氏木霉诱变菌株SG0026 10L发酵罐发酵液中纤维素酶系的分离纯化过程及其酶学性质。采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析柱和CM-Sepharose FF阳离子交换层析等分离纯化技术,从康氏木... 详细信息

探讨来源于康氏木霉诱变菌株SG0026 10L发酵罐发酵液中纤维素酶系的分离纯化过程及其酶学性质。采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析柱和CM-Sepharose FF阳离子交换层析等分离纯化技术,从康氏木霉诱变菌株发酵液中分离纯化得到3个电泳纯的纤维素酶系组分(内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶)。对纯化的电泳纯内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的酶活进行测定,发现3种酶的比活力分别为4.67±0.06 IU/mg、5.16±0.08 IU/mg和12.52±0.12 IU/mg。采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定其分子量,发现其分子量分别为78.1、91.2和83.1k Da。利用Linewaeaver-Burk法对3种酶的动力学参数进行测定,发现3种酶的Km值分别为3.84、6.62和6.21 mg/m L,Vmax值分别为2.29、1.74和2.19 mg/(min·m L)。在此基础上,对3种酶的反应温度和pH进行了研究,发现3种酶的最适反应温度分别为50、50和55℃,最适反应pH均为5.0。

关键词：纤维素酶康氏木霉纯化酶学性质

康氏木霉REMI突变株的差异表达蛋白分析(简报)

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分子细胞生物学报 2009年第1期42卷 77-81页

作者：胡仕凤朱木兰刘力行唐俊高必达陈捷湖南农业大学长沙410128 上海交通大学农业与生物学院上海200240 中国科学院上海植物生理生态研究所上海200032

纤维素占植物干重的35％-50％，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它的利用与转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。因此，产纤维素酶微生物的基因工程改造技术受到很大关注，成为当... 详细信息

纤维素占植物干重的35％-50％，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它的利用与转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。因此，产纤维素酶微生物的基因工程改造技术受到很大关注，成为当前研究热点之一。

关键词：康氏木霉纤维素酶 REMI技术双向电泳蛋白质

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康氏木霉木聚糖酶的分离纯化及特性

华南理工大学学报（自然科学版） 2006年第3期34卷 111-116页

作者：陆登俊肖凯军郭祀远郑必胜蔡妙颜华南理工大学轻化工研究所广东广州510640

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐和Sephadex G-100凝胶色谱等分离纯化技术，从康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵液中分离出木聚糖酶，纯化后的木聚糖酶经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳鉴定为单... 详细信息

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-25凝胶色谱脱盐和Sephadex G-100凝胶色谱等分离纯化技术，从康氏木霉（Trichoderma Koningii）发酵液中分离出木聚糖酶，纯化后的木聚糖酶经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝胶电泳鉴定为单一组分，其相对分子质量为55208．所得的木聚糖酶的最适反应温度为65℃，pH值为6．0．该酶稳定性较好，在30—60℃下放置2h能保持83％以上的酶活；在3．0-10．0的pH值范围内能保持85％以上的酶活．研究表明：金属离子Ba^2＋，Pb^2＋，Fe^2＋，Fe^2＋，Al^3＋和高浓度（12mmol/L）的Cu^2＋对木聚糖酶的活性有抑制作用，而Ca^2＋，Zn^2＋和4mmol／L的Cu^2＋对该酶反应有促进作用．该木聚糖酶作用于Birchwood木聚糖的米氏常数为5．37g/L，最大反应速率为0．94μmol／min．

关键词：木聚糖酶康氏木霉分离纯化酶活

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康氏木霉产酶发酵固体培养基优化研究

兰州大学学报（自然科学版） 2004年第3期40卷 66-71页

作者：靖德兵李培军郭伟张海荣中国科学院沈阳应用生态研究所辽宁沈阳110016 中国科学院研究生院北京100039

为利用廉价的培养基生产纤维素酶复合制剂,本实验采用培养基配方选择试验和双温度培养法对康氏木霉F244产酶特性进行了研究.在测定滤纸酶(FPA)、棉花酶、羧甲基纤维素酶(CMCase)、β-葡萄糖苷酶和果胶酶活力的基础上利用SPSS建立回归方... 详细信息

为利用廉价的培养基生产纤维素酶复合制剂,本实验采用培养基配方选择试验和双温度培养法对康氏木霉F244产酶特性进行了研究.在测定滤纸酶(FPA)、棉花酶、羧甲基纤维素酶(CMCase)、β-葡萄糖苷酶和果胶酶活力的基础上利用SPSS建立回归方程,全相关系数分别达到0.852,0.941,0.964,0.703,0.899,而后通过无约束规划求解找到最佳配方,并对酶活进行了预报和对比.结果表明:各酶活最大时对培养基各成分的含量要求不同;应用稻草粉质量分数20.3％,麸皮质量分数26.1％,(NH4)2SO4质量分数7.9％,水分质量分数45.7％的配方发酵时,F244的FPA、棉花酶、CMCase、β-葡萄糖苷酶、果胶酶活可望达14.1,20.1,43.9,21.6,16.8 IU/g,基本与里氏木霉Q9414在其推荐培养基上的产酶水平相当,而且该配方用料来源广泛,成本低廉,工艺简单,产品安全无毒.

关键词：康氏木霉滤纸酶羧甲基纤维素酶棉花酶 β-葡萄糖苷酶果胶酶固体培养基发酵优化纤维素酶复合制剂

康氏木霉纤维素酶转录因子ACEII与外切纤维二糖水解酶基因I(cbh1)启动子的结合分析

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中国生物工程杂志 2009年第10期29卷 60-63页

作者：凌敏梁纲覃拥灵李楠梁智群广西大学生命科学与技术学院南宁530004 广西医科大学生物化学与分子生物学教研室南宁530021

ACEI、ACEII和Xyr1是康氏木霉中调控纤维素酶基因表达的转录因子。体外实验已证实ACEI和Xyr1可与cbh1启动子上的287bp序列(-304bp^-18bp)结合从而调控cbh1基因转录,但ACEII是否可与此序列结合仍未清楚。为进一步研究ACEII调控纤维素酶... 详细信息

ACEI、ACEII和Xyr1是康氏木霉中调控纤维素酶基因表达的转录因子。体外实验已证实ACEI和Xyr1可与cbh1启动子上的287bp序列(-304bp^-18bp)结合从而调控cbh1基因转录,但ACEII是否可与此序列结合仍未清楚。为进一步研究ACEII调控纤维素酶基因表达的机制,利用PCR技术扩增康氏木霉ACEII DNA结合区的基因序列,并使其在大肠杆菌中表达。凝胶迁移率移动试验表明ACEII DNA结合区不能与cbh1启动子的287bp序列结合。提示了康氏木霉cbh1基因在诱导表达时起调控作用的主要是Xyr1,而不是ACEII。这对阐明真菌纤维素酶基因表达调控的分子机制具有重要的意义。

关键词： ACEII 纤维素酶外切纤维二糖水解酶基因I 凝胶迁移率移动试验康氏木霉

康氏木霉固体发酵生产纤维素酶优化研究——培养基用料与工艺条件优化

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食品科学 2004年第5期25卷 82-86页

作者：靖德兵李培军王力华孙铁珩台培东郭伟中国科学院沈阳应用生态研究所辽宁沈阳110016

培养基及培养条件的优化是降低酶制剂成本、提高酶活、实现其工业化生产的重要措施。本研究采用均匀设计U15(58)和双温度培养法(前30h恒温30℃,后续恒温27℃)进行康氏木霉产酶固体发酵生产纤维素酶,对滤纸酶、羧甲基纤维素酶、棉花酶、... 详细信息

培养基及培养条件的优化是降低酶制剂成本、提高酶活、实现其工业化生产的重要措施。本研究采用均匀设计U15(58)和双温度培养法(前30h恒温30℃,后续恒温27℃)进行康氏木霉产酶固体发酵生产纤维素酶,对滤纸酶、羧甲基纤维素酶、棉花酶、β-葡萄糖苷酶的活力进行回归分析,而后对各酶活方程求和得到纤维素酶的总活力回归方程并进行约束规划求解。结果表明:应用双温度培养法进行康氏木霉固体发酵生产纤维素酶时,在自然补给氧气,培养基pH自然(约6.5),并保持环境湿度约60%的条件下,72h是适宜的发酵周期;培养基构成以稻草粉50%, (NH4)2SO4 8%,麸皮42%,加水量以4.9倍的固体物质为宜;少量的Tween80有利于纤维素酶活力的提高。

关键词：康氏木霉固体发酵生产纤维素酶培养基用料工艺优化滤纸酶羧甲基纤维素酶棉花酶

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康氏木霉液体摇瓶发酵产纤维素酶的初步研究

食品科学 2003年第1期24卷 125-128页

作者：刘小杰何国庆袁长贵浙江大学食品科学与营养系杭州310029 杭州瑞霖食用化学研发中心杭州311500

本文以稻草为主要碳源,对几种真菌产纤维素酶的能力进行了比较研究,其中康氏木霉zj4产酶能力最强。研究了其纤维素酶的产生条件:以稻草粉为碳源、(NH4)2SO4为氮源、稻草与麦麸比为2∶1时,菌株产酶最高。该菌株产酶最适培养温度为28℃,... 详细信息

本文以稻草为主要碳源,对几种真菌产纤维素酶的能力进行了比较研究,其中康氏木霉zj4产酶能力最强。研究了其纤维素酶的产生条件:以稻草粉为碳源、(NH4)2SO4为氮源、稻草与麦麸比为2∶1时,菌株产酶最高。该菌株产酶最适培养温度为28℃,最适起始pH5.0,装液量30ml,转速200r/min,当培养时间为144h时,CMC和滤纸酶活均达到最高值,分别为453.2U/ml和45U/ml发酵液。

关键词：康氏木霉液体摇瓶发酵纤维素酶稻草粉生产能力

康氏木霉(P2)纤维素酶转化蔗髓纤维素成糖及生产SCP

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微生物学通报 1991年第4期18卷 214-217页

作者：张发群舒远才郝军张光恕周金燕中国科学院成都生物研究所

在30升卧式酶解罐和5升标准发酵罐中,进行了以蔗髓纤维素为基质,用康氏木霉(Trichoderma koningii)P2菌株产生的纤维素酶水解成糖生产单细胞蛋白的试验。10%的底物浓度可以得到较高的转化率。最适搅拌速度为10r/min,用酶量为2.21u/g底物... 详细信息

在30升卧式酶解罐和5升标准发酵罐中,进行了以蔗髓纤维素为基质,用康氏木霉(Trichoderma koningii)P2菌株产生的纤维素酶水解成糖生产单细胞蛋白的试验。10%的底物浓度可以得到较高的转化率。最适搅拌速度为10r/min,用酶量为2.21u/g底物,50℃酶促水解24小时,酶解液中还原糖含量为3—4%,底物得糖率49.5%,全纤维素转化率73.8%。用该酶解糖生产单细胞蛋白,试验了5升标准罐培养酵母的最适条件。

关键词：康氏木霉纤维素酶蔗髓纤维素

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康氏木霉固态发酵生产纤维素酶条件的研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2005年第11期33卷 99-102页

作者：张建新刘起丽李学梅吴云锋马威姜秋会梁树才河南师范大学生命科学学院西北农林科技大学植物保护学院陕西杨凌712100 河南科技学院植物保护系河南新乡453002 西北农林科技大学植物保护学院

以麸皮和玉米芯为主要原料,采用康氏木霉(Trichoderma koningn)固态发酵生产纤维素酶,并对影响纤维素酶活性的碳源和氮源配比、外加氮源、培养基初始pH值、培养时间和表面活性剂等因素进行了研究。结果表明,培养基碳源和氮源配比以麸... 详细信息

以麸皮和玉米芯为主要原料,采用康氏木霉(Trichoderma koningn)固态发酵生产纤维素酶,并对影响纤维素酶活性的碳源和氮源配比、外加氮源、培养基初始pH值、培养时间和表面活性剂等因素进行了研究。结果表明,培养基碳源和氮源配比以麸皮:玉米芯为3:2时最适合;外加氮源以质量分数0．8％硝酸铵产纤维素酶活性最高;培养基初始pH值为3．0时,纤维素酶活力最高,是对照的1．37倍;表面活性剂以质量分数0．50％“奇强”洗洁精对提高纤维素酶活性的作用最显著,较对照提高12．4％;培养时间为72 h时,纤维素酶活性最高。

关键词：康氏木霉纤维素酶固态发酵酶活性