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尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因功能分析

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内蒙古大学学报(自然科学版) 2024年

作者：冯欣茹侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院

本研究旨在对尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因进行功能分析。利用同源比对，通过PCR对FolSwe1基因及其侧翼序列进行扩增和测序，使用Split-Marker 技术构建该基因缺失突变盒，使用聚乙二醇（PEG）介导转化野生型原生质体，获得了FolS... 详细信息

本研究旨在对尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因进行功能分析。利用同源比对，通过PCR对FolSwe1基因及其侧翼序列进行扩增和测序，使用Split-Marker 技术构建该基因缺失突变盒，使用聚乙二醇（PEG）介导转化野生型原生质体，获得了FolSwe1基因缺失突变株，对突变体表型和致病力进行测定。构建荧光载体 pZESH1（pZWH1+EGFP+ FolSwe1)对FolSwe1蛋白进行亚细胞定位。结果显示，FolSwe1基因编码区为3219bp，含有一个内含子，长度为54bp，所测序列包括编码区上游1704bp，编码区下游为1694bp。表型观察发现，敲除突变体的菌丝比野生型短小且密实，菌落生长速度较慢，特别显著的变化是缺失突变体不再产生孢子，致病力也明显下降。亚细胞定位显示FolSwe1蛋白在培养时间较长菌丝的细胞膜中有荧光信号。综上所述，FolSwe1基因主要调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的孢子发生、菌丝营养生长和对亚麻的致病性。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSwe1基因 Split-Marker 基因敲除

尖孢镰刀菌亚麻专化型Folprp4基因参与调控菌丝生长和分生孢子发生

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中国生物工程杂志 2022年第3期42卷 13-26页

作者：董慧霞侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室呼和浩特010022

目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介... 详细信息

目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(ΔFolprp4)。构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验。结果:与野生型(hm)和异位插入突变体(ecFolprp4)相比,敲除突变体菌丝生长受到严重阻碍,当野生型和异位插入突变体长满整个平板时,敲除突变体菌落呈小点状。敲除突变体的另一个显著变化是ΔFolprp4的分生孢子产量显著下降。侵染实验表明,ΔFolprp4对亚麻幼苗的毒力显著降低。互补实验表明,该互补载体的回复子(Folprp4-C)在菌落形态、生长速率、分生孢子产量和毒力方面均恢复到了野生型菌株。结论:Folprp4基因与尖孢镰刀菌的菌丝生长、分生孢子发生和致病性有关。

关键词： Folprp4基因尖孢镰刀菌亚麻专化型 Split-Marker 基因敲除致病性

尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因参与调控分生孢子发生和菌丝生长

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华北农学报 2023年第6期38卷 175-183页

作者：李春阳侯占铭内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室内蒙古呼和浩特010022

通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生... 详细信息

通过对尖孢镰刀菌亚麻专化型Folcdc15基因敲除及敲除突变体互补试验,探究该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。对Folcdc15基因进行DNA测序后,使用Split-Marker技术,构建含有潮霉素抗性基因(hph)缺失盒。通过PEG介导法转入野生型原生质体,在含有潮霉素的选择培养基上进行转化子筛选,通过PCR正负筛选确定敲除突变体。利用pZWH1载体构建含有Folcdc15的互补载体pZLY1,将其转入敲除突变体中进行互补测验。与野生型hm相比,敲除突变体ko1菌落生长速率下降了73%,菌丝形态发生了显著改变,菌丝变短且分叉变多,分生孢子隔膜数量增多长度增加,分生孢子数量显著减少。亚麻侵染试验表明,ko1的致病力显著降低。通过互补测验发现,回复突变株ca1恢复了Folcdc15基因缺失带来的分生孢子产量及形态、菌落生长和形态及致病力的缺陷。Folcdc15参与调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的分生孢子发生及菌丝生长。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型亚麻枯萎病 Split-Marker Folcdc15 基因功能致病性

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尖孢镰刀菌亚麻专化型生物学特性研究

东北农业大学学报 2011年第7期42卷 50-56页

作者：潘虹关凤芝吴广文宋喜霞姜卫东王立群东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 黑龙江省农业科学院经济作物研究所哈尔滨150086

文章旨在研究尖孢镰刀菌亚麻专化型病原体的生物学特性。探索温度、pH、光照、培养基、碳源及氮源等条件对该病原体菌丝生长、分生孢子产生和萌发的影响。结果表明,该菌菌丝分别在30℃、pH 7、8条件下生长最快;持续黑暗及PDA培养基上生... 详细信息

文章旨在研究尖孢镰刀菌亚麻专化型病原体的生物学特性。探索温度、pH、光照、培养基、碳源及氮源等条件对该病原体菌丝生长、分生孢子产生和萌发的影响。结果表明,该菌菌丝分别在30℃、pH 7、8条件下生长最快;持续黑暗及PDA培养基上生长状况最好;可有效利用多种碳、氮源,其中以淀粉、氯化铵最适。分生孢子的产量及萌发率分别在25、30℃,pH 7、8条件下最高;光照亦利于孢子的产生和萌发;PSA培养基适于产孢,PDA培养基适于孢子萌发;所试条件的产孢及孢子萌发最适碳源分别为乳糖、果糖,氮源为氯化铵及L-半胱氨酸。系统掌握了该病原体的生物学特性,为亚麻田间病害防治提供了理论依据。

关键词：亚麻枯萎病尖孢镰刀菌亚麻专化型生物学特性

Folpcs1基因对尖孢镰刀菌亚麻专化型的无性繁殖和营养生长的调控

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中国生物工程杂志 2020年第3期40卷 48-64页

作者：郭晶侯占铭内蒙古师范大学生物科学与技术学院呼和浩特010022

背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalar... 详细信息

背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalary phialides)产生分生孢子。目的:鉴定pcs1同源基因Folpcs1在镰刀菌中的作用。方法:对Folpcs1的基因组DNA及cDNA测序后,利用Split-Marker基因敲除技术破坏该基因。构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)转化野生型原生质体法,获得了Folpcs1基因缺失突变株(ΔFolpcs1),并利用PCR法进行正负筛选。为了对缺失突变体互补,将pcs1及其上下游侧翼序列构建到pZWH1中后,回复到ΔFolpcs1中。结果:测序结果表明,有一个654bp的内含子,cDNA序列长度为2 846bp。通过观察发现,敲除突变体的生长速率明显降低,培养基中几乎观察不到分生孢子。回复突变体回复了野生型菌株的生长速率及分生孢子产生过程。结论:说明Folpcs1负责菌丝的营养生长和分生孢子的产生。

关键词：尖孢镰刀菌亚麻专化型 Folpcs1 Split-Marker 基因敲除