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中华实验外科杂志 2012年第10期29卷 1927-1929页

作者：江志清张孝斌武汉大学人民医院普外科 430060 武汉大学人民医院泌尿外科 430060

目的观察感染小鼠甲胎蛋白（mAFP）和4-1BB配体（m4—1BBL）融合基因对小鼠树突状细胞（DC）生物学特性的影响。方法构建含mAFP和m4—1BBL的融合基因腺病毒Ad-mAFP-内部核糖体起始位点（IRES）-m4-1BBL，感染H22肝癌细胞，Westernblot... 详细信息

目的观察感染小鼠甲胎蛋白（mAFP）和4-1BB配体（m4—1BBL）融合基因对小鼠树突状细胞（DC）生物学特性的影响。方法构建含mAFP和m4—1BBL的融合基因腺病毒Ad-mAFP-内部核糖体起始位点（IRES）-m4-1BBL，感染H22肝癌细胞，Westernblot法检测mAFP和4—1BBL蛋白的表达；诱导培养DC，并将其分为实验组、载体对照组和阴性对照组，以上各组感染后观察DC形态学变化；流式细胞仪检测各组细胞表型；混合淋巴细胞反应（MLR）检测各组DC的刺激活性以及对T细胞分泌干扰素（IFN）-1的影响。结果成功构建融合基因重组腺病毒Ad—mAFP-IRES-m4-1BBL并表达于H22细胞；体外诱导培养获得典型的DC；流式细胞仪检测各组DC感染后的细胞表型，实验组DC细胞CD80[（60．7±8．7）％]、CD86[（67．0±4．6）％]表达率显著增高于其余两组（P〈0．05），刺激T细胞增殖能力（0．66±0．05）亦显著增强（P〈0．05），刺激T细胞分泌IFN-γ[（1280．7±68．2）ng／L]水平更高（P〈0．05）。结论成功构建含mAFP及4．1BBL融合基因腺病毒疫苗，其感染DC后刺激T细胞增殖和分泌IFN-γ的能力增强。

关键词：树突状细胞小鼠甲胎蛋白 4-1BB配体生物学特性

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pcDNA3.1-mAFP真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达

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中国现代医学杂志 2007年第9期17卷 1059-1061页

作者：匡志鹏谢裕安梁安民罗小玲吴继宁广西医科大学附属肿瘤医院生物医学研究中心广西南宁530021

目的构建真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,观察其在293肿瘤细胞中的表达情况。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因编码区全长序列,测序确认后,插入到pcDNA3.1真核表达载体中,双酶... 详细信息

目的构建真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,观察其在293肿瘤细胞中的表达情况。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因编码区全长序列,测序确认后,插入到pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定。用Lipofectamine脂质体将构建的重组载体转染293肿瘤细胞,检测AFP蛋白在293细胞中的表达情况。结果成功克隆了mAFP基因编码区全长序列,构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-mAFP,脂质体转染后可检测到mAFP基因在293细胞中的表达。结论该研究成功构建了重组pcDNA3.1-mAFP真核表达载体,为进一步开展原发性肝癌的靶向性基因治疗奠定了基础。

关键词：小鼠甲胎蛋白重组真核表达载体 pcDNA3.1 原发性肝癌

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一种新的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP的构建

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肿瘤防治研究 2007年第4期34卷 274-276,318页

作者：匡志鹏谢裕安梁安民罗小玲吴继宁广西医科大学附属肿瘤医院生物治疗研究中心南宁530021

目的构建表达小鼠甲胎蛋白(murine alpha fetoprotein,mAFP)基因的重组腺病毒载体pAd-BM5-GFP-mAFP,并测定其滴度。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增mAFP基因,测序确认后,插入到pAdBM5-GFP穿梭载... 详细信息

目的构建表达小鼠甲胎蛋白(murine alpha fetoprotein,mAFP)基因的重组腺病毒载体pAd-BM5-GFP-mAFP,并测定其滴度。方法从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增mAFP基因,测序确认后,插入到pAdBM5-GFP穿梭载体中,双酶切鉴定重组腺病毒载体。线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞,通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因,并在HEK293A细胞中大量扩增含目的基因的重组腺病毒,用TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果成功克隆了小鼠mAFP基因,构建出表达mAFP基因的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP,获得了表达mAFP基因的重组腺病毒,病毒滴度达3.2×108PFU/ml。结论本研究成功构建了pAdBM5-GFP-mAFP载体,获得了高滴度表达mAFP基因的重组腺病毒,为进一步开展肝癌的免疫基因治疗奠定了基础。

关键词： pAdBM5-GFP 小鼠甲胎蛋白重组腺病毒载体

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