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川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞成骨分化的影响

口腔医学 2021年第5期41卷 398-402页

作者：朱珠张玮南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室南京医科大学附属口腔医院特诊科江苏南京210029

目的探讨川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞成骨分化的作用及影响。方法配制浓度为1×10^(-8)~1×10^(-3) mol/L的川续断皂苷Ⅵ药物溶液,用细胞计数试剂盒8检测其对小鼠成肌细胞的细胞毒性和增殖能力。然后用碱性磷酸酶活性分析确定促进其成... 详细信息

目的探讨川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞成骨分化的作用及影响。方法配制浓度为1×10^(-8)~1×10^(-3) mol/L的川续断皂苷Ⅵ药物溶液,用细胞计数试剂盒8检测其对小鼠成肌细胞的细胞毒性和增殖能力。然后用碱性磷酸酶活性分析确定促进其成骨分化的最佳浓度。最后采用免疫印迹分析、实时定量PCR和茜素红染色观察成骨分化效果。结果实验结果表明,1×10^(-3)、1×10^(-4) mol/L川续断皂苷Ⅵ对小鼠成肌细胞有明显的毒性作用(P细胞增殖无明显作用。1×10^(-6) mol/L川续断皂苷Ⅵ促进小鼠成肌细胞成骨分化作用最为明显(P小鼠成肌细胞的成骨分化,但对其增殖无明显影响。

关键词：川续断皂苷Ⅵ 小鼠成肌细胞成骨分化

8-羟鸟嘌呤可促进小鼠骨骼肌成肌细胞的增殖和分化

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中国运动医学杂志 2016年第3期35卷 269-273页

作者：魏笑孙茹李凤丽巴雪青吉林大学体育学院吉林长春130012 东北师范大学遗传与细胞研究所吉林长春130024

目的:探讨8-羟鸟嘌呤对小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12增殖分化的影响。方法:基于C2C12增殖分化模型,通过有无添加8-羟鸟嘌呤,建立实验组和对照组。显微镜观察各时期细胞形态,对其各个时期进行细胞计数;检测两组细胞成肌相关分子Myo D、M-Cadh... 详细信息

目的:探讨8-羟鸟嘌呤对小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12增殖分化的影响。方法:基于C2C12增殖分化模型,通过有无添加8-羟鸟嘌呤,建立实验组和对照组。显微镜观察各时期细胞形态,对其各个时期进行细胞计数;检测两组细胞成肌相关分子Myo D、M-Cadherin和Myo G的m RNA表达。结果:与对照组相比,在细胞增殖阶段,实验组的分裂相和细胞数目明显多于对照组(P细胞分化阶段,实验组的Myo D、M-Cadherin和Myo G的m RNA表达增强(P小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12增殖和分化有促进作用。

关键词： 8-羟鸟嘌呤骨骼肌细胞增殖细胞分化小鼠成肌细胞 MyoD M-Cadherin MyoG

缬氨酸影响小鼠C2C12细胞脂肪沉积的研究

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东北农业大学学报 2021年第8期52卷 39-47页

作者：杜志强丁然赵素娟陈耀峰王守志长江大学动物科学学院湖北荆州434025 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

畜禽肌内脂肪(IMF)含量影响肉质风味、口感、嫩度、色泽等指标。调节IMF含量改善肉质成为研究重点。通过添加不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60及0.75 mmol·L^(-1))缬氨酸,检测脂肪合成相关重要信号分子SREBP-1c蛋白表达与成熟情况,... 详细信息

畜禽肌内脂肪(IMF)含量影响肉质风味、口感、嫩度、色泽等指标。调节IMF含量改善肉质成为研究重点。通过添加不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60及0.75 mmol·L^(-1))缬氨酸,检测脂肪合成相关重要信号分子SREBP-1c蛋白表达与成熟情况,检验脂滴生成和细胞增殖情况,探究缬氨酸如何影响小鼠成肌细胞(C2C12)胞内脂肪沉积。结果表明,体外培养36 h后,0.45 mmol·L^(-1)缬氨酸处理C2C12,可显著促进SREBP-1c蛋白成熟、表达和细胞增殖,一定程度促进脂滴沉积;添加0.45 mmol·L^(-1)缬氨酸和75μmol·L^(-1)棕榈酸后C2C12细胞中SREBP-1c蛋白含量显著上调,进一步促进细胞内脂质沉积,C2C12细胞增殖未受抑制。综上,缬氨酸可通过正向调节SREBP-1c相关信号通路,参与C2C12细胞内脂肪沉积或转运。研究首次证实缬氨酸可促进小鼠C2C12细胞脂肪沉积及增殖,为进一步探究缬氨酸在脂肪沉积过程中作用提供新见解,也为缬氨酸提高畜禽肉质研究提供基础和依据。

关键词：小鼠成肌细胞缬氨酸 SREBP-1c 脂肪沉积细胞增殖

茶碱对暴露于烟草烟雾提取物下小鼠C2C12细胞的保护作用

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广西医科大学学报 2015年第5期32卷 711-713页

作者：肖影何志义黄冬妹麻芝英周玉梅利金凤广西医科大学第一附属医院呼吸内科南宁530021

目的:探讨茶碱对暴露于烟草烟雾提取物(CSE)下小鼠成肌细胞(C2C12细胞)的保护作用。方法:CSE和茶碱分组干预小鼠C2C12细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞培养上清液内白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;实时定... 详细信息

目的:探讨茶碱对暴露于烟草烟雾提取物(CSE)下小鼠成肌细胞(C2C12细胞)的保护作用。方法:CSE和茶碱分组干预小鼠C2C12细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞培养上清液内白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞核因子-κB(NF-κB)mRNA和组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)mRNA的表达。结果:CSE组C2C12细胞IL-8和TNF-α较空白对照组释放增加,HDAC2mRNA相对表达量减少,NF-κB mRNA相对表达量增多(P细胞内HDAC2的水平的下调,进而抑制NF-κB的活性,从而降低C2C12细胞产生的炎症介质水平,推测茶碱对暴露于CSE下的C2C12细胞具有保护作用。

关键词：茶碱小鼠成肌细胞组蛋白去乙酰化酶2 核因子-κB

骨特异性转录因子Runx2对抗空间骨丢失效应的初步研究

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空间科学学报 2011年第5期31卷 627-634页

作者：郭飞马戴钟铨吴峰商澎李莹辉西北工业大学生命学院空间生物实验模拟技术国防重点学科实验室西安710072 中国航天员科研训练中心航天医学基础与应用国家重点实验室北京100094

为了构建稳定过表达Runx2(骨特异性转录因子)的C2C12(小鼠成肌细胞)和MG63(前成骨细胞)细胞株,并用于研究Runx2在对抗空间骨丢失效应中的作用.利用实时定量聚合酶链式反应鉴定Runx2下游基因I型胶原、碱性磷酸酶表达情况,在二维回转器中... 详细信息

为了构建稳定过表达Runx2(骨特异性转录因子)的C2C12(小鼠成肌细胞)和MG63(前成骨细胞)细胞株,并用于研究Runx2在对抗空间骨丢失效应中的作用.利用实时定量聚合酶链式反应鉴定Runx2下游基因I型胶原、碱性磷酸酶表达情况,在二维回转器中培养稳定细胞株,通过定量聚合酶链式反应,观察在模拟失重效应下Runx2基因对其下游基因表达的影响.结果表明,通过筛选获得稳定转染的C2C12-Runx2和MG63-Runx2细胞株,经鉴定都能过表达Runx2.转染后的细胞I型胶原和碱性磷酸酶mRNA表达增高.回转组与对照组相比,MG63,C2C12-Runx2,MG63-Runx2细胞的I型胶原和碱性磷酸酶mRNA表达降低,但在模拟失重效应下,转染细胞中I型胶原和碱性磷酸酶的mRNA表达下降程度明显低于末转染细胞株.所构建的C2C12-Runx2和MG63-Runx2细胞株比较稳定,并证实Runx2能部分对抗失重引起的成骨特异性分子的降低.

关键词：模拟失重小鼠成肌细胞核心结合因子前成骨细胞

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大豆蛋白凝胶显微结构的研究

大豆蛋白凝胶显微结构的研究

作者：于翠柳天津科技大学

学位级别：硕士

大豆是蛋白质最丰富最廉价的来源,大豆中大豆蛋白含量高达40%,比任何一种粮食作物的蛋白含量都高。大豆蛋白具有很高的营养保健价值及乳化性、吸水与吸油性、结构形成、黏连性、凝胶性与起泡性等功能特性。目前大豆蛋白已广泛地应用到... 详细信息

大豆是蛋白质最丰富最廉价的来源,大豆中大豆蛋白含量高达40%,比任何一种粮食作物的蛋白含量都高。大豆蛋白具有很高的营养保健价值及乳化性、吸水与吸油性、结构形成、黏连性、凝胶性与起泡性等功能特性。目前大豆蛋白已广泛地应用到食品中,在非食品制品中也有巨大的应用前景,但是在细胞组织工程的生物支架材料方面的应用研究鲜见报道。本文以大豆分离蛋白作为原料,以盐卤、葡萄糖酸内酯、转谷氨酰胺酶作为凝固剂,来制备大豆蛋白凝胶,以戊二醛和乙醇作为固定剂,固定凝胶的显微结构,真空冷冻干燥后研究凝胶的物性,旨在进一步研究探索凝胶与小鼠成肌细胞(C2C12细胞)共培养的情况,为研究与开发可降解的大豆蛋白凝胶的细胞组织支架提供理论依据。第一,研究不同的加热温度和加热时间对大豆蛋白凝胶强度的影响,结构表明,100℃加热、保持10min时制得凝胶的强度最大第二,研究盐卤、葡萄糖酸内酯、转谷氨酰胺酶三种凝固剂对大豆蛋白凝固特性的影响,对真空冷冻干燥后的凝胶进行硬度测定、扫描电镜观察,确定了凝固剂的较佳浓度,分别为0.70%、0.06mol/L、40U/***,在这些浓度下,凝胶硬度最大,网孔致密、均匀、个数最多。第三,采用戊二醛、乙醇两种固定剂对大豆蛋白凝胶进行固定,研究固定剂对凝胶硬度和显微结构的影响,结果表明,不同浓度的戊二醛和100%乙醇对凝胶硬度的影蜁、显著,对凝胶显微结构的影响不显著,固定凝胶网络结构的效果相似。第四,采用0.10mol/L NaOH、pH7.4磷酸盐缓冲液、0.10mol/L HCl：种降解液对凝胶进行降解,对降解后凝胶的失重率和显微结构进行测定,发现三种降解液均能不同程度降解凝胶,其中0.10mol/L NaOH的降解效果最显著,经该降解液降解后的凝胶失重率最大,凝胶网孔个数减少最多,孔径变化最大。第五,凝胶中戊二醛、乙醇残留的测定,经顶空固相微萃取气质联用仪分析得出结果,经过蒸馏水浸泡、干燥处理后的凝胶中仍有戊二醛残留,乙醇消失。第六,扫描电镜观察凝胶与C2C12成肌细胞共培养的情况,发现C2C12成肌细胞能够粘附在大豆蛋白的凝胶支架上

关键词：大豆蛋白凝胶质构扫描电子显微镜降解气质联用小鼠成肌细胞共培养

MORC2在诱导肌细胞C2C12分化中的作用及其机制研究

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MORC2在诱导肌细胞C2C12分化中的作用及其机制研究

作者：郑建宇中国医科大学

学位级别：硕士

目的:MORC2是Microrchidia家族CW型锌指蛋白(MORC)家族成员之一。MORC家族在进化上高度保守,并因其在抑制转录、表观遗传调控和DNA损伤修复等方面的重要功能引起人们的广泛关注。MORC2蛋白是一种普遍表达的蛋白,结构上主要包含ATPase域... 详细信息

目的:MORC2是Microrchidia家族CW型锌指蛋白(MORC)家族成员之一。MORC家族在进化上高度保守,并因其在抑制转录、表观遗传调控和DNA损伤修复等方面的重要功能引起人们的广泛关注。MORC2蛋白是一种普遍表达的蛋白,结构上主要包含ATPase域,CW锌指型结构域,核定位信号和卷曲螺旋结构域四个部分,分子量约为117kD。它在染色质重塑、DNA损伤修复和脂肪生成以及肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。MORC2主要定位于细胞核,但在细胞质中也有少量分布,有研究表明MORC2在细胞质的定位是脂质代谢和体内平衡的关键参与者,能够调节细胞质中脂肪细胞分化和脂肪生成。而研究表明蛋白的核质分布的改变往往伴随着结构和生物学功能的转变。C2C12细胞是由C3H小鼠骨骼肌卫星细胞永生化而来的细胞株,属于小鼠的骨骼肌干细胞。该细胞具有与骨骼肌前祖细胞相同的生物学行为,且其细胞特性和形态均一,可无限传代培养。C2C12细胞在2%马血清培养条件下具有单向分化为肌细胞的能力,同时能够表达MyoD、myogenin、myosin等成熟骨骼肌的多种标志蛋白。因而在肌细胞发育分化研究中,常常把它视为实验经典模型。在肌细胞的分化过程中成肌调节因子(MRFs)起着至关重要的作用。它主要包括MyoD、Myf5、myogenin与MRF4四个成员,其中MyoD、myogenin与myosin常在成熟肌细胞中表达上调因此常被用做肌细胞分化标志物。由于他们在分化的不同阶段分别起着主导作用,因此在分化前期高表达的MyoD、myosin常被用做早期分化标志物,而在分化中晚期高表达的myogenin则被用做中期分化标志物。分化抑制因子3(Inhibitor of differentiation,Id3)首先发现于成肌细胞。与肌细胞分化标志物MyoD一样,均属于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族成员。Id分子在结构上缺少与DNA结合所必需的碱性区,因此能够阻断细胞的分化进程,诱导细胞的进一步增殖。通常分化程度越高,Id分子表达越少。此前有研究表明MyoD的过表达能够促进Id3的上调。而Id3能够通过干扰Myo D二聚化影响其活性并发挥抑制分化作用。研究表明Id3在C2C12分化过程中表达逐渐下调。我们在前期工作中发现过表达MORC2能够抑制C2C12细胞分化,但具体作用机制尚不明确。此外基因芯片结果显示在正常细胞培养条件下MORC2能够上调Id3的表达,但这是否能影响细胞分化尚不清楚。因此本研究在前期工作的基础上,深入探讨了MORC2对C2C12细胞诱导分化的作用及其机制。方法:构建过表达MORC2慢病毒载体;构建并筛选稳转过表达MORC2蛋白的细胞株;用2%马血清对构建成功的C2C12细胞系进行诱导分化;流式细胞仪检测诱导分化后细胞周期的变化;Real-time PCR检测诱导分化后肌细胞分化标志物MyoD及Id3 mRNA水平表达的变化;Western Blot检测诱导分化后MyoD及Id3蛋白表达的变化;荧光显微镜下观察MORC2在分化过程中的细胞定位转变;通过核质分离试剂盒分别检测分化过程中核质中MORC2、Id3蛋白表达变化。结果:(1)将双酶切获得MORC2目的基因片段与载体连接,获得重组质粒。(2)重组慢病毒载体经双酶切以及基因测序鉴定显示构建成功。(3)用收集的慢病毒上清液感染C2C12细胞,并筛选稳定表达株。(4)Real-time PCR和Western Blot鉴定结果显示MORC2在C2C12细胞中高表达。(5)细胞形态统计分析结果显示过表达MORC2组细胞分化程度明显低于对照组。(6)流式周期结果显示随诱导分化时间延长对照组细胞G0/G1期比例明显升高,S期比例下降,而过表达MORC2组细胞周期变化不明显。(7)随诱导分化时间延长,过表达MORC2组细胞肌分化标志物MyoD、myogenin和myosin上调幅度明显低于对照组(p细胞中Id3的表达。而在诱导分化(DM)条件下,与对照组相比过表达MORC2能明显上调Id3的表达。(9)诱导分化后第3天的细胞中MORC2荧光分布发生了由细胞核到细胞浆的改变。(10)Western Blot结果显示,诱导分化过程中细胞核内MORC2蛋白表达逐渐减少,细胞质内MORC2逐渐升高。结论:(1)成功构建了携带MORC2基因的慢病毒载体。(2)过表达MORC2能够抑制细胞分化进程,促进C2C12细胞维持增殖状态。(3)在诱导分化过程中过表达MORC2能降低分化标志物MyoD、myogenin和myosin的上调水平。(4)过表达MORC2能上调Id3表达。(5)MORC2的定位在C2C12细胞诱导分化的过程中发生了由

关键词：小鼠成肌细胞细胞分化 MORC2 MyoD Id3 核质分布

混合C2C12的GelMA纤维制备的光固化生物打印系统研制

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混合C2C12的GelMA纤维制备的光固化生物打印系统研制

作者：胥国勇中国科学技术大学

学位级别：硕士

生物混合致动器是利用可运动的微生物、可拉伸和收缩的细胞或组织作为动力来源的致动器。在众多生物混合致动器中,基于骨骼肌的致动器由于其具有优秀的可控性和来源广泛的特点,被认为是用于生物混合机器人最有潜力的驱动来源之一,因此... 详细信息

生物混合致动器是利用可运动的微生物、可拉伸和收缩的细胞或组织作为动力来源的致动器。在众多生物混合致动器中,基于骨骼肌的致动器由于其具有优秀的可控性和来源广泛的特点,被认为是用于生物混合机器人最有潜力的驱动来源之一,因此有必要研究在体外构建出满足需求的骨骼肌微纤维。构建混合细胞的微纤维需要合适的生物材料和制作方式。在构建纤维的材料中,GelMA水凝胶因其有合成简单、成本低、良好的生物相容性、可用于光交联等优点适合作为混合细胞的生物材料。在纤维制作方式中,基于挤压方式的生物打印技术由于其独有的优势而受到了广泛的关注,适合用于混合细胞的水凝胶纤维构建。本文从在体外构建用于生物混合致动器纤维的需求出发,设计并研制出了基于挤压的光固化生物打印系统,并利用该系统打印出混合细胞的水凝胶纤维,研究系统参数对纤维成型后效果的影响,在此基础上对实验结果进行分析,然后对光固化生物打印系统进行优化。本文的主要研究内容和结果如下:（1）首先对系统的整体硬件进行设计和选型,然后对打印喷头进行仿真分析得出合适的喷头类型,再对系统的控制部分进行设计,最终完成打印系统的硬件和控制设计。（2）将设计完成且组装好的生物打印系统用于混合C2C12小鼠成肌细胞的纤维制备,研究不同参数（包括GelMA水凝胶溶液的流量、UV光强等）对水凝胶纤维的可打印性范围、平均线宽及均匀性、C2C12细胞的存活率等的影响。研究表明UV光强越大,水凝胶纤维的流量可打印性范围越大;在固定UV光强的条件下,Ge1MA流量越大,纤维的平均线宽先增加后减小,C2C12细胞的存活率在缓慢增加。（3）对设计好的生物打印系统进行优化拓展。研究了固定喷头直径下,不同光强和水凝胶流量对纤维线宽及均匀性和纤维内细胞存活率的综合影响,结果表明纤维线宽峰值之前的线宽对应的流量值是最优的。并对不同UV光强对应的最优流量打印出的纤维进行了分析,研究表明0.5 mm直径的喷头对应的最优UV光强为20 mW/cm2。然后研究水凝胶下降的流速和打印喷头水平移动的速度对纤维的影响,结果说明,水凝胶的流速和喷头移动的速度相匹配（即二者相等）时纤维效果最好。另外测试了纤维的坍塌性,以了解纤维的保真度,发现直径小于或等于0.5 mm的喷头比直径更大的喷头的纤维效果要更好。

关键词：生物打印生物混合致动器光固化水凝胶纤维小鼠成肌细胞

大豆11S和7S球蛋白提取及其凝胶显微结构研究

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大豆11S和7S球蛋白提取及其凝胶显微结构研究

作者：宋佳天津科技大学

学位级别：硕士

目前大豆蛋白已广泛应用在食品方面,在非食品制品中也有较好的应用前景,但是在细胞组织工程的生物支架材料方面的应用研究鲜见报道。大豆11S和7S球蛋白是大豆蛋白的主要成分。本研究以低温脱脂大豆粉为原料提取得到大豆11S和7S球蛋白,... 详细信息

目前大豆蛋白已广泛应用在食品方面,在非食品制品中也有较好的应用前景,但是在细胞组织工程的生物支架材料方面的应用研究鲜见报道。大豆11S和7S球蛋白是大豆蛋白的主要成分。本研究以低温脱脂大豆粉为原料提取得到大豆11S和7S球蛋白,对比研究两种方法(葡萄糖酸内酯作为凝固剂和加热)制备的大豆球蛋白复合凝胶凝胶特性和显微结构,进一步探索其与小鼠成肌细胞(C2C12)共培养情况。第一,大豆11S和7S球蛋白提取工艺优化研究,结果表明,豆粉浸提pH值8.5,离心后浸提液中添加0.08mmol/L NaHSO3,5 mmol/L CaCl2, pH值6.2提取大豆11S球蛋白。上清液调节pH值4.8离心提取大豆7S球蛋白。这种方法对比传统方法提高了两种球蛋白提取率和提取纯度,提取率11S达82.8%,7S达73.2%;提取纯度11S达78.3%;7S达71.1%。第二,研究两种制备方法对大豆球蛋白复合凝胶凝胶特性和显微结构的影响。TPA分析凝胶强度和弹性,扫描电子显微镜观察凝胶的显微结构以确定最优方法：11S/7 S比例和GDL浓度,分别为2：1和0.06 mol/L。第三,研究不同固定剂对凝胶硬度和显微结构的影响。结果表明,2.5%戊二醛和100%乙醇对凝胶硬度影响显著,但对凝胶显微结构影响不显著。第四,采用0.10mol/L NaOH、pH7.4磷酸盐缓冲液、0.10mol/L HCl三种降解液对凝胶进行降解,对凝胶的失重率进行测定,发现三种降解液均能不同程度降解凝胶,其中0.10 mol/L NaOH的降解效果最显著,经降解液降解六周后的凝胶均完全降解。第五,扫描电镜观察凝胶与C2C12共培养的情况,发现C2C12能够在大豆球蛋白复合凝胶支架上附着生长,细胞直径变小,并未呈现梭形。

关键词：大豆球蛋白复合凝胶 TPA 扫描电子显微镜降解小鼠成肌细胞共培养