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重组人干扰素ω在对数生长期毕赤酵母中的高效表达特性研究

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微生物学报 2006年第3期46卷 418-421页

作者：潘红春刘红王伯初陈真文郑小峰杨红涛肖中元重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室重庆400044 太极集团西南药业股份有限公司重庆400038

用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性，通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验，优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhlFNω的摇瓶条件。结果表明，μ对毕赤酵母表达rhlFNω有显著影... 详细信息

用不同比生长速率μ的毕赤酵母探讨其表达外源重组蛋白的差异性，通过起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、菌体浓度、装液量等实验，优化具有较高μ的对数生长期毕赤酵母表达rhlFNω的摇瓶条件。结果表明，μ对毕赤酵母表达rhlFNω有显著影响。μ为0．1612h^-1的毕赤酵母表达rhlFNω最高为558mg／L，较μ为0．1321、0．0505和0．0052h^-1的毕赤酵母分别提高50％、68％和99％。对数生长期的毕赤酵母表达rhlFNω的最适摇瓶表达条件为：250mL摇瓶装入30mL BMMY，控制菌体浓度达到200～300g／L（WCW），起始pH值自然，每24h添加甲醇15g／L一次。诱导表达周期为4d。通过表达条件的优化，rhlFNω的表达量达到1070mg／L。较优化前提高149％。

关键词：毕赤酵母比生长速率对数生长期重组人干扰素ω 表达条件

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钩端螺旋体对数生长期的测定

中国人兽共患病杂志 2002年第3期18卷 60-63页

作者：黄红垒徐建国蒋秀高聂一新肖玉春中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所北京102206

目的　了解在实验室条件下钩端螺旋体的生长规律 ,为进一步开展蛋白质组和基因表达谱的研究做准备。方法　使用pH为 7 4的EMJH液体培养基 ,在 30℃条件下置摇床上以 90r/min对该菌进行通气振荡培养 ,记录不同时间点的活菌数和培养物的... 详细信息

目的　了解在实验室条件下钩端螺旋体的生长规律 ,为进一步开展蛋白质组和基因表达谱的研究做准备。方法　使用pH为 7 4的EMJH液体培养基 ,在 30℃条件下置摇床上以 90r/min对该菌进行通气振荡培养 ,记录不同时间点的活菌数和培养物的光密度。结果　研究发现 ,钩体的生长与其它细菌培养相似 ,也有静止期、对数生长期、稳定期和衰老期。在该培养条件下 ,钩端螺旋体的对数生长期为培养的第 12～ 5 4h。在对数生长期 ,钩端螺旋体复制一代所需的时间约为 11 35h。并且 ,钩端螺旋体活菌计数和光密度值OD60 0 之间有较好的相关性。结论　本文比较详细地描述了钩端螺旋体的生长参数—活菌数和OD60 0 ,并找到了钩端螺旋体生长的对数生长期 ,在严格控制试验条件的情况下 ,可以使用测定液体培养物的OD60 0值的方法来推算菌体数。

关键词：生长曲线对数生长期活菌计数 OD600 钩端螺旋体钩端螺旋体病

基于非靶向代谢组学研究铵盐补偿对酿酒酵母对数生长期的影响

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基于非靶向代谢组学研究铵盐补偿对酿酒酵母对数生长期的影响

作者：曹凤佛山科学技术学院

学位级别：硕士

酿酒酵母是发酵行业常用的工业生产菌株,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物。氮源缺乏是引起酿酒酵母迟缓发酵和不完全发酵的重要原因之一,氮素补偿可有效促进发酵进程,提高发酵效率。氮素补偿后酿酒酵母发酵过程中... 详细信息

酿酒酵母是发酵行业常用的工业生产菌株,处于对数生长期的酵母菌迅速繁殖,积累大量初级代谢产物。氮源缺乏是引起酿酒酵母迟缓发酵和不完全发酵的重要原因之一,氮素补偿可有效促进发酵进程,提高发酵效率。氮素补偿后酿酒酵母发酵过程中产生生物化学变化,影响代谢物的生成,进而改变发酵产品的风味和品质。课题组前期研究发现氮素补偿(磷酸氢二铵)可降低高级醇生成量,提高发酵酒的品质,但氮素补偿对酿酒酵母的生长代谢,关键代谢物及相关代谢途径的影响还未得到明确解析。本文以酿酒酵母为研究对象,采用非靶向代谢组学技术探讨对数生长期酿酒酵母胞内代谢物及代谢通路分布情况,并进一步分析对照组和氮素补偿组酿酒酵母的差异代谢物和差异代谢通路,了解铵盐补偿后相关基因转录水平的变化。主要结果如下:(1)铵盐补偿前后酿酒酵母的生长曲线表明,铵盐补偿未对酵母菌生长周期造成影响,但提高了酵母菌的生物量。在对数生长期酿酒酵母胞内共鉴定出927种代谢物,其中含氮和含硫化合物的数量和相对含量最高,主要涉及核苷酸代谢、碳水化合物代谢、辅因子和维生素的代谢以及氨基酸代谢。铵盐补偿下核苷酸代谢、辅因子和维生素代谢、碳水化合物代谢等途径的代谢物相对含量显著提高。(2)通过分析铵盐补偿前后酿酒酵母代谢组学,在对数生长前期、中期与后期分别鉴定出916、914、917种差异代谢物,筛选出显著性差异代谢物35、20、36种,共富集7、4、3条显著性差异代谢通路,主要涉及酿酒酵母谷胱甘肽代谢、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、TCA循环、糖酵解/糖异生、丙酮酸代谢和β-丙氨酸代谢途径。对代谢组学差异代谢物及代谢通路分析表明,铵盐补偿主要促进前期酵母细胞的增殖,中期提高菌株的发酵性能,有助于细胞的生存,后期减少酵母细胞的凋亡。此外,铵盐补偿通过影响酿酒酵母谷氨酸和谷胱甘肽相关代谢途径,进而调控高级醇的生成。(3)铵盐补偿前后酿酒酵母RT-q PCR分析表明,铵盐补偿上调了对数生长前期酿酒酵母氨同化途径关键基因GDH1、GLN1、GLT1的转录表达,促进了谷氨酸和谷氨酰胺的合成利用。同时影响了对数生长中后期酵母菌对碳源的吸收利用,上调糖酵解途径关键基因FBA1、GPM2,下调糖异生途径PCK1的转录表达,调控中央碳代谢流。本论文通过研究对数生长期酿酒酵母代谢情况,铵盐补偿前后酵母发酵特性、代谢产物、代谢途径和基因表达的差异,初步分析了铵盐补偿后酿酒酵母的代谢调控机制,研究结果为定向改造酿酒酵母、提高发酵效率以及铵盐补偿培养酿酒酵母的理论研究提供帮助。

关键词：酿酒酵母铵盐补偿代谢组学对数生长期生长代谢

不同生长期瞬目虫(Glaucoma scintillans)的同工酶的比较研究

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华东师范大学学报（自然科学版） 1991年第2期 88-92页

作者：侯连生沈锡祺姜莹张作人华东师范大学生物学系

以无菌培养的原生动物纤毛虫瞬目虫(Glaucoma scintillans)为材料,比较它们对数生长期和衰老期的酯酶同工酶,酸性磷酸酶同工酶,苹果酸脱氢酶同工酶及乳酸脱氢酶同工酶的差异.结果表明在不同生活状态下,四种酶同工酶蛋白带有明显差异;对... 详细信息

以无菌培养的原生动物纤毛虫瞬目虫(Glaucoma scintillans)为材料,比较它们对数生长期和衰老期的酯酶同工酶,酸性磷酸酶同工酶,苹果酸脱氢酶同工酶及乳酸脱氢酶同工酶的差异.结果表明在不同生活状态下,四种酶同工酶蛋白带有明显差异;对数生长期细胞的同工酶活力和数量明显高于衰老期细胞的同工酶的活力和数量.说明同工酶不但是生物体代谢的调节者,亦能作为生物衰老的一种指标.

关键词：瞬目虫同功酶生长期对数生长期

不同生长期上海四膜虫（Tetrahymena　shanghaiensis　S1）的同工酶的比较研究

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华东师范大学学报（自然科学版） 1994年第4期 85-89页

作者：侯连生许新彭水根沈锡祺华东师范大学生物学系景德镇教育学院

用高分辨力的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和比较了不同生长期的上海四膜虫的五种同工酶。发现对数期细胞和衰老期细胞的酸性磷酸酶同工酶，酯酶同工酶和苹果酸脱氢酶同工酶及其它的同工酶的蛋白条带有明显差异。对数生长期细胞的同工酶活力... 详细信息

用高分辨力的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和比较了不同生长期的上海四膜虫的五种同工酶。发现对数期细胞和衰老期细胞的酸性磷酸酶同工酶，酯酶同工酶和苹果酸脱氢酶同工酶及其它的同工酶的蛋白条带有明显差异。对数生长期细胞的同工酶活力和数量明显高于衰老期细胞的同工酶的活力和数量。说明同工酶不但是细胞代谢的调节者，亦能作为细胞衰老的一种指标。

关键词：上海四膜虫凝胶电泳对数生长期衰老期同工酶

不同剂量X射线对细胞周期检测点和细胞凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2005年第7期22卷 798-800页

作者：谢大兴冯永东张鹏吴剑宏陶德定龚建平华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所武汉430030

目的比较G1期检测点和G2期检测点两种检测点的放射敏感性及细胞凋亡发生规律。方法野生型p53功能正常的人类急性淋巴细胞性白血病(MOLT4)细胞株在体外对数生长期给予不同剂量(2、5、10、20GY)的X射线照射后,继续培养0、3、6、9h,随后分... 详细信息

目的比较G1期检测点和G2期检测点两种检测点的放射敏感性及细胞凋亡发生规律。方法野生型p53功能正常的人类急性淋巴细胞性白血病(MOLT4)细胞株在体外对数生长期给予不同剂量(2、5、10、20GY)的X射线照射后,继续培养0、3、6、9h,随后分成两组:一组细胞收获并固定,用Cyclins/DNA流式细胞术对CyclinE,CyclinA和CyclinB1分别进行标记,Cellquest软件分析;另一组同步采用膜联蛋白V/碘化丙锭(API技术)和AnnexinV/PI技术分析细胞凋亡。结果小剂量X射线(2、5GY)照射后,MOLT4细胞G2期检测点被激活,表现为:照射后3～9h,G2期Cyclins(CyclinA和CyclinB1)迅速升高并累积于G2期,G1期Cyclins(CyclinE)含量逐渐减少;9h时G2期细胞出现明显凋亡(凋亡率为9.5%)。大剂量X射线(10、20GY)照射后,细胞G1期检测点被激活,表现为:照射后3～9h,G1期Cyclins(CyclinE)持续性升高并累积于G1期,G2期Cyclins(CyclinA和CyclinB1)含量下降;且3h时G1期细胞便出现明显凋亡(凋亡率为10.28%)。结论不同剂量X射线可激活不同的细胞周期检测点,并诱导相应周期时相内的细胞凋亡,细胞凋亡率的高低及诱导速度呈现剂量依赖性。

关键词：细胞周期检测点不同剂量 X射线急性淋巴细胞性白血病 MOLT-4细胞 Cyclins 野生型p53 G1期放射敏感性对数生长期 x射线照射流式细胞术膜联蛋白V 剂量依赖性细胞凋亡率功能正常继续培养软件分析诱导速度 I技术

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多环芳烃高效降解菌的筛选

农业环境科学学报 2007年第B3期26卷 92-96页

作者：王新李培军巩宗强张辉 V.A.Verkhozina 中国科学院沈阳应用生态研究所俄罗斯科学院西伯利亚分院闽诺格拉多夫地质研究所伊尔库茨克664033

以多环芳烃芘和苯并（a）芘为供试物，对多株土著菌和引进菌同时进行筛选试验。结果表明，引进菌经过驯化后对芘和苯并（a）芘都具有一定的降解能力，降解率在30％～80％，通过SPSS数理统计分析软件对数据进行处理后得出，引进细菌B61、... 详细信息

以多环芳烃芘和苯并（a）芘为供试物，对多株土著菌和引进菌同时进行筛选试验。结果表明，引进菌经过驯化后对芘和苯并（a）芘都具有一定的降解能力，降解率在30％～80％，通过SPSS数理统计分析软件对数据进行处理后得出，引进细菌B61、B67、M-B和引进真菌Y219、Y220、M-Y作为固定化包埋的菌种；土著菌对芘和苯并（a）芘的降解率可达40％-95％，经过筛选后确定，土著细菌B02、B07、B09和土著真菌F02、F05、F06作为固定化包埋的菌种。通过试验对上述各菌进行了生长曲线的测定，细菌和酵母菌的对数生长期是5-20h，真菌的对数生长期是10-55h，这为固定化微生物提供了一定的前提条件。

关键词：土著菌引进菌筛选对数生长期

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紫穗槐细胞毒活性部位化学成分研究

中草药 2005年第10期36卷 33-35页

作者：姜泓白丽萍康廷国辽宁中医学院辽宁沈阳110032 辽宁中医学院

紫穗槐Amorpha fruticosa L.为豆科紫穗槐属多年生落叶灌木。在世界范围内具有广泛的分布。全世界有紫穗槐属植物约25种，原产北美，我国引入栽培的只有紫穗槐1种，南北均有栽植。紫穗槐在我国又称绵槐、油条、椒条、穗花槐、紫翠槐、... 详细信息

紫穗槐Amorpha fruticosa L.为豆科紫穗槐属多年生落叶灌木。在世界范围内具有广泛的分布。全世界有紫穗槐属植物约25种，原产北美，我国引入栽培的只有紫穗槐1种，南北均有栽植。紫穗槐在我国又称绵槐、油条、椒条、穗花槐、紫翠槐、苕条，多作为水土保持树种。其叶微苦、凉，具有祛湿消肿功效，[第一段]

关键词：醋酸乙酯异黄酮正丁醇化合物黄酮类化合物紫穗槐属化学成分研究细胞毒作用溶剂油石油醚灰叶素生长指数期对数生长期乙醇提取物烷氧基甲氧基

组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的特征

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中国临床康复 2005年第19期9卷 108-110,i003页

作者：张量隋璐孙成林王麟牟艳玲苏禄辉沈阳医学院生理教研室辽宁省沈阳市110034 沈阳医学院奉天医院普外一科辽宁省沈阳市110024 中国医科大学基础医学院药理教研室辽宁省沈阳市110001

目的:采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,并应用光镜、电镜和免疫组织化学方法观察细胞各生长时期的形态变化。方法:实验于2004-02/08在中国医科大学基础医学院药理实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠30只,体质量150～18... 详细信息

目的:采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,并应用光镜、电镜和免疫组织化学方法观察细胞各生长时期的形态变化。方法:实验于2004-02/08在中国医科大学基础医学院药理实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠30只,体质量150～180g,无菌条件下取全段主动脉中膜组织修剪成1mm×1mm大小的组织块直接贴壁于一次性塑料培养皿中,组织块间距0.5cm,保证细胞从组织块游出后有足够的生长空间并保持局部细胞密度的均匀,发现漂起的组织块及时清理,于37℃孵箱内放置1.5h左右使组织块与壁贴附后,缓慢加入改良Eagle培养液培养3～5d,待有细胞从组织块周围游出后换液。当细胞长满培养皿时即可传代。采用倒置相差显微镜和透射电镜及抗α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学方法观察主动脉平滑肌细胞的形态。绘制主动脉平滑肌细胞生长曲线,观察各生长时期的变化,并评估其培养方法的优点。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①技术方法优点:贴块方便,直接一次性贴壁使污染机会少,随组织块生长随时清理漂起的组织块,可减少对其他组织块的毒性作用,并增加已游离出的细胞生长空间。②原代培养血管平滑肌细胞:光镜观察形态多样,大小略有差异,胞体较小,胞质折光性强。③传代血管平滑肌细胞:光镜下观察呈现特征性“峰”、“谷”状生长。电镜下观察:细胞形态不规则,胞浆内有肌丝,纵向平行排列,有密区,具备平滑肌细胞特征。免疫组织化学染色后可见细胞浆中大量平行条状棕黄染色、胞核不着色,所有细胞均染色,呈阳性。④主动脉平滑肌细胞生长曲线:血管平滑肌细胞生长曲线近似“S”形,传代后第1天细胞数有所减少,经过2d潜伏适应期后进入对数生长期,持续两三天进入平台期。结论:组织块贴壁法培养技术具有操作简便,污染机会少,有足够细胞生长空间的优点,经光镜和电镜观察培养出新的主动脉血管平滑肌细胞具有平滑肌细胞特征,免疫组织化学染色也显示所有细胞均呈阳性。传代培养后第2天进入对数生长期,持续两三天进入平台期,可产生纯度高及数量多的平滑肌细胞。

关键词：主动脉血管平滑肌细胞组织块贴壁法免疫组织化学方法免疫组织化学染色 α-平滑肌肌动蛋白细胞生长曲线 Wistar大鼠主动脉平滑肌细胞对数生长期中国医科大学镜下观察细胞特征药理实验室基础医学院相差显微镜