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作者：郝伟静天津医科大学

学位级别：硕士

目的:建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径;建立甲状旁腺(Parathyroid Gland)细胞系并进行微囊化,为甲状旁腺移植提供新的途径。方法:选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原... 详细信息

目的:建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径;建立甲状旁腺(Parathyroid Gland)细胞系并进行微囊化,为甲状旁腺移植提供新的途径。方法:选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原代细胞;使用改良的DMEM/F12培养基,添加促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、表皮细胞生长因子(EGF)及氢化可的松等因子进行培养;在原代细胞早期分两种方式导入外源基因猿猴病毒40大T抗原(SV40T)/端粒酶逆转录酶(TERT)用于诱导永生化;利用RT-PCR检测甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(TG)、促甲状腺激素受体(TSHR)、钠/碘共同转运体(NIS)等基因的表达,同时利用免疫荧光技术检测TPO及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)蛋白的表达;提取该患者外周血DNA,进行突变基因的检测;提取细胞及肿瘤组织基因组PCR扩增后测序,进行突变基因的检测。选取甲状旁腺腺瘤患者的肿瘤标本,采用消化法分离细胞;使用RPMI 1640培养基进行培养;待细胞稳定传代后,进行微囊化,观察细胞生长情况及微囊的稳定性;培养中多次检测甲状旁腺激素(PTH)等因子的水平。结果:分离的FPTC原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长;细胞生长6个月,转染SV40T组(标记为FPTC-S)传代至p26,FPTC细胞传代至p23,转染SV40T+TERT组(标记为FPTC-ST)传代至p19,细胞增殖能力较好;FPTC-S与FPTC-ST细胞均能够在基因水平稳定表达TPO、TG与TSHR;患者外周血中存在MLH1 R217C胚系突变;原代细胞及部分肿瘤组织中存在BRAF V600E突变;原代细胞及永生化的细胞系中均存在MLH1 R217C基因突变。分离的甲状旁腺腺瘤原代细胞贴壁生长,呈两种形态,一种为圆形细胞,倒置显微镜下可见黄色荧光;另一种为短梭形细胞,散在分布于圆形细胞中,其形态分别与甲状旁腺的主细胞及嗜酸细胞相近,细胞可以稳定传代至p15代;微囊化后,细胞可正常生长,并且没有破坏微囊结构。结论:本研究初步建立了FPTC永生化细胞系,且该细胞系中存在MLH1 R217C及BRAF V600E突变,该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型;同时,本研究初步探索了甲状旁腺腺瘤组织的分离及培养方法,并进行了微囊化实验,为甲状旁腺移植提供了新的研究方法。

关键词：家族性甲状腺乳头状癌甲状旁腺功能低下细胞系原代培养 MLH1 BRAF 微囊化甲状旁腺激素

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MLH1R217C/BRAFV600E突变型家族性甲状腺乳头状癌永生化细胞系的建立及鉴定

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天津医药 2016年第6期44卷 657-661,803页

作者：郝伟静于洋王青松赵丽叶艳董莉李健森孟祥睿运新伟高明天津医科大学肿瘤医院甲状腺颈部肿瘤科、国家肿瘤临床医学研究中心天津市“肿瘤防治”重点实验室300060 天津医科大学基础医学研究中心天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系天津医科大学天津医科大学肿瘤医院、国家肿瘤临床医学研究中心

目的建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径。方法选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原代细胞。使用改良的DMEM/F12培养基,添加促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、... 详细信息

目的建立家族性甲状腺乳头状癌(FPTC)永生化细胞系,为研究家族性非髓样甲状腺癌(FNMTC)提供新的途径。方法选取FPTC患者的肿瘤标本,采用消化法分离原代细胞。使用改良的DMEM/F12培养基,添加促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、表皮细胞生长因子(EGF)及氢化可的松等进行培养。在原代细胞早期分2种方式导入外源基因SV40T/TERT用于诱导永生化。利用RT-PCR检测甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(TG)、促甲状腺激素受体(TSHR)、钠/碘共同转运体(NIS)等基因的表达,同时利用免疫荧光技术检测TPO及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)蛋白的表达。提取该患者外周血DNA,进行突变基因的检测。提取细胞基因组PCR扩增后测序,进行突变基因的检测。结果分离的FPTC原代细胞呈梭形或不规则多角形贴壁生长;细胞生长6个月,转染SV40T组(标记为FPTC-S)传代至p26,FPTC细胞传代至p23,转染SV40T+h TERT组(标记为FPTC-ST)传代至p19,细胞增殖能力较好;FPTC-S与FPTC-ST细胞均能够在基因水平稳定表达TPO、TG与TSHR;患者外周血中存在MLH1 R217C胚系突变;原代细胞存在BRAF V600E突变;原代细胞及永生化的细胞系中均存在MLH1 R217基因突变。结论本研究初步建立了FPTC永生化细胞系,且该细胞系中存在MLH1 R217C及BRAF V600E突变,该细胞系将为研究以上突变及其相互作用关系提供研究模型。

关键词：甲状腺肿瘤细胞系,肿瘤细胞培养技术家族性甲状腺乳头状癌永生化细胞系原代培养 MLH1 BRAF

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家族性和散发性甲状腺乳头状癌的侵袭性及预后对比分析

家族性和散发性甲状腺乳头状癌的侵袭性及预后对比分析

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作者：侯普森吉林大学

学位级别：硕士

研究目的:随着甲状腺癌(Thyroid Carcinoma,TC)发病率的升高,对家族性甲状腺乳头状癌(Familial Papillary Thyroid Carcinoma,FPTC)的关注也越来越多。FPTC定义为同一个家系中有2个或2个以上患有PTC的一级亲属,并排除相关家族性肿瘤综... 详细信息

研究目的:随着甲状腺癌(Thyroid Carcinoma,TC)发病率的升高,对家族性甲状腺乳头状癌(Familial Papillary Thyroid Carcinoma,FPTC)的关注也越来越多。FPTC定义为同一个家系中有2个或2个以上患有PTC的一级亲属,并排除相关家族性肿瘤综合征及幼年头颈部放射线照射史。但目前仍不能确定FPTC基因学及遗传机制,对其诊断主要依靠家族史。关于FPTC和散发性甲状腺乳头状癌(Sporadic Papillary Thyroid Carcinoma,SPTC)的侵袭性及预后仍存在较大争议。本研究旨在对比FPTC和SPTC二者之间以及FPTC相关亚组之间的侵袭性及预后的差异,以期对FPTC临床早期筛查、治疗及术后监测提供更多证据。研究方法:本研究系统回顾了2009年6月至2023年6月于吉林大学白求恩第一医院甲状腺外科行甲状腺手术且最终病理确认为PTC的患者,根据传统FPTC定义及相应纳排标准统计到来自94个家系的212名FPTC患者并根据受累一级亲属人数、遗传方式、发病代数、肿瘤直径等分为不同亚组,通过SPSS软件从同期手术病历资料完整的26812名SPTC患者中随机抽取出743名SPTC患者,对比FPTC和SPTC之间、FPTC相关亚组之间的侵袭性及预后差异。研究结果:与SPTC患者相比,FPTC患者的多灶癌发病率(65.6%vs46.7%,P癌灶发病率(47.6%vs32.1%,P甲状腺腺外侵犯率(28.3%vs18.0%,P甲状腺炎发病率(37.3%vs26.7%,P=0.003)、放射性碘治疗率(39.6%vs23.5%,P癌发病率(77.8%vs60.4%,P=0.015)、双侧癌灶发病率(60.3%vs42.3%,P=0.016)、侧颈区淋巴结转移率(19.1%vs8.1%,P=0.021)更高,并且接受甲状腺全切术比例更高(82.5%vs63.8%,P=0.007)。与单纯同辈家系相比,单纯亲子家系男性发病率更高(22.7%vs10.9%,P=0.049),肿瘤复发率更高(13.6%vs3.7%,P=0.040)、无病生存期更短(P=0.004)。与第一代FPTC患者相比,第二代FPTC患者发病年龄更低(32.091±7.759vs 53.440±7.325,P性比例(32.4%vs12.2%,P=0.034)、总淋巴结转移率(70.6%vs46.3%,P=0.035)、中央区淋巴结转移率(70.6%vs43.9%,P=0.02)及中高复发风险比例(70.6%vs46.3%,P=0.035)更高。但第一代患者的多灶癌发病率(80.5%vs52.9%,P=0.011)和被膜侵犯率(87.8%vs67.6%,P=0.034)更高。与散发性甲状腺微乳头状癌(Sporadic Micropapillary Thyroid Carcinoma,SPTMC)患者相比,家族性甲状腺微乳头状癌(Familial Micropapillary Thyroid Carcinoma,FPTMC)患者有更高的多灶癌发病率(60.6%vs43.6%,P癌发病率(42.5%%vs29.5%,P=0.002)、甲状腺腺外侵犯率(21.9%vs12.8%,P=0.004)、淋巴结转移率(46.3%vs29.5%,p甲状腺炎发病率(36.9%vs26.2%,P=0.008)、放射性碘治疗率(35.6%vs17.1%,P家族史为PTC中央区淋巴结转移的独立危险因素;肿瘤最大径≥1.6cm、甲状腺腺外侵犯、中央区淋巴结转移为PTC复发的独立危险因素,而PTC家族史不是。结论:1.与SPTC相比,FPTC有更强的侵袭性且有着更差的预后。***-3相比于FPTC

关键词：家族性甲状腺乳头状癌散发性甲状腺乳头状癌肿瘤侵袭性肿瘤预后

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端粒长度与非小细胞肺癌TKI治疗疗效及与甲状腺乳头状癌发生风险的相关性研究

端粒长度与非小细胞肺癌TKI治疗疗效及与甲状腺乳头状癌发生风险...

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作者：李骥济南大学

学位级别：硕士

第一部分:NSCLC患者中端粒长度与TKI靶向治疗疗效的相关性研究肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,在我国呈现持续上升和年轻化趋势。靶向治疗是驱动基因阳性晚期肺腺癌患者的最重要治疗手段,使晚期肺癌患者的预后得到明显改善。吉非... 详细信息

第一部分:NSCLC患者中端粒长度与TKI靶向治疗疗效的相关性研究肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,在我国呈现持续上升和年轻化趋势。靶向治疗是驱动基因阳性晚期肺腺癌患者的最重要治疗手段,使晚期肺癌患者的预后得到明显改善。吉非替尼是一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,用于治疗EGFR驱动基因阳性的非小细胞肺癌具有非常好的疗效。然而,一半的患者在接受吉非替尼治疗后的10个月左右会出现耐药而病情进展,但目前尚缺乏预测吉非替尼治疗效果的理想预测指标。端粒是人类染色体末端保护复合体,由短重复核苷酸序列“TTAGGG”组成,随着细胞分裂,端粒长度逐渐缩短,使细胞不能很好的适应环境改变而导致细胞分裂受到阻滞,组织补给受到干扰。目前研究发现端粒与多种肿瘤的发生、发展、预后及耐药密切相关。但目前缺乏端粒与EGFR-TKI疗效及相关性的研究。本课题拟研究外周血白细胞相对端粒长度是否可作为EGFR-TKI靶向治疗预后的生物标志物,我们收集了ⅢB期或IV期EGFR驱动基因阳性的TKI为一线治疗的肺腺癌患者182例,全组患者中位年龄为55岁,其中男性76例,女性106例,具体为19外显子缺失88例(48.4%),L858R突变94例(51.6%)。用Q-PCR方法测量每位患者的外周血白细胞相对端粒长度。随后我们计算了白细胞相对端粒长度与晚期肺腺癌对吉非替尼疗效之间的相关性。研究结果表明,与相对较长的端粒相比,相对较短的白细胞端粒长度与吉非替尼疗效较差显著相关:中位生存时间(Median Survival Time,MST)分别为14.3个月vs 19.1个月,p值=0.017;中位无进展生存期(median progression survival time,m PFS)分别为10.3个月vs13.0个月,p值=0.164。多因素分析显示,相对短端粒长度是接受TKI治疗的EGFR驱动基因阳性患者独立的生存不良预后因素:危险比(HR)=1.65,95%置信区间(CI)=1.28-2.12,p值=0.006。第二部分:甲状腺乳头状癌的端粒长度与发病风险关系的研究甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,其发病率逐年升高,多见于年轻女性,分为乳头状、滤泡状、髓样和未分化癌。乳头状甲状腺癌又分为乳头状和微乳头状癌。端粒主要由短重复核苷酸序列“TTAGGG”组成,是人类线性染色体末端的DNA-蛋白质复合体,可提供非转录DNA缓冲物,与端粒结合蛋白一起构成特殊的“帽子”结构,随着细胞分裂,端粒长度逐渐缩短,从而导致细胞不能很好的适应环境改变,导致细胞分裂受到阻滞,组织补给受到干扰。目前研究发现端粒与多种肿瘤的发生、发展、预后及耐药密切相关。有研究提出端粒长度可能导致乳头状甲状腺癌的发病易感性,为了验证这一假设,我们检测了白细胞相对端粒长度,用于研究其与甲状腺乳头状癌(PTC)发病风险之间的关系。这是一项在中国汉族人群中进行的病例对照研究,共收集了1200例PTC患者和1201名年龄、性别相互匹配的健康人做为对照组。经统计分析,相对端粒长度(RTL)较短的患者与甲状腺乳头状癌患病风险升高显着相关:OR=1.61,95%CI=1.35-1.92,p值=1.30×10-7。有趣的是,当我们根据对照组中相对端粒长度(RTL)的四分位数分为四组时,我们观察到相对端粒长度和甲状腺乳头状癌(PTC)患病风险之间呈反向U形关联。当把第一个四分位数组(最长的一组)作为参考组进行比较时,第二,第三和第四(最短组)四分位数的个体ORs(95%CIs)为5.61(4.04-7.78),p值=6.10×10-25;9.33(6.78-12.83),p值=6.99×10-43和1.23(0.83-1.81),p值=0.300,而这种反向U形关系在年轻人中更为明显。由此得出,白细胞相对端粒长度可能是识别PTC个体风险的潜在生物标志物。我们的研究在中国人群中首次表明白细胞端粒长度与PTC风险相关。在白细胞端粒长度与PTC风险之间有明显的倒U形关系,这种相关性在年轻群体中显得更为明显。这些发现支持了端粒长度与PTC的易感性显著相关的假设。

关键词：端粒长度 EGFR 吉非替尼总生存预后因素甲状腺乳头状癌家族性甲状腺乳头状癌风险

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