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大肠杆菌o157:h7在不锈钢表面生物膜形成能力及其与菌株的特性关系

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食品科学 2020年第22期41卷 127-132页

作者：吴丽娜董鹏程张一敏毛衍伟梁荣蓉杨啸吟朱立贤罗欣山东农业大学食品科学与工程学院山东泰安271018 江苏省肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心江苏南京210095

以胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)和牛肉汁培养基(beef extract,BE)为生长基质,以不锈钢为接触面,探究不同培养基对大肠杆菌o157:h7生物膜形成能力的影响及菌株特性与其生物膜形成能力的相关性。结果表明,菌株、时间、培养基... 详细信息

以胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)和牛肉汁培养基(beef extract,BE)为生长基质,以不锈钢为接触面,探究不同培养基对大肠杆菌o157:h7生物膜形成能力的影响及菌株特性与其生物膜形成能力的相关性。结果表明,菌株、时间、培养基质的交互作用显著影响生物膜的形成(P大肠杆菌0157:h7生物膜形成的有用信息,有助于开发有效的生物膜去除技术,并应对牛肉行业中大肠杆菌0157:h7生物膜造成的危害。

关键词：大肠杆菌o157:h7 生物膜菌株特性不锈钢

大肠杆菌o157:h7噬菌体鸡尾酒喷雾干燥微囊粉剂的制备及其应用

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微生物学报 2023年第8期63卷 3203-3218页

作者：李瑾王瑜欣王许航李静付开来戴建君汤芳席静南京农业大学动物医学院江苏南京210095 广州海关技术中心广东广州510623 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

【目的】提高噬菌体在常温环境下的保存稳定性,解决噬菌体鸡尾酒在体内失活的问题,为噬菌体对肠道疾病的治疗提供参考依据。【方法】本研究采用喷雾干燥技术制备噬菌体鸡尾酒微球粉末,通过单因素试验和正交试验确定最佳制备条件,并对其... 详细信息

【目的】提高噬菌体在常温环境下的保存稳定性,解决噬菌体鸡尾酒在体内失活的问题,为噬菌体对肠道疾病的治疗提供参考依据。【方法】本研究采用喷雾干燥技术制备噬菌体鸡尾酒微球粉末,通过单因素试验和正交试验确定最佳制备条件,并对其特性进行研究,比较其与游离噬菌体在常温环境和体内环境的稳定性差异,并通过口服给药的方式对大肠杆菌(Escherichia coli)o157:h7导致的肠道疾病进行治疗。【结果】本研究以海藻糖和亮氨酸组合为保护剂制备了一种具有热稳定性的噬菌体鸡尾酒微球粉末,试验结果显示,海藻糖和亮氨酸质量比为9:1时,设置进料速度为7.5 mL/min、海藻糖浓度为2%、入口温度为130℃、噬菌体鸡尾酒悬液与保护剂溶液体积比为1:50,噬菌体滴度损失最小,仅下降(0.623±0.235)log10 PFU/g。其在常温条件下保存6个月,噬菌体鸡尾酒滴度损失(0.862±0.082)log10 PFU/g,较游离噬菌体具有更长的保存稳定性,且其于体内环境的稳定性和治疗效果均优于游离噬菌体鸡尾酒。【结论】采用喷雾干燥法配合合适的保护剂配方可制得具有生物活性和热稳定性的噬菌体鸡尾酒微球粉末,延长其保质期,便于常温条件下的保存运输,使噬菌体制剂从实验室方向转化为工业方向的规模化生产提供参考依据。且噬菌体微球粉末清除肠道内大肠杆菌的能力更强、速度更快,是一种具有体内治疗发展潜力的口服给药剂型。

关键词：噬菌体鸡尾酒喷雾干燥微球粉末大肠杆菌o157:h7 噬菌体治疗体内

大肠杆菌o157∶h7多糖-重组铜绿假单胞菌外毒素A结合疫苗的研制

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第11期24卷 905-909页

作者：王燕吴朝今杜送田蒋奕雍元李岷松赵志强蒋仁生杜琳谢贵林兰州生物制品研究所 730046

目的　用大肠杆菌o15 7∶h7(Escherichiacolio15 7∶h7,E .colio15 7)的一个重要保护性抗原即菌体脂多糖 (LPS)制备有效的候选疫苗。方法　选用Westphal热酚法提纯E .colio15 7∶h7的LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱... 详细信息

目的　用大肠杆菌o15 7∶h7(Escherichiacolio15 7∶h7,E .colio15 7)的一个重要保护性抗原即菌体脂多糖 (LPS)制备有效的候选疫苗。方法　选用Westphal热酚法提纯E .colio15 7∶h7的LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的o 特异性多糖 (o SP) ,然后采用己二酸二肼 (ADh)将其共价结合到琥珀酰化 (或没琥珀酰化 )重组铜绿假单胞菌外毒素 (rEPAsucc或rE PA)上。结果　制备得到的E .colio15 7∶h7的o SP rEPAsucc或o SP rEPA结合疫苗是安全有效的 ,其免疫原性要比单一o SP的免疫原性强 ,免疫小鼠后产生的血清抗LPSIgG抗体滴度比单一o SP免疫后产生的抗体水平均有显著性升高 (P olio15 7∶h7的o SP rEPAsucc结合疫苗可望作为一种预防肠出血性E .

关键词：结合疫苗大肠杆菌o157:h7 铜绿假单胞菌 LPS E.coli 外毒素A 多糖 EPA 共价结合 ADh

大肠杆菌o157:h7体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测

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南方医科大学学报 2019年第3期39卷 344-350页

作者：杜艳丽韩宗利王湘雨万成松深圳职业技术学院医护学院广东深圳518036 北京大学深圳医院神经外科广东深圳518036 南方医科大学公共卫生学院BSL-3实验室广东广州510515 深圳大学第一附属医院深圳市第二人民医院消化内科广东深圳518036

目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌o157:h7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌o157:h7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAP... 详细信息

目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌o157:h7无机多聚磷酸盐(polyP)的可靠方法。方法提取并纯化大肠杆菌o157:h7野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80℃速冻溶解、-20℃速冻溶解、60℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EhEC野生株、ppk1两个突变株polyP含量。结果应用360 nm激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm激发波长,DAPI-polyP最大发射波长为550 nm;应用405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光(425～475 nm),应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光(500～560 nm);最佳细菌前处理方法为-80℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5(R2=0.991),测定各株菌polyP量,其中野生株显著高于ppk1缺失突变株。结论 DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在肠出血型大肠埃希菌o157:h7中的作用提供技术支持。

关键词：无机多聚磷酸盐 DAPI染色大肠杆菌o157:h7

大肠杆菌o157:h7的冷冻损伤及解冻存活

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食品科学 2018年第6期39卷 82-87页

作者：姬赛赛王娴静马晶晶蒋小燕袁换云禹金龙江芸南京师范大学金陵女子学院江苏南京210097

为探讨冷冻后残存的大肠杆菌o157:h7(Escherichia coli o157:h7)在解冻后的存活情况,本研究首先比较4株*** o157:h7冷冻后的死亡和损伤情况,进而采用无营养的磷酸盐缓冲液作为基质研究冷冻后不同解冻方式对*** o157:h7存活的影响。结果... 详细信息

为探讨冷冻后残存的大肠杆菌o157:h7(Escherichia coli o157:h7)在解冻后的存活情况,本研究首先比较4株*** o157:h7冷冻后的死亡和损伤情况,进而采用无营养的磷酸盐缓冲液作为基质研究冷冻后不同解冻方式对*** o157:h7存活的影响。结果表明:4株*** o157:h7-20℃冷冻24、48、72 h后均发生了一定程度的死亡和损伤,冷冻时间越长细菌致死和致伤程度越明显,且存在菌株差异,冷冻72 h时菌株CICC21530的损伤率最高,为87.70%。采用混合菌株进行解冻实验,4株*** o157:h7磷酸盐缓冲液菌液冷冻后立即置于20、30、37℃解冻,细菌发生了进一步的死亡,解冻温度越高死亡越明显,3个温度组在解冻48 h时菌落数均显著低于冷冻72 h时菌落数(Ph),再置于37℃不同时间(5、10、30 min)观察菌株存活情况,结果表明4℃缓慢解冻时间越长,越有利于细菌的存活,4℃、12 h/37℃、5~30 min解冻方式下改良山梨醇麦康凯琼脂上菌落数仍显著低于胰蛋白胨大豆琼脂上的菌落数(P<0.05),表明仍有损伤菌的存在。本实验提示采用缓慢解冻反而有利于残存菌的存活,冷冻食品风险评估时应重视残存菌尤其是损伤菌的检测和控制。

关键词：大肠杆菌o157:h7 冷冻解冻存活损伤SurvivalofFrozenEscherichia

大肠杆菌o157:h7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒的组建及活菌检测

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现代食品科技 2022年第1期38卷 94-103页

作者：魏婉晴孔梁宇胡瑞瑞陆兆新周立邦孟凡强别小妹南京农业大学食品科技学院江苏南京210095

该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌o157:h7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性... 详细信息

该研究组建了基于高分辨熔解曲线分析的大肠杆菌o157:h7实时荧光定量PCR快速检测试剂盒,对试剂盒的灵敏度、特异性、抗干扰能力和检测人工污染样品的情况进行了评估,并在组建试剂盒的基础上,利用叠氮溴化丙锭(PMAxx)对活/死细胞的选择性,构建了大肠杆菌o157:h7活菌定量检测技术。结果显示,试剂盒特异性强,仅大肠杆菌o157:h7血清型有阳性扩增;最低检测限为84CFU/m L;在四种常见食源性致病菌干扰下能准确检测出大肠杆菌o157:h7;在人工污染食品样品的实际检测中,可检测到初始污染量为7.97×10^(0)CFU/m L的样品;通过单因素变化试验对PMAxx处理的各项参数进行优化,确立了曝光时间11 min、暗孵育时间20min、PMAxx浓度30μmol/L的最优反应体系,并与本研究组建的实时荧光定量PCR试剂盒相结合,建立了在3.4×10^(7)-3.4×10^(2)CFU/m L浓度范围内Ct值与菌液浓度线性关系良好的大肠杆菌o157:h7活菌定量检测方法,为食源性致病菌快速定量检测提供技术支持。

关键词：大肠杆菌o157:h7 实时荧光定量PCR 高分辨熔解曲线快速检测试剂盒叠氮溴化丙锭活菌检测

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大肠杆菌o157:h7胶体金试纸条研制

食品科学 2010年第24期31卷 355-359页

作者：黄岭芳段霞陈媛刘文娟魏华赖卫华南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 江西中德生物工程有限公司江西南昌330029

采用胶体金标记抗大肠杆菌o157:h7单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌o157:h7多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌o157:h7胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8... 详细信息

采用胶体金标记抗大肠杆菌o157:h7单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌o157:h7多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌o157:h7胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记ph8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳ph7.0～7.5。对26株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC13311和金黄色葡萄球菌CMCC26003有轻微交叉反应外,与其他24株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌o157:h7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。

关键词：大肠杆菌o157:h7 胶体金试纸条

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大肠杆菌o157:h7及其在食品中的检测

食品与发酵工业 2002年第1期28卷 64-67页

作者：刘江勋黎锡流唐清涛华南理工大学食品与生物学院

大肠杆菌o15 7:h7是一种感染剂量小 (10个活菌 ) ,危害性很大的致病菌。近年 ,在世界各地屡次发生大肠杆菌o15 7:h7的感染事件。因此 ,在食品卫生和安全领域 ,对大肠杆菌o15 7:h7致病机理、生物学特性、检测方法、预防和控制已成为研究... 详细信息

大肠杆菌o15 7:h7是一种感染剂量小 (10个活菌 ) ,危害性很大的致病菌。近年 ,在世界各地屡次发生大肠杆菌o15 7:h7的感染事件。因此 ,在食品卫生和安全领域 ,对大肠杆菌o15 7:h7致病机理、生物学特性、检测方法、预防和控制已成为研究热点。作者对大肠杆菌o15 7:h7的致病性、生化特性。

关键词：大肠杆菌o157:h7 致病性生化特性检测方法食品

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大肠杆菌o157:h7快速培养的初步研究

食品科学 2009年第7期30卷 145-147页

作者：赖卫华冯贻泽白熙安.克罗泽道森南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 堪萨斯州立大学动物科学与工业系美国曼哈顿66506

本研究将oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌o157:h7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加oxyrase酶的对照组相比,添加了oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌o157:h7的浓度明显提高。实验结果表明,oxyrase酶在大肠杆菌o157:h7快速... 详细信息

本研究将oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌o157:h7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加oxyrase酶的对照组相比,添加了oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌o157:h7的浓度明显提高。实验结果表明,oxyrase酶在大肠杆菌o157:h7快速培养中具有潜在的利用价值。

关键词： oxyrase酶兼性厌氧微生物大肠杆菌o157:h7