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食品与机械 2015年第2期31卷 134-139,215页

作者：陈幸莺湘潭市食品药品检验所湖南湘潭411100

建立以毒性较低、稳定性较好、费用较低的乙酸乙酯作为提取溶剂,通过涡旋2 min、超声波20 min组合一次性提取有效待测组分,进行气相色谱同时分离测定食品中12种防腐剂（丙酸、富马酸二甲酯、山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲... 详细信息

建立以毒性较低、稳定性较好、费用较低的乙酸乙酯作为提取溶剂,通过涡旋2 min、超声波20 min组合一次性提取有效待测组分,进行气相色谱同时分离测定食品中12种防腐剂（丙酸、富马酸二甲酯、山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸庚酯）的检测方法。该方法的回收率为92.1%-108.3%,平均回收率98.5%,回收率标准偏差3.0%,测定结果准确可靠。通过与标准方法规定的气相色谱方法、液相色谱方法进行比对,结果偏差符合方法学要求。

关键词：食品气相色谱防腐剂检测方法多通量

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基于原位滚环扩增的脑胶质瘤基因突变的可视化分型方法

基于原位滚环扩增的脑胶质瘤基因突变的可视化分型方法

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作者：陈小蕾北京工业大学

学位级别：硕士

胶质瘤是目前已知发病率最高的原发性颅内肿瘤,是组织学和基因上高度异质性的肿瘤。这种极高的异质性伴随着复杂的分子遗传学信息的改变,会导致肿瘤增殖能力、侵袭能力和药物敏感性的不同,最终会影响对肿瘤患者的疾病诊断与预后判断。... 详细信息

胶质瘤是目前已知发病率最高的原发性颅内肿瘤,是组织学和基因上高度异质性的肿瘤。这种极高的异质性伴随着复杂的分子遗传学信息的改变,会导致肿瘤增殖能力、侵袭能力和药物敏感性的不同,最终会影响对肿瘤患者的疾病诊断与预后判断。经典组织病理学对脑胶质瘤疾病的分型往往忽视肿瘤的高度异质性,难以对患者实现精准的诊断治疗及临床预后。2016年世界卫生组织在组织病理学的框架内加入了分子诊断的补充,将胶质瘤分成不同病理级别的亚型,基于基因表型的脑胶质瘤分型可以更加客观合理地指导病人的个体化诊疗。从单细胞水平实现对基因及突变位点的原位成像及精准定量,是脑胶质瘤细胞精准分型、临床诊断、预后判断以及研究病理机制的最有力的工具。本论文通过构建挂锁式探针耦合原位编码反应的策略,对脑胶质瘤细胞多个RNA突变及RNA相关标志物进行原位成像,实现单细胞及组织水平的脑胶质瘤不同病理级别的可视化分型,为研究脑胶质瘤细胞异质性和病理诊断及预后提供了分析新方法。具体内容和研究结果如下:***突变检测需要依赖方法对RNA序列的高碱基分辨率识别。通过构建模块化挂锁探针并耦合原位滚环扩增反应,在单细胞水平实现对单碱基突变位点的原位及单分子分辨率的检测。根据连接酶发生连接反应需要5’连接位点互补配对的原则,借助挂锁式探针的可设计性,将挂锁式探针的5’末端设计为突变位点的互补碱基。当突变位点存在时,锁环探针可被连接酶环化并触发下游扩增反应,使得探针可特异性识别单碱基突变位点。通过对挂锁式探针不同模块序列进行优化,降低序列的二级结构、空间位阻和潜在结合蛋白对序列杂交的影响,提高对靶标的识别效率和准确性。通过一系列实验验证了构建探针进行滚环扩增反应的可行性和对RNA突变的靶向准确性。2.多靶标检测可提高分子诊断的准确性。针对目前原位成像面临的检测通量低的挑战,构建了荧光编码策略,实现了同时对多个脑胶质瘤分子标志物基因进行单分子水平的检测和定量统计。利用核酸序列的可设计性,对挂锁式探针设计两个核酸模块,耦合四种荧光标记基团,实现了八种分子标志物的同时标记。该策略可在单分子水平分析IDH1、ATRX和TERT基因突变状态联合染色体1p/19q的缺失状态并进行定量。通过荧光共聚焦成像及图像解码分析,验证了荧光编码策略的可行性和多靶标检测的准确性。3.实现了单细胞水平及组织水平的不同病理级别的胶质瘤细胞可视化分型。本研究根据8种特异目标基因的不同表达模式,来表征脑胶质瘤细胞的特定类型:以基因IDH突变、TERT突变、ATRX野生以及1p和19q的共缺失表征少突胶质瘤细胞;以基因IDH突变、1p和19q的完整表达伴随TERT突变或者ATRX突变表征星形胶质瘤细胞;以基因IDH不发生突变、1p和19q的完整表达伴随ATRX突变或者TERT突变表征原发性胶质母瘤细胞。首先利用所构建的方法对混养细胞中的胶质瘤细胞进行了分子标志物的检测分析,实现了细胞水平对脑胶质瘤细胞的准确区分。通过对脑组织切片样品前处理后,利用原位滚环扩增技术实现了不同病理级别的脑组织中胶质瘤细胞的分子标志物的原位成像,构建了脑组织中胶质瘤细胞状态和位置的可视化分型方法,为脑胶质瘤病理研究及预后判断提供了分析新工具。

关键词：单分子多通量脑胶质瘤单碱基突变原位滚环扩增

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质谱流式细胞技术在生物医学领域的应用

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2022年第11期 298-305页

作者：刘良平王芳兰州大学第二临床医学院甘肃兰州730000 兰州大学医学实验中心甘肃兰州730000

作为普遍使用的单细胞技术之一,流式技术一直在生物学各研究领域都有着广泛的应用。质谱流式细胞技术对传统流式技术和质谱技术进行整合,不仅继承了传统流式细胞术高速分析的优势,同时又具有质谱检测的高分辨能力。金属标记的抗体和检... 详细信息

作为普遍使用的单细胞技术之一,流式技术一直在生物学各研究领域都有着广泛的应用。质谱流式细胞技术对传统流式技术和质谱技术进行整合,不仅继承了传统流式细胞术高速分析的优势,同时又具有质谱检测的高分辨能力。金属标记的抗体和检测方法解决了荧光串色的问题,并实现了几十个参数的同时测量。其强大的数据获取能力与现代信息生物学的分析手段紧密结合,对血液、免疫、肿瘤,药物筛选等多个领域的研究具有重大的推动作用。主要论述质谱流式细胞技术的原理、优势、应用及多维结果分析方法,为更好地利用这一新技术,促进生命医学领域的研究提供契机。

关键词：质谱流式细胞技术高维单细胞图谱多通量

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羧基化上转换棒状晶体的制备及其在生物检测中的应用

羧基化上转换棒状晶体的制备及其在生物检测中的应用

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作者：苏琳天津大学

学位级别：硕士

编码粒子的选择是实现高通量检测技术的关键。目前,应用最为广泛的编码微球多存在制备复杂,荧光干扰强以及荧光性能不稳定的问题。本文中通过简单易行的水热法制备了羧基化上转换棒状晶体材料,该材料的激发光源在近红外区域,有效地避免... 详细信息

编码粒子的选择是实现高通量检测技术的关键。目前,应用最为广泛的编码微球多存在制备复杂,荧光干扰强以及荧光性能不稳定的问题。本文中通过简单易行的水热法制备了羧基化上转换棒状晶体材料,该材料的激发光源在近红外区域,有效地避免了光学干扰,并且具有优异的荧光稳定性,在生物检测的应用中展现了独特的光学优势。具体研究内容如下:(1)上转换棒状晶体的合成及表征:采用水热法合成了形貌和尺寸均一的上转换晶体材料,初步探讨了不同反应条件对晶体生长的影响,利用扫描电子显微镜对合成材料进行了表面形貌和结构的表征。(2)单分散的上转换棒状晶体的制备和表征:利用酸溶液处理上转换晶体,去除表面的油酸配体。光学显微镜的观测结果显示,处理后的上转换晶体在水溶液中分散良好,且荧光明亮,足以肉眼观察;光谱测试结果显示,酸处理后的上转换晶体保持了原有的荧光性能。(3)上转换棒状晶体的表面功能化和表征:利用St?ber方法首先在上转换表面形成氨基化的硅壳,再通过接枝聚丙烯酸引入羧基功能团。采用透射电子显微镜,红外光谱仪和激光粒度仪等对其结构,基团和表面电位进行测试与表征。通过偶联荧光蛋白分子,进一步证明了引入的羧基可以作为有效的生物反应位点。此外,光纤光谱仪对光谱的测试结果显示,功能化的上转换晶体在PBS缓冲液中具有很好的时间稳定性和pH稳定性。(4)羧基化上转换棒状晶体在生物检测中的应用:采用上转换晶体和量子点编码微球作为编码粒子进行免疫检测分析。在对照组量子点编码微球的显微镜视野中,报告分子的荧光淹没在编码微球的强烈荧光中,荧光信号也产生严重变形。在上转换晶体的显微镜视野中观察到明显的报告分子荧光,且荧光信号的峰形保持完整。这证明上转换晶体作为编码粒子可避免光学干扰,明显优于量子点编码。综上所述,文中制备的羧基化上转换棒状晶体是一种荧光稳定性强,且制备方法简单易行的荧光材料,其作为编码粒子避免了光学干扰的难题,有望提高检测灵敏度和准确度,在生物检测领域中具有广阔的应用前景。

关键词：上转换棒状晶体荧光编码多通量表面功能化荧光稳定性

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