检索结果-南通市图书馆

东乡野生稻NBS-LRR类抗性基因同源序列的分离与鉴定

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国防科技大学学报 2008年第2期30卷 56-60页

作者：王正华杲修杰曹孟良国防科技大学计算机学院湖南长沙410073 国家杂交水稻工程技术研究中心湖南长沙410125

基于植物的抗性基因具有保守序列,根据已克隆基因的保守序列设计探针,利用菌落杂交的方法,对东乡野生稻大片段基因组文库进行筛选,得到两个候选克隆。序列比对发现其中含有NB-ARC的保守序列,可用于后续转基因鉴定。

关键词： NBS-LRR 抗性基因菌落杂交基因组文库

一种筛选微卫星位点的改进方法及其在小熊猫微卫星基因文库构建上的应用

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兽类学报 2005年第4期25卷 339-344页

作者：艳丽刘志瑾魏辅文李明中国科学院动物研究所北京100080

微卫星基因位点是在各个遗传学领域被广泛使用的分子标记.而对于首次研究的物种,必须筛选出可以应用的微卫星位点.对于分离微卫星位点来说由于只有大约0.5%～2%的重组体含有微卫星位点,所以标准的基因组文库需要至少产生5 000个重组体.... 详细信息

微卫星基因位点是在各个遗传学领域被广泛使用的分子标记.而对于首次研究的物种,必须筛选出可以应用的微卫星位点.对于分离微卫星位点来说由于只有大约0.5%～2%的重组体含有微卫星位点,所以标准的基因组文库需要至少产生5 000个重组体.传统的筛选方法就是通过检测大量重组体来定位这些少量的位点.近几年来出现了一些新的筛选方法,采用'富集'微卫星序列的技术将包含微卫星位点的重组体比例提高了10～100倍.这样就降低了筛选工作的时间和劳动强度,大大提高了筛选微卫星位点的效率.本文在结合了几种筛选微卫星位点技术路线的基础上,采用生物素标记探针杂交、富集和PCR筛选技术,对原有技术路线进行了改进.主要实验步骤为:1)基因组DNA的提取和消化;2)生物素标记探针富集;3)克隆建库;4)'PCR'筛选;5)引物设计和多态性检测.新的方法在小熊猫微卫星基因文库的构建中取得成功,获得了10个具有多态性的(CA)n重复序列微卫星位点.

关键词：微卫星基因组文库筛选小熊猫

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临床羊布鲁杆菌全基因组简易文库的构建

中国地方病防治 2018年第5期33卷 508-508页

作者：鲍智娟王照王铁峰白城师范学院吉林白城137000 吉林省地方病第一防治研究所

布鲁杆菌属于革兰氏阴性菌,人畜共患病,动物与人之间可传染,尤其是牛、羊养殖者感染率偏高,犬类也是易感动物之一,所以对于犬类宠物也要注意卫生。现在对布鲁杆菌的功能性蛋白研究较多,但这都需要获得布鲁杆菌的蛋白表达基因,因此而扩... 详细信息

布鲁杆菌属于革兰氏阴性菌,人畜共患病,动物与人之间可传染,尤其是牛、羊养殖者感染率偏高,犬类也是易感动物之一,所以对于犬类宠物也要注意卫生。现在对布鲁杆菌的功能性蛋白研究较多,但这都需要获得布鲁杆菌的蛋白表达基因,因此而扩增布鲁杆菌会带来人为扩散的风险,所以构建基因组文库,为布鲁杆菌基因层面的研究提供安全的种质资源库,是优先选择。本试验就一株从人医临床分离到的羊布鲁杆菌,构建布鲁杆菌全基因组简易文库。

关键词：布鲁杆菌属基因组文库全基因组临床分离羊革兰氏阴性菌易感动物人畜共患病

磁珠法半自动提取全血基因组DNA条件的优化

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浙江大学学报（医学版） 2012年第3期41卷 320-326页

作者：凌洁王昊张帅张丹丹来茂德朱益民浙江大学医学院流行病与卫生统计学系浙江杭州310058 浙江大学医学院病理学与病理生理学系浙江杭州310058

目的:探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素,建立快速、高效、批量提取全血基因组DNA的优化方案。方法:使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA,紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠... 详细信息

目的:探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素,建立快速、高效、批量提取全血基因组DNA的优化方案。方法:使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA,紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度。采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个因素的主效应和全血量与裂解时间、磁珠量,裂解时间与磁珠量的二阶交互作用对所提取DNA浓度和纯度的影响。结果:裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个主效应对DNA浓度的影响均存在统计学差异(P<0.05),当裂解时间为15 min,全血量为100μl,磁珠量为80μl,乙醇浓度为80%时,DNA平均浓度最高。磁珠量、裂解时间和全血量的交互作用对DNA OD260/OD280的比值有影响(P=0.008和P=0.013)。当磁珠量为40μl,裂解时间为15 min,全血量为100μl时,OD260/OD280的比值较好。磁珠量和乙醇浓度影响DNA OD260/OD230的比值(P=0.017和P<0.05),磁珠量为40μl,乙醇浓度为80%时,OD260/OD230的比值更好。结论:当DNA得率优先考虑时,可以选择裂解时间15 min、全血量100μl、磁珠量80μl、乙醇浓度80%的提取条件;而对DNA纯度要求较高时,可以将磁珠量改为40μl,以获得最优DNA提取效果。

关键词：自动化磁石 DNA/分离和提纯血液基因组文库正交试验乙醇细胞,培养的

柔红霉素生物合成基因簇的克隆及其基因打靶研究

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中国医药工业杂志 2014年第12期45卷 1128-1134页

作者：袁天杰谢丽萍朱宝泉胡又佳中国医药工业研究总院上海医药工业研究院上海欣生源药业有限公司上海200437

本研究通过构建柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌Streptomyces coeruleorubidus DM的基因组文库,获得2 230个重组克隆。利用菌落原位杂交和PCR筛选获得黏粒Cosmid 8-22,其插入片段大小为41 431 bp,含36个完整的开放阅读框,基本包含了完整... 详细信息

本研究通过构建柔红霉素产生菌天蓝淡红链霉菌Streptomyces coeruleorubidus DM的基因组文库,获得2 230个重组克隆。利用菌落原位杂交和PCR筛选获得黏粒Cosmid 8-22,其插入片段大小为41 431 bp,含36个完整的开放阅读框,基本包含了完整的柔红霉素生物合成基因簇。利用黏粒Cosmid 8-22成功构建了基因打靶系统,同时敲除部分dau W和完整的dnr X基因。HPLC结果显示,敲除突变株的柔红霉素产量较出发菌提高了3~4倍。

关键词：柔红霉素基因组文库基因打靶基因敲除

波卓霉素生物合成基因簇的异源表达及产量提高

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华中农业大学学报 2015年第1期34卷 49-58页

作者：周威张学文庄以彬刘晓楠殷华郁彭刘涛天津科技大学生物工程学院天津300457 中国科学院天津工业生物技术研究所天津300308

波卓霉素是从波卓链霉菌(Streptomyces bottropensis)中分离得到的,具有抗革兰氏阳性菌及支原体的生物活性,尤其重要的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和抗万古霉素肠球菌有抑菌活性。试验通过构建基因组文库,PCR筛选获得包含完整波卓霉... 详细信息

波卓霉素是从波卓链霉菌(Streptomyces bottropensis)中分离得到的,具有抗革兰氏阳性菌及支原体的生物活性,尤其重要的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和抗万古霉素肠球菌有抑菌活性。试验通过构建基因组文库,PCR筛选获得包含完整波卓霉素合成基因簇的柯斯质粒4E11,通过接合转移的方法把4E11转化至天蓝色链霉菌M145中,对获得的异源表达株M145/4E11进行发酵,通过提取纯化和HPLC-MS检测,表明M145/4E11发酵液中产生了波卓霉素;试验并通过Red/ET重组系统,以红霉素启动子(ermE*P1)替换了波卓霉素生物合成簇抗性基因btmA和前提肽合成基因btmD的启动子,成功实现异源表达株M145/4E11波卓霉素的产量提高。

关键词：波卓链霉菌波卓霉素基因组文库异源表达启动子替换

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基因簇大片段克隆技术研究进展及挑战

微生物学通报 2023年第1期50卷 351-367页

作者：高花花胡娟刘玲丽西北农林科技大学化学与药学院天然产物化学生物学重点实验室陕西杨凌712100

天然产物结构复杂、活性多样,是新药开发的重要来源,对天然产物生物合成途径的研究,有利于探索酶催化的合成机制,促进复杂天然产物的应用。天然产物的生物合成由其对应的基因簇调控,其中大量天然产物生物合成基因簇(biosynthetic gene c... 详细信息

天然产物结构复杂、活性多样,是新药开发的重要来源,对天然产物生物合成途径的研究,有利于探索酶催化的合成机制,促进复杂天然产物的应用。天然产物的生物合成由其对应的基因簇调控,其中大量天然产物生物合成基因簇(biosynthetic gene clusters,BGCs)在野生型菌株中无法表达或表达量低。对这些基因簇的研究,需要进行克隆表达,而如何克隆大片段基因簇并使其表达,从而发现新型天然产物是一个具有挑战性的问题。其中构建基因组文库、转化关联重组(transformation-associated recombination,TAR)、Red/ET重组等是克隆大片段基因簇的重要技术。本文从克隆技术的策略和应用两个方面,总结了这3种克隆技术目前的研究进展,讨论了目前大片段基因簇克隆技术面临的挑战,为研究大片段基因簇提供方法学借鉴。

关键词：天然产物生物合成基因簇基因组文库转化关联重组 Red/ET 基因簇异源表达

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家蝇卵黄蛋白基因的克隆与结构序列分析

中国生物化学与分子生物学报 2003年第4期19卷 445-450页

作者：夏平安刘维全江禹王本旭刘海鹏牛建强殷震解放军军需大学军事兽医研究所中国农业大学生物学院北京100094

家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因... 详细信息

家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因组文库中筛选出一个阳性克隆 ,并从该克隆中分离到大小为 3991bp的mdYP1基因组基因 .序列分析显示 ,该基因组序列含有约1 6kb的 5′ 上游区和 1 0kb的 3′ 下游区 ,编码区由一个 6 1bp的内含子和大小分别为 2 2 2bp和10 2 8bp的 2个外显子组成 .5′ 上游区含有典型的CAAT TATA盒 .

关键词：家蝇卵黄蛋白基因克隆结构序列分析基因组文库

环境微生物不依赖于培养的基因组学研究及应用

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中国生物工程杂志 2006年第9期26卷 76-83页

作者：王凤超刘巍峰陈冠军刘春朝山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室济南250100 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室北京100080

微生物在生物圈中分布广泛,并且在地球物质循环中占有重要地位,但是约99%的微生物目前还不能通过传统的培养方法得到纯培养物(即未培养微生物),给这些未培养微生物的研究带来很大的困难。随着分子生物学的快速发展及其在微生物研究中的... 详细信息

微生物在生物圈中分布广泛,并且在地球物质循环中占有重要地位,但是约99%的微生物目前还不能通过传统的培养方法得到纯培养物(即未培养微生物),给这些未培养微生物的研究带来很大的困难。随着分子生物学的快速发展及其在微生物研究中的广泛运用,促进了以环境中未培养微生物为研究对象的新兴学科——环境基因组学的产生和发展。在不进行相关微生物培养分离的情况下,通过从环境样品中直接提取获得所有微小生物的全部遗传物质,并构建环境基因组文库;进一步利用功能基因组学研究策略,从文库中寻找编码产生新的有生物活性产物的基因;通过对系统发育相关锚定位点基因序列分析,从而确定特定生态环境体系中未培养微生物的种类结构组成及进化地位,并最终重建该体系中微生物群体的基本物质循环模式。此外,环境基因组学也可以在对未培养微生物生理生化特性深入了解的基础上,建立发展合适的培养体系,最终获得某些特定微生物的纯培养物。对环境基因组的构建及相关分析研究策略的进展进行了综述;同时介绍了其微生物分类及在生态学研究中的应用。

关键词：未培养微生物环境基因组学基因组文库功能分析筛选微生物生态