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噬菌体抗体库技术的发展及未来

卫生研究 2004年第6期33卷 765-768页

作者：赵玉梅房师松赵树进深圳市园林科学研究所深圳518003 华南理工大学食品与生物工程学院广州军区广州总医院

噬菌体表面展示技术是近年发展起来的 ,将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达的新技术。应用PCR技术从生物体内扩增出整套抗体轻、重链可变区基因 ,克隆到λ噬菌体表达系统 ,构建噬菌体抗体库 ,通过抗原亲和吸附 -洗... 详细信息

噬菌体表面展示技术是近年发展起来的 ,将外源蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面融合表达的新技术。应用PCR技术从生物体内扩增出整套抗体轻、重链可变区基因 ,克隆到λ噬菌体表达系统 ,构建噬菌体抗体库 ,通过抗原亲和吸附 -洗脱 -增殖 ,从中筛选富集多种目的克隆 ,制备相应单克隆抗体。

关键词：噬菌体表面展示技术 PCR 噬菌体抗体库

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噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究

细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 664-667页

作者：王明桥罗文新陈瑛炜袁权王晋张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室福建厦门361005

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的... 详细信息

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索。结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高。包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10mg/L抗原竞争洗脱60min,可得到较高的阳性率。结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整。

关键词：噬菌体抗体库固相筛选筛选条件

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噬菌体抗体库的构建及抗AFP人单抗的筛选

第三军医大学学报 2000年第7期22卷 682-684页

作者：肖天利刘为纹房殿春第三军医大学附属西南医院消化内科重庆400038

目的　运用噬菌体抗体库技术 ,制备人源性抗AFPFab段 ,为进一步的研究和临床运用打下基础。方法　用RT PCR方法扩增人免疫球蛋白重链Fd及κ链基因 ,构建噬菌体抗体库 ,筛选出人抗AFPFab片断 ,用ELISA检测其特异性。结果　初步克隆出人抗... 详细信息

目的　运用噬菌体抗体库技术 ,制备人源性抗AFPFab段 ,为进一步的研究和临床运用打下基础。方法　用RT PCR方法扩增人免疫球蛋白重链Fd及κ链基因 ,构建噬菌体抗体库 ,筛选出人抗AFPFab片断 ,用ELISA检测其特异性。结果　初步克隆出人抗AFPFab ,该Fab具有结合AFP的活性。结论　噬菌体抗体库技术绕过了细胞杂交这一步骤 ,较好的解决了人体杂交瘤低效的难题 ,为人源性单抗的制备开辟了广阔的前景。

关键词：噬菌体抗体库人单克隆抗体 AFP 筛选

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噬菌体抗体库技术及其在水产养殖的应用前景

水产学报 2004年第3期28卷 329-333页

作者：章晋勇吴英松汪建国中国科学院水生生物研究所中国科学院水生生物研究所湖北武汉　430072

Phage display antibody library has been proven to be a powerful technique used in development of antibodies. Since it was established in 1990, the technology has made enormous improvement and played more and more important role in basic research of biology, immunology, oncology, protein engineering, ligand-receptor studies and proteomics among others in last two decades while there is no report about the application of it in aquaculture so far. It is a success implication of phage display technique in antibody engineering in which antibodies or antibody fragments are displayed on the surface of filamentous bacteriophage by genetic fusion to a coat protein of phage. Cooperating with the effective screening technique, affinity panning, these form the principle of phage display antibody library. The most characteristic of it is a direct physical link between phenotype and genotype. So, the technology makes it practicable to improve characteristic of selected antibodies by genetic manipulation. In the present work, the background, principle and advantages of the powerful tool over traditional hybridroma technolgy are summarized. In addition, several key problems possible to face in the course of application of the technology, including improving the diversity of library, augmentation of library size, generation of high affinity antibody and effective screening of specific antibody were dissertated. At last the possible implication prospect of phage display antibody technique in aquaculture was discussed, especially in elucidating the immune system of fish and producing large amount antibodies with important diagnostic and therapeutic value in fish diseases.

关键词：噬菌体抗体库应用前景水产养殖

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噬菌体抗体库构建技术在疾病防治中的应用

生物技术通报 2011年第10期27卷 84-89页

作者：张聪敏霍萍萍赵宝华河北师范大学生命科学学院石家庄050016

噬菌体抗体库技术(phage antibody library)是近年发展的一项分子生物学新技术,近年来越来越多的学者利用这项技术获得目标抗体以应用于医疗制药及安全检测等多个领域。噬菌体抗体库技术的发展和应用,为抗体技术领域带来了巨大的变化,... 详细信息

噬菌体抗体库技术(phage antibody library)是近年发展的一项分子生物学新技术,近年来越来越多的学者利用这项技术获得目标抗体以应用于医疗制药及安全检测等多个领域。噬菌体抗体库技术的发展和应用,为抗体技术领域带来了巨大的变化,极大地推动了各种性能优良基因工程抗体的开发和应用。针对噬菌体抗体库构建的原理、方法、构建过程中所需考虑的因素以及在不同领域的应用作了综述。

关键词：噬菌体抗体库文库多样性疾病防治

噬菌体抗体库的构建及人源抗内毒素类脂A抗体的筛选

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中华传染病杂志 2001年第4期19卷 236-239页

作者：韩晓芳王希良郭力军冯笑梅赵建平杜英高玉明内蒙古自治区医院呼和浩特010017 重庆第三军医大学全军免疫研究所

目的　寻找一种治疗内毒素血症及其并发症较为有效的途径。方法　从感染革兰阴性杆菌J7患者体内含有内毒素类脂A抗体的淋巴细胞中提取mRNA ,经反转录再从IgG重链Fd两端及轻链通用引物分别扩增Fab基因片段 ,依次插入到噬菌体载体 pCOMB3... 详细信息

目的　寻找一种治疗内毒素血症及其并发症较为有效的途径。方法　从感染革兰阴性杆菌J7患者体内含有内毒素类脂A抗体的淋巴细胞中提取mRNA ,经反转录再从IgG重链Fd两端及轻链通用引物分别扩增Fab基因片段 ,依次插入到噬菌体载体 pCOMB3中 ,电穿孔转入大肠杆菌XL1 blue ,经辅助病毒VCSM13感染 ,重组噬菌体溶源裂解。结果　Fab抗体表达于噬菌体CPⅢ的N端 ,噬菌体抗体库的容量为 4 .8× 10 6 ,筛选出抗内毒素类脂A抗体 ,经LPS蛋白对噬菌体抗体库进行3轮淘选 ,使抗内毒素类脂A的特异性抗体得到 10 0倍的富集。结论　通过直接和竞争ELISA实验筛选出 3株结合活性好的特异性抗体 ,为下一步应用研究奠定了基础。

关键词：噬菌体抗体库内毒素 Fab抗体脓毒血症内毒素血症

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噬菌体抗体库技术及其研究进展

细胞生物学杂志 2009年第5期31卷 629-634页

作者：杨乃娣詹金彪浙江大学医学院生物化学与遗传学系杭州310058

噬菌体抗体库技术将噬菌体展示技术与PCR技术相结合,在噬菌体表面成功表达抗体可变区基因,从而得到多样性噬菌体抗体集合。目前,噬菌体抗体库技术逐渐成为获得人源性抗体的主要手段之一,已有多株来源于噬菌体抗体库技术的单克隆抗体应... 详细信息

噬菌体抗体库技术将噬菌体展示技术与PCR技术相结合,在噬菌体表面成功表达抗体可变区基因,从而得到多样性噬菌体抗体集合。目前,噬菌体抗体库技术逐渐成为获得人源性抗体的主要手段之一,已有多株来源于噬菌体抗体库技术的单克隆抗体应用于临床。现就噬菌体抗体库构建、筛选及应用作一综述。

关键词：噬菌体抗体库噬菌体展示

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多药耐药性肿瘤细胞相关噬菌体抗体库的构建

华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第6期28卷 597-600页

作者：钱峰魏东芝胡薇张新韩泽广华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室生物化学研究所上海200237 国家人类基因组南方研究中心上海201203

利用噬菌体抗体库技术 ,构建了多药耐药性肿瘤细胞相关噬菌体抗体库。以多药耐药性肿瘤细胞 KB- A1为免疫原免疫 Bal B/c小鼠 ,从其脾脏提取总 RNA,并分离出 m RNA。RT- PCR扩增出 VH 和 VL 基因 ,经重叠延伸反应组装成单链抗体 ( Sc Fv... 详细信息

利用噬菌体抗体库技术 ,构建了多药耐药性肿瘤细胞相关噬菌体抗体库。以多药耐药性肿瘤细胞 KB- A1为免疫原免疫 Bal B/c小鼠 ,从其脾脏提取总 RNA,并分离出 m RNA。RT- PCR扩增出 VH 和 VL 基因 ,经重叠延伸反应组装成单链抗体 ( Sc Fv)。将其克隆入噬菌粒载体p CANTAB 5 E中 ,电转化 E. coli TG1 ,成功构建了库容为 0 .8× 1 0 6的噬菌体抗体库。

关键词：多药耐药性肿瘤细胞噬菌体抗体库肿瘤化疗

从噬菌体抗体库中筛选血管内皮细胞新型嘌呤受体功能抗体的研究

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中国药理学通报 2007年第3期23卷 311-316页

作者：山丽梅赵艳玲张萍金城蔡光明肖小河解放军第302医院药学部北京100039

目的筛选鉴定血管内皮细胞新型嘌呤受体功能性抗体,为进一步研究新型嘌呤受体提供标志物。方法大鼠血管内皮细胞蛋白质免疫BALB/c小鼠,采用噬菌体抗体库技术构建小鼠抗大鼠血管内皮细胞的单链噬菌体抗体库。利用新型嘌呤受体在主动脉内... 详细信息

目的筛选鉴定血管内皮细胞新型嘌呤受体功能性抗体,为进一步研究新型嘌呤受体提供标志物。方法大鼠血管内皮细胞蛋白质免疫BALB/c小鼠,采用噬菌体抗体库技术构建小鼠抗大鼠血管内皮细胞的单链噬菌体抗体库。利用新型嘌呤受体在主动脉内皮细胞表达而在血管平滑肌细胞不表达的特点,先用主动脉内皮细胞进行阳性筛选,再用血管平滑肌细胞进行阴性筛选,从噬菌体抗体库中富集主动脉内皮细胞特异抗体。对筛选到的抗体经可溶性表达后,采用离体血管环功能试验,筛选新型嘌呤受体特异单链抗体。采用免疫组化实验对筛选到的抗体进行鉴定。结果经过4次免疫后,小鼠血清抗内皮细胞蛋白的IgG效价为1∶16000,通过噬菌体表面呈现,得到小鼠抗大鼠内皮细胞免疫噬菌体抗体库容量为8×106。4轮主动脉内皮细胞阳性筛选及大鼠血管平滑肌细胞阴性筛选富集到约2500株主动脉内皮细胞特异抗体,可溶性表达后,在离体血管环上,经过4轮的逐级淘筛得到一株影响腺苷诱发NO依赖性血管收缩反应的功能性抗体ScFv-B,其抑制率为83.4%±21.6%。免疫组化鉴定此抗体与内皮细胞特异结合,功能性鉴定此抗体对腺苷诱发的肠肌收缩反应无影响,初步认为此抗体是新型嘌呤受体特异性功能抗体。结论本研究通过噬菌体抗体库的构建及抗体筛选和鉴定,得到了新型嘌呤受体特异性功能抗体ScFv-B,为进一步采用表达文库筛选的方法克隆新型嘌呤受体基因提供了良好的工具。

关键词：嘌呤受体血管内皮细胞噬菌体抗体库腺苷