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噬菌体展示系统的研究进展

生命的化学 1996年第3期16卷 29-34页

作者：许正平李伯良浙江大学生物科学与技术系中国科学院上海生物化学研究所

噬菌体展示系统的研究进展许正平（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）李伯良（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词噬菌体展示系统噬菌体展示是一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于... 详细信息

噬菌体展示系统的研究进展许正平（浙江大学生物科学与技术系，杭州３１００２７）李伯良（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词噬菌体展示系统噬菌体展示是一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体衣壳蛋白融合并展示于噬菌体表面的技术。若展示的是随机肽...

关键词：噬菌体噬菌体展示系统衣壳蛋白

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多功能M13KE噬菌体展示系统的建立

生物技术通报 2014年第2期30卷 143-147页

作者：方月琴郭娟宁陆豪杰朱国强江苏健雄职业技术学院苏州215411 扬州大学兽医学院扬州225009 新乡医学院新乡453003

以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因III(wt-ge... 详细信息

以M13KE噬菌体为起始载体,建立一种无需辅助噬菌体的较长片段多肽库展示系统,以解决当前噬菌体展示仅能筛选短肽库现象,并扩大靶向高通量筛选范畴。根据M13KE次要外壳蛋白(Minor coat protein of wild-type M13KE,wt-pⅢ)基因III(wt-gene Ⅲ)结构与功能关系,设计并扩增出能发挥其基因功能的截短基因Ⅲ(Truncated gene Ⅲ,tgⅢ);通过拼接-重叠-延伸PCR(Splice-overlapping-extension polymerase chain reaction,SOEing-PCR)获得含启动子、信号肽和结构基因的融合基因片段,将其插入至M13KE载体的合适部位,进行蛋白质诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析。同时在wt-gⅢ和tgⅢ部位分别插入HA和c-Myc多肽标签,再次进行表达和检测。结果显示,tgⅢ被插入到M13KE的非必需部位,利用抗蛋白III(anti-M13 pⅢ)抗体进行Western blot检测发现,wt-gⅢ和tgIII均能表达pIII(protein Ⅲ,pⅢ);anti-HA和c-Myc抗体都能检测到2个标签蛋白和pⅢ蛋白质的表达。获得一种多功能M13KE载体,具有既能表达短片段多肽库,也能表达较长片段多肽库的潜能,而且无需辅助噬菌体,可用于更大范围的高通量靶向筛选。

关键词：靶向高通量筛选噬菌体展示系统 M13KE 长片段多肽库

噬菌体展示系统筛选糖尿病相关抗原蛋白及应用效果评价

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中国医药生物技术 2019年第6期14卷 517-521页

作者：刘尧林骏梁永羿山云王洪涛徐良深圳市药品检验研究院/深圳市医疗器械检测中心体外诊断试剂部

目的用噬菌体展示系统筛选与糖尿病相关的自身抗原新表位,表达新抗原肽段并评价其在糖尿病诊断中的应用效果。方法以Ⅰ型糖尿病血清作为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体肽库进行淘选,测序淘选的噬菌体并用ELISA检测噬菌体与靶分子的结合效果,BL... 详细信息

目的用噬菌体展示系统筛选与糖尿病相关的自身抗原新表位,表达新抗原肽段并评价其在糖尿病诊断中的应用效果。方法以Ⅰ型糖尿病血清作为靶分子,对Ph.D.-12噬菌体肽库进行淘选,测序淘选的噬菌体并用ELISA检测噬菌体与靶分子的结合效果,BLAST分析特异性最好的表位与糖尿病的相关性,选择合适的目的基因合成重组质粒,用Expi293细胞表达新抗原肽段并检测该抗原与临床血清的特异结合效果。结果共完成2418个噬菌体单克隆的测序,淘选出93种表位序列,11种具有代表性的表位中测序超过200次的有4种,对特异性最强的表位序列"-GTFLFSLCAAVY"进行分析后选择mTOR相关蛋白mEAK-7作为目的基因,抗原肽段与临床血清的特异性结合效果为:Ⅰ型糖尿病阳性率为17%,Ⅱ型糖尿病阳性率为4%。结论 mEAK-7蛋白对糖尿病血清具有一定的抗原特异性,该基因与糖尿病可能有相关性,具有很好的研究价值。

关键词：噬菌体展示系统糖尿病自身抗体抗原表位

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单链抗体展示系统研究进展

生物工程学报 2023年第9期39卷 3681-3694页

作者：陈遥舒星富赵钰张博文马忠仁张海霞西北民族大学生物医学研究中心、生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)是由抗体重链可变区(variable region of heavy chain,VH)和轻链可变区(variable region of light chain,VL)通过柔性短肽连接组成的小分子,是具有完整抗原结合活性的最小功能片段,包含抗体识别及抗原结合部位。相比于其他抗体,scFv具有分子量小、穿透性强、免疫原性弱、易构建表达等优点。目前,scFv最常用的展示系统主要有噬菌体展示系统、核糖体展示系统、mRNA展示系统、酵母细胞表面展示系统和哺乳动物细胞展示系统等。近年来,随着scFv在医学、生物学、食品安全学等领域的发展,使得其在生物合成和应用研究方面备受关注。本文对近年来scFv展示系统的研究进展作一综述,以期为scFv的筛选及应用提供理论基础。

关键词：单链抗体基因工程抗体噬菌体展示系统核糖体展示系统

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噬菌体展示疫苗的研究进展

中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1132-1137页

作者：王财赵子红(综述) 李唯峰张玉妥(审校) 河北北方学院病原生物学与免疫研究所河北张家口075000

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗... 详细信息

噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,因其固有的免疫原性、遗传可塑性、稳定性及安全性等优势,使其在疫苗研发中具有独特的潜力。目前,有较多利用其构建疫苗递送平台的研究,主要包括噬菌体展示疫苗、噬菌体DNA疫苗及杂交噬菌体DNA疫苗3种形式,其中研究最为广泛的是噬菌体展示疫苗。噬菌体展示技术是一种新型疫苗制备技术,是以噬菌体为载体,通过将外源多肽或蛋白基因整合至噬菌体基因中,以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面的分子生物学技术。本文主要就噬菌体展示疫苗的免疫学基础、展示系统及其在疾病预防应用的研究进展作一综述,以期为噬菌体展示疫苗的研发与应用提供参考。

关键词：噬菌体噬菌体展示疫苗噬菌体展示系统

猪传染性胃肠炎病毒猪源单链抗体的筛选与鉴定

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中国兽医科学 2021年第6期51卷 695-704页

作者：孙宇王宁高崇周晗姜艳平崔文乔薪瑗唐丽杰徐义刚王丽李一经东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省动物疾病防控技术与制剂创制实验室黑龙江哈尔滨150030

为了获得猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的单链抗体,首先利用噬菌体展示技术,构建猪源噬菌体单链抗体库,然后,通过微孔板筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,并用ELISA检测单链抗体与TGEV的亲和力,对亲和性较高的单链抗体进行基因测序与分析。结... 详细信息

为了获得猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的单链抗体,首先利用噬菌体展示技术,构建猪源噬菌体单链抗体库,然后,通过微孔板筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛,并用ELISA检测单链抗体与TGEV的亲和力,对亲和性较高的单链抗体进行基因测序与分析。结果表明,成功构建了猪源噬菌体单链抗体库,其库容为1.89×107 CFU/mL,通过Phage ELISA和Fab ELISA筛选得到4株与TGEV具有高亲和力的单链抗体,并通过桑格测序获得了与TGEV亲和性最佳的2株抗体的基因序列。利用在线生物信息学工具对所获得的抗体基因序列进行分析,结果表明,这2株单链抗体基因序列分别由猪源IgG的重链可变区基因(V_(H))和κ型轻链可变区基因(V_(L))构成,V_(H)和V_(L)均由3个CDR区和4个FR区构成,说明上述基因序列为完整的猪源TGEV抗体可变区。本研究的结果将为TGEV抗体药物的开发提供必要材料,为TGEV感染仔猪的临床治疗提供新的思路。

关键词：猪源噬菌体抗体库传染性胃肠炎病毒单链抗体噬菌体展示系统

噬菌体展示技术定位主要食物过敏原表位的研究进展

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食品工业科技 2015年第3期36卷 379-384页

作者：袁水林李欣陈红兵高金燕熊鼎南昌大学食品科学与技术国家重点实验室江西南昌330047 南昌大学生命科学与食品工程学院江西南昌330047 南昌大学中德联合研究院江西南昌330047

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌... 详细信息

噬菌体展示技术是一项可以在噬菌体颗粒的表面展示外源多肽的体外筛选技术。由于该技术实现了基因和蛋白质的体外统一,现已被广泛应用于生命科学和医学等领域。目前噬菌体展示系统主要有丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统和T7噬菌体展示系统。本文主要介绍了噬菌体展示技术以及该技术在八类食物抗原表位分析的应用。

关键词：噬菌体展示技术噬菌体展示系统食物过敏表位应用

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细粒棘球蚴表位质粒的构建和噬菌体展示

中国病原生物学杂志 2015年第12期10卷 1108-1111页

作者：兰希胡晓安刘玉梅张春桃刘学磊冯宁王倩温浩丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的合成Eg95T-B联合表位肽段,通过噬菌体展示技术获得含不同联合表位的肽段,为细粒棘球蚴病的多抗原表位疫苗的研制奠定基础。方法采用DNAman软件设计3对相应引物,分别扩增各段联合表位的核苷酸序列,连接PMD18-T载体,PCR扩增测序正确... 详细信息

目的合成Eg95T-B联合表位肽段,通过噬菌体展示技术获得含不同联合表位的肽段,为细粒棘球蚴病的多抗原表位疫苗的研制奠定基础。方法采用DNAman软件设计3对相应引物,分别扩增各段联合表位的核苷酸序列,连接PMD18-T载体,PCR扩增测序正确的序列,然后用T4连接酶将各段外源基因重组到M13KE噬菌体载体上,构建M13KE/Eg95-1、M13KE/Eg95-2和M13KE/Eg95-3质粒,转入大肠埃希菌ER2738感受态细胞中,运用PCR方法对插入序列进行初步鉴定,测序确定序列正确且无基因突变。使各段基因所对应的外源肽融合表达于M13KE噬菌体PⅢ蛋白上,通过PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体。结果成功构建了M13KE/Eg95-1 M13KE/Eg95-2与M13KE/Eg95-3噬菌体展示系统,PCR扩增Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3片段分别为192、168和222bp,与预期大小一致。结论成功构建了T细胞和B细胞联合表位的噬菌体展示系统,为抗原表位的筛选奠定了基础。

关键词： Eg95 表位质粒噬菌体展示系统

DON模拟表位的两种表达载体的构建及应用研究

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DON模拟表位的两种表达载体的构建及应用研究

作者：徐富勇南昌大学

学位级别：硕士

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)是一种由镰刀菌产生的霉菌毒素,由于DON对人及动物具有致畸作用、细胞毒性及免疫毒性等危害,因此其污染对人类和动物的安全构成了严重的威胁。目前,DON的分析检测方法主要包括高效液相色谱法... 详细信息

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON)是一种由镰刀菌产生的霉菌毒素,由于DON对人及动物具有致畸作用、细胞毒性及免疫毒性等危害,因此其污染对人类和动物的安全构成了严重的威胁。目前,DON的分析检测方法主要包括高效液相色谱法、薄层色谱法、液相-质谱联用法等。但这些方法都耗时耗力、操作复杂。酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是一种以免疫化学为基础的检测方法,它具有灵敏度高、检测快速和操作简便等特性。但是,常规ELISA检测方法需要使用DON标准品偶联载体蛋白制备竞争抗原,存在DON标准品购买成本高和对检测操作人员的健康有害等缺陷。因此,寻求一种能够代替DON进行ELISA检测的物质显得非常有必要。DON模拟表位(CMRPWLQ),简称CDON,能够替代天然抗原与抗DON抗体相结合,且DON模拟表位具有无毒及廉价等特性。因此,DON模拟表位的高效表达给以上问题提供了一条新的解决途径。本研究构建了两种表达载体,并以之表达了二种CDON的融合蛋白,使用ELISA方法检测两种融合蛋白的反应原性,建立了DON的无毒ELISA检测方法。主要结果如下： 1.将含有DON模拟表位(CMRPWLQ)及BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的T11T12寡核苷酸双链克隆至pGEX-4T-1质粒,构建出了pGEX-4T-1-CDON重组质粒。将含有DON模拟表位(CMRPWLQ)及BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的T13T14寡核苷酸双链克隆至pC89S4噬菌粒,构建出了重组噬菌粒pC89S4-CDON。 2.将pGEX-4T-1-CDON转化感受态BL21(DE3),得到工程菌pGEX-4T-1-cdon,对诱导时间、温度、加入IPTG时菌体浓度及IPTG的量进行了优化。得出最优条件为当菌体浓度达到0.6时加入IPTG至终浓度为1mM,于25℃诱导表达6h。超声破碎菌体,利用GST-resin纯化系统得到97%纯度的融合蛋白。 3.将pC89S4-CDON转化感受态XL1-Blue,得到工程菌pC89S4-cdon。通过丝状噬菌体pⅧ展示系统表达出了展示有高密度DON模拟表位的重组噬菌体,对诱导时间、温度、辅助噬菌体KM13超感染是菌体浓度、加入IPTG时菌体浓度及IPTG的量进行优化。噬菌体展示DON模拟表位融合蛋白pⅧ-CDON的最佳条件为：当菌体浓度达到0.3时加入KM13超感染,继续培养至OD600达到0.6时,加入IPTG至终浓度为1mM,于25℃诱导表达8h,纯化得到2.04mgpⅧ-CDON融合蛋白。 4.使用ELISA方法比较了两种表达载体表达的GST-CDON和pⅧ-CDON融合蛋白与抗DON抗体的反应原性,使用间接竞争性ELISA方法绘制标准曲线,进行了DON加标回收试验,建立了DON的无毒ELISA检测方法。

关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位 ELISA 噬菌体展示系统融合蛋白