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miR-96-5p靶向HOXa9促进乳腺癌细胞增殖侵袭的机制研究

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中国优生与遗传杂志 2024年第2期32卷 228-236页

作者：吴丽华钟慕仪黄珂铭王西跃罗锐娟陈丽娟林正权袁惠玲南方医科大学第十附属医院/东莞市人民医院乳腺科广东东莞523000

目的探究miR-96-5p靶向同源盒基因a9(HOXa9)促进乳腺癌细胞增殖侵袭的机制。方法收集2022年9—12月经手术切除的60例乳腺癌、癌旁组织样本及患者完整临床资料,miRNA微阵列分析2对乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNA。qRT-PCR检测乳腺癌... 详细信息

目的探究miR-96-5p靶向同源盒基因a9(HOXa9)促进乳腺癌细胞增殖侵袭的机制。方法收集2022年9—12月经手术切除的60例乳腺癌、癌旁组织样本及患者完整临床资料,miRNA微阵列分析2对乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNA。qRT-PCR检测乳腺癌、癌旁组织及乳腺癌细胞系miR-96-5p表达水平,分析miR-96-5p表达与临床病理特征的关系。通过MTT、克隆形成、EdU法、划痕、Transwell实验与体内异种移植实验检测miR-96-5p对乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7的影响,分析预测miR-96-5p与HOXa9的靶向作用关系。WB检测乳腺癌、癌旁组织、细胞HOXa9、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达,统计裸鼠成瘤体积、质量、肝转移灶数量,免疫组化检测肿瘤HOXa9、β-catenin表达情况。结果qRT-PCR检测结果显示,乳腺癌组织miR-96-5p水平升高(Pa9水平降低(P96-5p高表达与肿瘤大小≥3 cm、淋巴结转移阳性、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期相关(P96-5p表达可降低MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力、Wnt-1、β-catenin、Cyclin D1表达水平、裸鼠肿瘤体积、质量、肝转移灶数量(Pa9表达水平(P96-5p靶向调控HOXa9表达,过表达HOXa9可逆转miR-96-5p对乳腺癌细胞恶性生物学行为的促进效果。结论miR-96-5p通过抑制HOXa9表达激活Wnt/β-catenin信号通路,促进乳腺癌发展。

关键词： miR-96-5p 同源盒基因a9 乳腺癌增殖侵袭

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姜黄素抗胶质瘤作用的分子机制研究

中华神经医学杂志 2021年第2期20卷 141-152页

作者：胡科贾东佩任应国白方会张保朝南阳市中心医院神经康复科 473000 南阳市中心医院神经内科 473000

目的探讨姜黄素抗胶质瘤作用的分子机制。方法(一)细胞实验:(1)取对数生长期的U251MG、SHG-44细胞,分别分为姜黄素组与对照组、阴性对照小干扰RNA(siRNA)组与H19 siRNA组、阴性对照siRNA+姜黄素组与H19 siRNA+姜黄素组、H19 siRNA+阴性... 详细信息

目的探讨姜黄素抗胶质瘤作用的分子机制。方法(一)细胞实验:(1)取对数生长期的U251MG、SHG-44细胞,分别分为姜黄素组与对照组、阴性对照小干扰RNA(siRNA)组与H19 siRNA组、阴性对照siRNA+姜黄素组与H19 siRNA+姜黄素组、H19 siRNA+阴性对照抑制物组与H19 siRNA+miR-491-5p抑制物组、H19 siRNA+阴性对照抑制物+姜黄素组与H19 siRNA+miR-491-5p抑制物+姜黄素组、miR-491-5p模拟物+空白质粒+姜黄素组与miR-491-5p模拟物+同源盒基因a9(HOXa9)过表达质粒+姜黄素组,各组细胞分别予10μmol/L姜黄素或阴性对照siRNA、H19 siRNA转染或miRNA抑制物、miR-491-5p抑制物共转染或miR-491-5p模拟物+空白质粒、miR-491-5p模拟物+HOXa9过表达质粒共转染等不同处理。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞中H19、miR-491-5p、HOXa9 mRNA的表达水平,采用细胞计数试剂(CCK)-8法检测各组细胞的增殖率,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,采用平板克隆法检测各组细胞的克隆形成数,采用Transwell小室实验检测各组细胞的迁移情况,采用Western blotting法检测各组细胞中HOXa9蛋白的表达水平。(2)取对数生长期的293T细胞,分别分为阴性对照模拟物+野生型H19组与miR-491-5p模拟物+野生型H19组、阴性对照模拟物+野生型HOXa93'-UTR组与miR-491-5p模拟物+野生型HOXa93'-UTR组,各组细胞分别予阴性对照miRNA模拟物、miR-491-5p模拟物与野生型H19、野生型HOXa93'-UTR质粒载体共转染等不同处理。采用双荧光素酶报告实验检测各组细胞的荧光素酶活性。(二)病例标本实验:收集南阳市中心医院神经外科自2017年5月至2019年5月手术切除且经病理检查确诊为胶质瘤的30例组织标本(胶质瘤组)及同期行内减压术获得的30例正常脑组织标本(正常组),采用qRT-PCR法检测各组标本中H19、miR-491-5p、HOXa9 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测各组标本中HOXa9蛋白的表达水平。(三)裸鼠实验:将24只裸鼠按随机数字表法分为阴性对照shRNA组、H19 shRNA组、阴性对照shRNA+姜黄素、H19 shRNA+姜黄素组,每组6只,分别腹腔注射稳定转染阴性对照shRNA、H19 shRNA的U251MG细胞以及次日注射60 mg/kg剂量姜黄素。分别于饲养第7、11、15、19、23、27天时测量各组大鼠的肿瘤体积,并采用qRT-PCR法检测肿瘤组织中H19、miR-491-5p、HOXa9 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测HOXa9蛋白的表达水平。结果(一)细胞实验:(1)姜黄素组与对照组相比、H19 siRNA组与阴性对照siRNA组相比,前者U251MG、SHG-44细胞中H19、HOXa9 mRNA和HOXa9蛋白的表达水平明显降低,miR-491-5p mRNA的表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P9 siRNA+miR-491-5p抑制物组与H19 siRNA+阴性对照抑制物组相比,前者U251MG、SHG-44细胞中HOXa9 mRNA和蛋白的表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P9 siRNA组与阴性对照siRNA组相比、H19 siRNA+姜黄素组与阴性对照siRNA+姜黄素组相比,前者U251MG、SHG-44细胞培养72 h时的细胞增殖率明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞克隆形成数明显降低,细胞迁移数明显降低,差异均有统计学意义(P9 siRNA+miR-491-5p抑制物+姜黄素组与H19 siRNA+阴性对照抑制物+姜黄素组相比、miR-491-5p模拟物+HOXa9过表达质粒+姜黄素组与miR-491-5p模拟物+空白质粒+姜黄素组相比,前者U251MG、SHG-44细胞培养72 h时的细胞增殖率明显升高,细胞凋亡率明显降低,细胞克隆形成数明显升高,细胞迁移数明显升高,差异均有统计学意义(P91-5p模拟物+野生型H19组与阴性对照模拟物+野生型H19组相比、miR-491-5p模拟物+野生型HOXa93'-UTR组与阴性对照模拟物+野生型HOXa93'-UTR组相比,前者细胞荧光素酶活性明显降低,差异均有统计学意义(P9、HOXA

关键词：姜黄素神经胶质瘤长链非编码RNA H19 miR-491-5p 同源盒基因a9 细胞特性

circ-SFMBT2调节miR-491-5p/HOXa9轴对急性髓系白血病细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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中国实验血液学杂志 2023年第6期31卷 1599-1607页

作者：李妍史利欢谢昕范朋凯河南省儿童医院郑州儿童医院河南省小儿血液医学重点实验室河南郑州450018

目的:探讨circ-SFMBT2对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:收集2015年4月至2017年4月在河南省儿童医院确诊的35例儿童AML患者和35名健康对照者的骨髓样本以及人骨髓基质细胞系(HS-5)和AML细胞系(HL-60、T... 详细信息

目的:探讨circ-SFMBT2对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:收集2015年4月至2017年4月在河南省儿童医院确诊的35例儿童AML患者和35名健康对照者的骨髓样本以及人骨髓基质细胞系(HS-5)和AML细胞系(HL-60、THP-1、U-937和Kasumi-1),RT-q PCR和Western blot检测骨髓样本和细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p、同源盒基因a9(HOXa9)的表达,采用Pearson法分析AML患儿骨髓样本中circ-SFMBT2、miR-491-5p和HOXa9 mRNA表达水平的相关性。体外培养HL-60细胞并分为对照、si-NC、sicirc-SFMBT2、si-circ-SFMBT2+anti-NC和si-circ-SFMBT2+anti-miR-491-5p共5组,用Lipofectamine^(TM)3000将si-NC、si-circ-SFMBT2、anti-NC、miR-491-5p inhibitor转染至HL-60细胞;采用RT-q PCR和Western blot检测各组细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p、HOXa9的表达水平;CCK-8法分别在转染24、48和72 h检测各组HL-60细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞的迁移、侵袭能力;通过双荧光素酶报告基因、RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀实验验证AML细胞中circ-SFMBT2、miR-491-5p和HOXa9的调控作用。结果:AML患儿骨髓样本和细胞系(HL-60、THP-1、U-937和Kasumi-1)中circ-SFMBT2、HOXa9 mRNA表达水平升高(P91-5p表达水平明显降低(P91-5p的表达水平呈负相关(r=-0.905),miR-491-5p与HOXa9 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.930),HOXa9mRNA与circ-SFMBT2的表达水平呈正相关(r=0.911),且circ-SFMBT2高表达的AML患儿的总生存率较低表达患儿显著降低(P91-5p表达,降低HOXa9表达,抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡(P91-5p表达可显著减弱circ-SFMBT2沉默对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P基因、RNA pull-down和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实circ-SFMBT2可以靶向miR-491-5p并在AML中负调控miR-491-5p的表达,HOXa9是miR-491-5p的靶标。结论:circ-SFMBT2的沉默可能通过调节miR-491-5p/HOXa9轴来抑制AML细胞的增殖、迁移与侵袭。

关键词：急性髓系白血病 circ-SFMBT2 miR-491-5p 同源盒基因a9 增殖侵袭迁移

DNA甲基化分析在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用研究

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DNA甲基化分析在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用研究

作者：梁超楠中国医科大学

学位级别：硕士

目的:恶性胸腔积液的发病率在全球范围内不断增加,但目前用于鉴别良恶性胸腔积液的特异性生物标记物仍未确定。本研究旨在通过前瞻性地分析一组新的肿瘤特异性基因在胸腔积液中的甲基化状态,探讨甲基化组合(SHOX2、RASSF1A和HOXa9)在良... 详细信息

目的:恶性胸腔积液的发病率在全球范围内不断增加,但目前用于鉴别良恶性胸腔积液的特异性生物标记物仍未确定。本研究旨在通过前瞻性地分析一组新的肿瘤特异性基因在胸腔积液中的甲基化状态,探讨甲基化组合(SHOX2、RASSF1A和HOXa9)在良恶性胸腔积液鉴别诊断中的临床应用价值。方法:留取2019年10月-2020年7月就诊于中国医科大学附属第一医院和沈阳市胸科医院的患者的胸腔积液标本200例,4℃离心后留取胸水沉渣进行基于RT-PCR的体外诊断试验,并对3个基因(SHOX2、RASSF1A和HOXa9)在胸腔积液中的甲基化状态进行了定性分析。最终从152名通过细胞学和/或组织学检查和临床演变确诊的患者中收集到152个连续的胸腔积液样本。结果:152个胸腔积液样本中,恶性101(66.5%)例,男46(45.5%)例,女55(54.5%)例,年龄25-79(60.6±13.3)岁;良性51(33.5%)例,男37(72.5%)例,女14(27.5%)例,年龄24-80(58.1±13.0)岁。101例引起恶性胸腔积液的原发病中,其中68例为肺癌(54例肺腺癌,6例肺鳞癌,4例小细胞肺癌和4例未分类肺癌),另外33例为肺外转移癌(5例胸膜间皮瘤、14例乳腺癌,6例妇科肿瘤,4例消化道肿瘤,2例血液病和2例其他类型的肿瘤);在51例引起良性胸腔积液的疾病中,22例为结核性胸膜炎,19例为肺炎旁胸腔积液,10例为其他疾病引起。3个基因在恶性胸腔积液中的阳性检出率分别为43.6%(RASSF1A)、56.4%(SHOX2)和63.4%(HOXa9),特异性分别为100%(RASSF1A)、96.1%(SHOX2)和98.0%(HOXa9)。SHOX2和RASSF1A组合检测取得双基因组合里的最佳诊断效能,敏感性74.3%,特异性为96.1%,阳性预测值为97.4%,阴性预测值为65.3%。3个基因联合检测(任一基因甲基化阳性)的敏感性为80.2%(81/101),特异性为94.1%(3/51),阳性预测值和阴性预测值分别为96.4%和70.6%。结论:对SHOX2、RASSF1A和HOXa9在胸腔积液中的DNA甲基化状态定性分析可作为快速无创鉴别良恶性胸腔积液的诊断方法。SHOX2和RASSF1A基因甲基化的联合检测被认为是筛选和监测恶性胸腔积液的优良方法,具有较高的敏感性和特异性,而HOXa9则是一个很好的补充。三项联合检测可显著提高诊断的敏感性和特异性。

关键词： DNA甲基化矮小同源盒基因2 Ras相关区域家族蛋白1A 同源盒基因a9 胸腔积液鉴别诊断