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砷剂对吉非替尼耐药非小细胞肺癌裸鼠皮下肿瘤的作用

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畜牧与兽医 2022年第10期54卷 65-73页

作者：沈艳毛建华王华枫阮铮李祥瑞南京农业大学动物医学院江苏南京210095 上海交通大学医学院附属瑞金医院实验医学研究中心上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院/上海血液学研究所/医学基因组学国家重点实验室上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科上海200025

旨在研究三氧化二砷对吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株NCI-H1975建立的裸鼠皮下肿瘤模型的作用效果。将NCI-H1975细胞(8×106个/只)注射于裸鼠右腋下,待肿瘤长到100 mm3时,随机将小鼠分为3组,对照组(生理盐水200μL,腹腔注射),... 详细信息

旨在研究三氧化二砷对吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株NCI-H1975建立的裸鼠皮下肿瘤模型的作用效果。将NCI-H1975细胞(8×106个/只)注射于裸鼠右腋下,待肿瘤长到100 mm3时,随机将小鼠分为3组,对照组(生理盐水200μL,腹腔注射),砷剂组(三氧化二砷5 mg/kg,腹腔注射)以及吉非替尼组(吉非替尼125 mg/kg,灌胃)。裸鼠接种肿瘤细胞待肉眼可见的肿瘤出现后,每天测量肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积。药物作用18 d时,对小鼠进行整体拍照后进行安乐死,分离肿瘤、肺、脾等脏器,分别进行病理和电镜检测。结果显示:与对照组和吉非替尼组相比,砷剂组小鼠的肿瘤体积、重量及脾脏指数显著(P吉非替尼组相比,砷剂组肿瘤内出现明显坏死灶;电镜结果显示,砷剂组肿瘤内部能观察到自噬体;肺部病理结果显示,与对照组和吉非替尼组相比,砷剂组的肺泡壁较薄,仅见少许淋巴细胞浸润。研究表明,在裸鼠体内,砷剂能够抑制吉非替尼耐药NSCLC皮下移植瘤生长,诱导肿瘤发生自噬和坏死,保护肺部结构的完整性。

关键词：非小细胞肺癌三氧化二砷吉非替尼耐药裸鼠皮下移植瘤

培美曲塞或多西他赛联合卡铂治疗吉非替尼耐药的晚期肺腺癌患者的疗效

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郑州大学学报（医学版） 2020年第2期55卷 192-195页

作者：亓妍文 LALLOO MBIBRAHIM 王丽萍郑州大学第一附属医院肿瘤中心郑州450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心郑州450052

目的:观察培美曲塞或多西他赛联合卡铂治疗吉非替尼耐药的晚期肺腺癌患者的疗效和安全性。方法:56例吉非替尼耐药的晚期(Ⅲ~Ⅳ期)肺腺癌患者中,28例采用培美曲塞联合卡铂化疗(培美曲塞组),28例采用多西他赛联合卡铂化疗(多西他赛组),21 ... 详细信息

目的:观察培美曲塞或多西他赛联合卡铂治疗吉非替尼耐药的晚期肺腺癌患者的疗效和安全性。方法:56例吉非替尼耐药的晚期(Ⅲ~Ⅳ期)肺腺癌患者中,28例采用培美曲塞联合卡铂化疗(培美曲塞组),28例采用多西他赛联合卡铂化疗(多西他赛组),21 d为1个化疗周期,2个化疗周期后评估疗效及不良反应,并进行长期随访。结果:2组近期疗效相比,差异无统计学意义(P=0.159);2组的治疗有效率、疾病控制率、无进展生存期及总生存时间相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。培美曲塞组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少、中性粒细胞减少、血小板减少、恶心呕吐的发生率均较多西他赛组下降(P吉非替尼耐药的晚期肺腺癌患者疗效相当,但培美曲塞联合卡铂方案的不良反应更轻,更值得临床推广。

关键词：晚期肺腺癌培美曲塞多西他赛吉非替尼耐药

SIRT3在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用及机制研究

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SIRT3在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用及机制研究

作者：訾亚婉重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:吉非替尼是治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的一线分子靶向药物,在表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGFR）突变型的NSCLC患者的治疗中显现出显著疗效,但是吉非替尼耐药几乎不可避免,目前NSCLC吉... 详细信息

目的:吉非替尼是治疗非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者的一线分子靶向药物,在表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGFR）突变型的NSCLC患者的治疗中显现出显著疗效,但是吉非替尼耐药几乎不可避免,目前NSCLC吉非替尼耐药机制尚未完全阐明。铁死亡（Ferroptosis）是一种新型的细胞程序性死亡方式,与细胞内游离铁的积累、脂质过氧化物蓄积以及活性氧（reactive oxygen species,ROS）的增加密切相关。最近有研究表示,促进肿瘤细胞铁死亡可有效提高癌症治疗效果甚至逆转耐药性。沉默蛋白3（sirtuin 3,SIRT3）是编码III类组蛋白脱乙酰酶sirtuin家族的一个成员,是一类线粒体去乙酰化酶,是通过调节抗氧化酶和氧化酶系统来维持细胞内ROS稳态。研究表明,SIRT3在铁死亡的发生发展中起到了重要的作用。更是有研究表明,SIRT3在肿瘤耐药中起着重要作用,可显著增加肿瘤细胞对化疗药物敏感性。靶向NRF2/HO-1轴被认为是调节细胞炎症和氧化应激水平的关键途径。并且NRF2/HO-1可通过调控GPX4蛋白表达、细胞内游离铁含量、线粒体功能和ROS水平,参与铁死亡的发生发展。然而,目前尚不清楚共同主要位于线粒体的SIRT3和NRF2/HO-1是否共同参与调控铁死亡,同时不明确其在NSCLC吉非替尼耐药发生中的具体机制。因此,拟进一步设计实验进行详细验证。更清晰确切的了解NSCLC耐药的机制,对于未来针对性推进逆转耐药性的治疗策略具有里程碑的意义。方法:1.我们通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析SIRT3在肺癌中的表达,Kaplan-Meier生存分析数据库分析SIRT3在接受放化疗和靶向治疗的肺癌患者的无进展生存期（PSF）,以此判断其在肺癌患者中的预后价值。通过String数据库分析SIRT3、NRF2、HO-1之间的蛋白互作关系。2.体外培养人肺腺癌细胞（PC-9）和吉非替尼耐药肺腺癌细胞（PC-9/GR）,分别用（1,5,10,50,100）μm/L吉非替尼处理48h后,使用蛋白印迹法（Western Blot,WB）检测SIRT3、NRF2、HO-1蛋白的表达;使用CCK-8法验证PC-9/GR细胞吉非替尼耐药性;细胞免疫荧光实验检测PC-9及PC-9/GR细胞内SIRT3的定位及表达;DHE探针检测了PC-9及PC-9/GR细胞内ROS水平。3.我们验证了吉非替尼导致NSCLC细胞发生铁死亡。使用WB实验检测了铁死亡相关蛋白（GPX4、x CT、TFR）;使用DHE探针检测ROS水平;使用Ferro Orange探针检测细胞内Fe2+水平;使用C11BODIPY 581/591探针检测脂质过氧化物水平。4.我们使用SIRT3过表达质粒构建了过表达SIRT3的PC-9细胞（OV-SIRT3 PC-9）、使用小干扰RNA（si-RNA）构建了敲低SIRT3的PC-9/GR细胞（si-SIRT3 PC-9/GR）,WB检测了SIRT3、NRF2、HO-1蛋白的表达水平;使用DHE探针检测细胞内ROS水平变化;使用JC-1探针检测细胞的线粒体膜电位（MMP）;使用CCK-8检测吉非替尼对OV-SIRT3 PC-9和si-SIRT3 PC-9/GR细胞的半抑制浓度（IC50）。之后我们用5μM/L吉非替尼处理OV-SIRT3 PC-9、si-SIRT3PC-9/GR 24h后,使用WB检测了铁死亡相关蛋白（GPX4、x CT、TFR）的表达;使用DHE探针检测ROS水平;使用Ferro Orange探针检测了细胞内游离Fe2+水平;使用C11 BODIPY 581/591探针检测脂质过氧化物水平。5.使用WB检测PC-9、PC-9/GR细胞中的NRF2、HO-1蛋白变化。使用过表达NRF2质粒构建过表达NRF2的PC-9细胞（OV-NRF2 PC-9）,使用小干扰RNA构建敲低NRF2的PC-9/GR细胞（si-NRF2 PC-9/GR）,WB检测SIRT3、NRF2、HO-1蛋白水平;使用DHE探针检测ROS水平;使用CCK-8检测了吉非替尼对OV-NRF2PC-9和si-NRF2 PC-9/GR细胞的IC50;使用DHE探针检测细胞内ROS水平变化;使用Ferro Orange探针检测细胞的游离亚铁离子;使用C11 BODIPY 581/591探针检测细胞的脂质过氧化物水平。之后我们用5μM/L吉非替尼处理OV-NRF2 PC-9、si-NRF2 PC-9/GR细胞24h后,使用WB检测了铁死亡相关蛋白（GPX4、x CT、TFR）的表达。结果:1.检索TNM plot、Kaplan-Meier数据库发现,S

关键词：非小细胞肺癌吉非替尼耐药铁死亡 SIRT3 NRF2/HO-1

IGFBP2对肺腺癌吉非替尼耐药的影响及机制研究

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IGFBP2对肺腺癌吉非替尼耐药的影响及机制研究

作者：朱捷博中南大学

学位级别：硕士

研究背景:非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的85%左右,是全球癌症死亡的主要原因,其中肺腺癌(LUAD)是主要的组织类型。存在靶点突变的肺腺癌患者是目前能从靶向药中获益的唯一肺癌亚群,靶向药对于存在靶点突变的无法手术肺腺癌患者已经成... 详细信息

研究背景:非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的85%左右,是全球癌症死亡的主要原因,其中肺腺癌(LUAD)是主要的组织类型。存在靶点突变的肺腺癌患者是目前能从靶向药中获益的唯一肺癌亚群,靶向药对于存在靶点突变的无法手术肺腺癌患者已经成为一线治疗手段,进一步的研究还支持靶向药作为完全手术切除(Ⅰb期及以上)患者术后辅助治疗的手段。吉非替尼是最早上市一代口服酪氨酸激酶抑制剂,主要针对EGFR突变阳性(19号外显子缺失突变、21号外显子L858R点突变)的LUAD患者。尽管随着第三代靶向药上市使用,吉非替尼的受众在减少,但是其不断下降的价格使其仍有广泛的受众,在靶向药治疗领域的地位短期内还是无可替代。在临床使用中发现,吉非替尼治疗过程中的获得性耐药问题几乎不可避免,成为影响其疗效的瓶颈。尽管第三代靶向药能改善T790M突变导致的耐药,但是还有很多其它原因造成的耐药仍无法解决。已有的研究发现,胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)是一种分泌性蛋白,它可以阻止胰岛素样生长因子-I/-II与其受体结合,并且可参与肿瘤微环境的调节,IGFBP2的表达水平在肺肿瘤和血液中高度表达,与肺癌患者的不良预后和转移相关,它与吉非替尼耐药的关系也已经被多个研究证实。本研究拟通过探究IGFBP2与LUAD吉非替尼耐药的关系并初步探索IGFBP2引起LUAD获得性耐药的机制,为LUAD耐药患者的临床治疗提供新的理论基础。研究目的:(1)探究IGFBP2的表达水平对LUAD细胞增殖及转移的影响;(2)探究IGFBP2与LUAD吉非替尼耐药的关系及其相关机制;(3)为晚期LUAD临床靶向治疗提供新的理论依据。研究方法:(1)构建吉非替尼耐药的LUAD细胞并检测其IGFBP2蛋白及m RNA的表达,探究IGFBP2与LUAD吉非替尼耐药的关系;(2)转染构建IGFBP2过表达和敲降的LUAD细胞株,通过CCK-8、细胞划痕、平板克隆形成、Transwell实验检测其对LUAD细胞的增殖、转移及吉非替尼耐药性的影响;(3)建立小鼠异种移植模型,在体内验证IGFBP2的表达水平不同对肺转移的影响;(4)通过二代测序技术分析IGFBP2对吉非替尼处理下LUAD细胞基因表达谱和相关信号途径的影响;研究结果:(1)通过长期药物处理肺腺癌细胞,成功诱导得到了对吉非替尼耐药的肺腺癌细胞,检测各细胞中IGFBP2的表达发现耐药细胞中的IGFBP2蛋白及m RNA的表达对比亲代细胞均上调,且差异具有统计学意义;(2)成功构建IGFBP2过表达及敲降细胞株,通过CCK-8及克隆形成实验发现IGFBP2敲降可加剧吉非替尼对LUAD细胞增殖能力和集落形成能力的抑制,过表达则相反;通过细胞功能实验,我们发现IGFBP2可促进LUAD细胞的侵袭、迁徙和增殖能力;(3)在裸鼠肺转移瘤模型中,吉非替尼对肺转移产生数量的抑制受到了IGFBP2过表达的逆转,而IGFBP2的敲降则会增多肺转移;(4)通过二代测序技术,明确了IGFBP2敲降后诱导的LUAD细胞差异基因表达,并分析了差异基因所富集的信号通路。经验证,在LUAD细胞中,IGFBP2敲降均能降低CXCL1的表达,而IGFBP2过表达则相反。研究结论:IGFBP2可增强LUAD对吉非替尼的耐药性,其机制可能是调控CXCL1的表达实现的。图8幅,表7个,参考文献53篇

关键词： LUAD 吉非替尼耐药 IGFBP2

cGAS在调控肺腺癌细胞吉非替尼耐药中的作用

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cGAS在调控肺腺癌细胞吉非替尼耐药中的作用

作者：李久康重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:吉非替尼是能够显著改善非小细胞肺癌（NSCLC）患者预后的分子靶向药,虽然对于治疗EGFR突变的非小细胞肺癌具有显著的疗效,但最终大多数患者会发生耐药,从而限制其临床应用,目前吉非替尼耐药机制尚未完全阐明。环鸟苷酸-腺苷酸合... 详细信息

目的:吉非替尼是能够显著改善非小细胞肺癌（NSCLC）患者预后的分子靶向药,虽然对于治疗EGFR突变的非小细胞肺癌具有显著的疗效,但最终大多数患者会发生耐药,从而限制其临床应用,目前吉非替尼耐药机制尚未完全阐明。环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cyclic GMP-AMP synthase,cGAS）是一种核酸转移酶,通过抑制PARP1-Timeless复合物的形成抑制DNA同源重组,降低基因组稳定性,促进肿瘤的形成。目前尚不清楚cGAS是否参与调控NSCLC细胞吉非替尼耐药,拟进一步设计实验进行论证。方法:体外培养吉非替尼敏感的肺腺癌细胞株（PC-9）和吉非替尼耐药的肺腺癌细胞株（PC-9 GR）,使用蛋白免疫印迹法（WB）检测cGAS蛋白在不同细胞株中的表达情况。根据cGAS在PC-9和PC-9GR细胞中的差异表达情况,使用携带过表达cGAS基因的质粒（OV-cGAS）转染PC-9细胞,构建高表达cGAS的PC-9细胞（PC-9 OV-cGAS）和小干扰RNA（siRNA-cGAS）转染PC-9 GR细胞,构建低表达cGAS的PC-9 GR细胞（PC-9GR siRNA-cGAS）。使用CCK-8检测吉非替尼对肺癌细胞半抑制浓度（IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Trans-well细胞体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力;细胞平板克隆形成实验,检测细胞增殖能力;WB检测不同细胞株中cGAS、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、Ki-67以及GAPDH的蛋白表达情况。结果:（1）与PC-9细胞相比,PC-9 GR细胞中cGAS蛋白表达量明显较高,而PARP1蛋白表达下降。（2）吉非替尼对PC-9 OV-cGAS细胞的IC50明显高于PC-9细胞;吉非替尼对PC-9 GR细胞的IC50明显高于PC-9GR siRNA-cGAS细胞。（3）吉非替尼诱导PC-9细胞凋亡明显高于PC-9 OV-cGAS细胞;吉非替尼诱导PC-9 GR细胞凋亡明显低于PC-9GR siRNA-cGAS细胞。（4）细胞划痕后,观察0h,6h,12h,24h,细胞迁移情况,发现PC-9 OV-cGAS细胞迁移能力明显强于PC-9细胞;而PC-9GR siRNA-cGAS细胞迁移能力明显弱于PC-9GR。（5）PC-9OV-cGAS细胞侵袭能力明显强于PC-9细胞;PC-9GR siRNA-cGAS细胞侵袭能力明显弱于PC-9GR。（6）PC-9 OV-cGAS细胞克隆增殖能力明显强于PC-9细胞;PC-9GR siRNA-cGAS细胞克隆增殖能力明显弱于PC-9GR。（7）将PC-9细胞中cGAS过表达,可显著抑制PARP1的表达;而将PC-9GR中cGAS沉默,可上调PARP1表达。（8）WB结果显示,与PC-9细胞相比,PC-9 OV-cGAS细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平以及Bcl-2/BAX比率明显升高。结论:cGAS通过上调吉非替尼敏感的肺腺癌细胞（PC-9）的增殖、迁移、侵袭能力和抑制细胞凋亡,钝化PC-9对吉非替尼的敏感性。cGAS下调通过抑制吉非替尼耐药的肺腺癌细胞（PC-9 GR）增殖、迁移和侵袭和促进细胞凋亡,改善PC-9GR对吉非替尼的耐药性。cGAS参与调控肺腺癌细胞对吉非替尼的耐药过程。

关键词：非小细胞肺癌吉非替尼耐药 cGAS PARP1

葫芦素B抑制吉非替尼耐药非小细胞肺癌的作用

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葫芦素B抑制吉非替尼耐药非小细胞肺癌的作用

作者：曾超朋南方医科大学

学位级别：硕士

背景与目的吉非替尼耐药问题已经成为限制晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗疗效进一步提高的瓶颈,研究克服吉非替尼耐药的治疗方法对于进一步提高肺癌的临床治疗水平,具有重要的意义与价值。本研究通过观察葫芦素B对吉非替尼耐药NSCLC细胞PC... 详细信息

背景与目的吉非替尼耐药问题已经成为限制晚期非小细胞肺癌(NSCLC)治疗疗效进一步提高的瓶颈,研究克服吉非替尼耐药的治疗方法对于进一步提高肺癌的临床治疗水平,具有重要的意义与价值。本研究通过观察葫芦素B对吉非替尼耐药NSCLC细胞PC-9/GR细胞增殖、细胞周期及EGFR、Jak2/STAT3信号转导分子活化的影响,旨在证明葫芦素B对吉非替尼耐药非小细胞肺癌的治疗作用及机制,为吉非替尼耐药NSCLC的治疗提供新的方法和理论依据。材料与方法应用不同浓度葫芦素B作用人吉非替尼耐药非小细胞肺癌PC-9/GR细胞不同时间,分别使用CCK-8法和PI单染法测定细胞增殖抑制和细胞周期分布变化,Western blot法测定PC-9/GR细胞EGFR、Jak2/STAT3信号转导分子表达。结果1、葫芦素B处理能够显著抑制PC-9/GR细胞增殖和G2/M期细胞周期阻滞,且随着药物浓度的增加,葫芦素B对PC-9/GR细胞增殖抑制和细胞周期阻滞活性也相应逐渐增高,各组间差异显著,P<0.05;在100 nmol/L浓度以上葫芦素B作用时,随着作用时间的延长,葫芦素B对PC-9/GR细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞活性明显增强,差异具有显著意义,P<0.05;1000nmol/L葫芦素B作用48h对PC-9/GR细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞活性最为明显,分别为(65.56±3.98)%和(57.34±3.92)%。2、PC-9/GR 细胞经不同浓度葫芦素 B(10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)处理后,葫芦素B呈浓度依赖性抑制p-Jak2、p-STAT3表达,而对p-EGFR激活及总EGFR、Jak2、STAT3表达无明显影响。结论葫芦素B体外呈浓度、时间依赖性抑制PC-9/GR细胞增殖和细胞周期G2/M期阻滞。葫芦素B杀伤PC-9/GR细胞的机制与EGFR活化突变非依赖性的Jak2/STAT3信号转导通路受抑制密切相关。

关键词：葫芦素B 吉非替尼耐药非小细胞肺癌

二甲双胍通过干预上皮—间质转化逆转尼古丁诱导的肺癌吉非替尼耐药

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二甲双胍通过干预上皮—间质转化逆转尼古丁诱导的肺癌吉非替尼耐...

作者：胡菁重庆医科大学

学位级别：硕士

目的本研究探讨尼古丁(nicotine,NIC)诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用。方法PC-9分成不同组,空白组,尼古丁组,二甲双胍组,二甲双胍和尼古丁组,SB431542组,SB431542和尼古丁组。利用实时荧光定量PCR检测E-... 详细信息

目的本研究探讨尼古丁(nicotine,NIC)诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用。方法PC-9分成不同组,空白组,尼古丁组,二甲双胍组,二甲双胍和尼古丁组,SB431542组,SB431542和尼古丁组。利用实时荧光定量PCR检测E-cadherin和Vimentin RNA表达,Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达,p-Smad2,Smad2蛋白。CCK-8检测不同分组细胞对吉非替尼药物敏感情况。Transwell小室实验检测细胞侵袭迁移。结果尼古丁诱导PC-9细胞上皮间质转化呈时间浓度依赖,在10μmol/L尼古丁处理72h后,发生E-cadherin的下调和Vimentin的上调最明显,故选该条件做以下实验。CCK-8提示,相比空白组,尼古丁组PC-9细胞对吉非替尼敏感性减弱,在吉非替尼浓度为0.05μmol/L最明显(P=0.000)。Matrigel侵袭实验提示尼古丁组穿膜细胞数较空白组明显增多[(15.7±1.53)个/高倍视野vs.(32.7±2.08)个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000];迁移实验的结果与之相似。与空白组相比,尼古丁组E-cadherin mRNA表达水平明显降低[(0.932±0.100)vs.(0.459±0.024),F=25.924,P=0.000,P=0.000)],Vimentin mRNA表达水平明显升高[(1.200±0.200)vs.(1.973±0.129),F=20.998,P=0.000,P=0.000]。蛋白水平变化与之相同。二甲双胍+尼古丁组相比于尼古丁组,p-Smad2蛋白表达降低,SB431542组+尼古丁组改变同上。二甲双胍+尼古丁组可以增加尼古丁作用PC-9对吉非替尼的敏感性,在吉非替尼浓度为0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,5μmol/L时有统计学意义,SB431542+尼古丁组同上。二甲双胍+尼古丁组可以减弱尼古丁组的穿膜数[(17.0±2.00)个/高倍视野vs.32.7±2.08)个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000],迁移实验呈现相同的结果,SB431542+尼古丁组相比尼古丁组细胞穿模数减少(P吉非替尼耐药,二甲双胍和SB431542可以逆转上述现象。

关键词：尼古丁吉非替尼耐药上皮间质转化二甲双胍

肝X受体激动剂GW3965对与EMT相关的非小细胞肺癌获得性吉非替尼耐...

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作者：胡勇南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨上皮间质转化与获得性吉非替尼耐药的关系及相关标志物在获得性耐药前后的变化,并研究肝X受体的人工合成激动剂GW3965对获得性吉非替尼耐药的逆转与EMT过程相关性及具体分子机制,旨在为今后肝X受体及吉非替尼耐药研究提供新的... 详细信息

目的:探讨上皮间质转化与获得性吉非替尼耐药的关系及相关标志物在获得性耐药前后的变化,并研究肝X受体的人工合成激动剂GW3965对获得性吉非替尼耐药的逆转与EMT过程相关性及具体分子机制,旨在为今后肝X受体及吉非替尼耐药研究提供新的思路。方法:取处于对数生长期的细胞,观察细胞形态并经倒置显微镜图像采集系统进行细胞拍照采集图像信息;Transwell实验检测不同细胞株侵袭能力差异,并用倒置显微镜采集图像并统计;调阅耐药株HCC827/GR-8-1与亲本HCC827细胞差异基因表达芯片数据EMT相关标志物编码基因表达差异;RT-PCR检测不同敏感性细胞株间VIM表达量差异;Western blot及免疫组化检测差异波形蛋白表达量差异;CCK-8实验检测LXR激动剂的单独应用对细胞毒力作用,及两药联合应用对吉非替尼敏感性的影响;克隆形成实验检测GW3965单独或联合应用吉非替尼对增殖的影响;Western blot进一步验证两药联用对细胞凋亡蛋白表达量的影响;Western blot检测两药联合过程对EMT相关标志物尤其是波形蛋白表达量的影响并分析两药联用后细胞增殖及蛋白表达量变化及其与细胞耐药性关系。结果:细胞形态观察显示耐药的细胞间质特征更明显。侵袭实验显示HCC827及H358侵袭能力弱,而H1299、H1975侵袭能力强,获得性耐药株侵袭能力也上升。对吉非替尼不敏感的细胞株VIM表达量高,Western blot及免疫组化同样显示H1975、H1299级获得性耐药株波形蛋白表达量显著增高。EMT及相关主要标志物波形蛋白与吉非替尼耐药性正相关。LXR激动剂单独或联合吉非替尼处理获得性耐药株HCC827/GR-8-1细胞后,CCK-8结果显示GW3965对细胞无明显毒力作用。但在多株耐药株中可显著增高细胞对吉非替尼敏感性,克隆形成实验同样显示,GW3965联合吉非替尼组细胞克隆形成率显著低于单用吉非替尼组。凋亡蛋白检测显示两药联用可增加凋亡蛋白如caspase-3等的表达,降低bcl-2蛋白的表达。检测两药联用中EMT相关标识物如波形蛋白的检测发现,应用吉非替尼后,胞内波形蛋白表达量异常增高,联用GW3965后,胞内异常增高的波形蛋白表达被遏制。结论:EMT与吉非替尼耐药正相关,细胞在获得吉非替尼耐药的同时也获得了EMT特征,以波形蛋白为代表的EMT标志物表达异常;LXR激动剂GW3965可逆转获得性吉非替尼耐药,并且这一过程与抑制EMT标志物如波形蛋白的表达有关。

关键词： EMT GW3965 NSCLC 吉非替尼耐药波形蛋白

miR-501靶向BLID介导吉非替尼耐药性非小细胞肺癌的恶性表型

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中国医药导报 2020年第12期17卷 18-22,27页

作者：葛凌陈何健徐航娣温州医科大学附属诸暨医院药剂科浙江诸暨311800 温州医科大学附属诸暨医院呼吸内科浙江诸暨311800 浙江大学医学院附属邵逸夫医院浙江杭州310058

目的探究miR-501在吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用和机制。方法采用实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测吉非替尼耐药性NSCLC血清和细胞系PC9/GR中miR-501的表达水平,通过CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测miR-501对PC9/G... 详细信息

目的探究miR-501在吉非替尼耐药非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用和机制。方法采用实时定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测吉非替尼耐药性NSCLC血清和细胞系PC9/GR中miR-501的表达水平,通过CCK-8、划痕实验和Transwell实验检测miR-501对PC9/GR的恶性表型的影响;利用在线数据库预测miR-501的潜在靶点,并验证其在PC9/GR的具体作用。结果与健康对照人群和正常人肺上皮细胞系比较,miR-501在吉非替尼耐药性NSCLC患者血清和PC9/GR中表达水平升高,差异有高度统计学意义(P 吉非替尼耐药性NSCLC的增殖、迁移和侵袭能力。因此,miR-501是吉非替尼耐药性NSCLC的潜在靶点。

关键词：非小细胞肺癌 miR-501 吉非替尼耐药 BLID