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双抗体夹心elisa法检测弓形虫循环抗原的方法建立

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双抗体夹心ELISA法检测弓形虫循环抗原的方法建立

作者：王海礁吉林大学

学位级别：硕士

弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,可以感染多种哺乳动物。人类感染主要通过未煮熟的或生的含有速殖子或缓殖子的肉(如猪肉,羊肉),或者通过食物、水,以及未洗的由猫排泄的包囊污染的蔬菜。怀孕前妇女感染弓形虫通常不会遗传给胎儿;然而... 详细信息

弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,可以感染多种哺乳动物。人类感染主要通过未煮熟的或生的含有速殖子或缓殖子的肉(如猪肉,羊肉),或者通过食物、水,以及未洗的由猫排泄的包囊污染的蔬菜。怀孕前妇女感染弓形虫通常不会遗传给胎儿;然而,如果感染发生在怀孕期间,病原体可传播给胎儿。在胎儿和新生儿中弓形虫病以各种不同形式出现,例如脑积水,脉络膜视网膜炎,颅内钙化,肝脾肿大,血小板减少,头小畸形,抽搐,发热等。然而,大多数新生儿的感染在出生时是没有症状的。先天性弓形虫感染的风险在早期妊娠要比晚期妊娠低,但先天感染的严重性更高,在怀孕期间获得的感染对胎儿会产生严重的后果。因此,弓形虫病是一个主要的公共健康问题。 MIC10属于微线体蛋白家族并且由弓形虫速殖子微线体细胞器分泌。成熟的MIC10,其作用未知,是一18KDa蛋白,在速殖子要比缓殖子优先表达并且由虫体优先释放。与其他微线体蛋白不同,MIC10缺乏跨膜域,可以绑定宿主细胞受体,因此MIC10能够从组织中的感染部位扩散并且很容易成为循环抗原。本研究经过体外培养弓形虫得到弓形虫虫体后,提取弓形虫DNA。将弓形虫DNA作为模板,进行PCR扩增,得到MIC10A,MIC10B和MIC10C三段序列。经过克隆、表达、纯化,得到重组蛋白MIC10A-His、MIC10B-His和MIC10C-His。利用重组蛋白MIC10A-His和MIC10B-His免疫新西兰大耳兔,制备多克隆抗体。通过常规的纯化方法,即亲和层析法纯化抗血清,得到多克隆抗体。将兔抗MIC10A作为包被抗体,生物素标记的兔抗MIC10B作为检测抗体,建立双抗体夹心elisa法检测弓形虫循环抗原MIC10C,初步得到了具有一定特异性和敏感性的检测方法。

关键词：弓形虫 MIC10抗原双抗体夹心elisa法

双抗体夹心elisa法检测肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

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生物制品年刊 1999年 69-72页

作者：孙小慧杨世龙等兰州生物制品研究所疫苗二室，兰州730046

用双抗体夹心elisa法检测肾综合征出血热（HFRS）汉滩病毒LR1株糖膜蛋白（GP），并用SDS－PAGE电泳对elisa检测结果进行验证，实验结果显示，双抗体夹心elisa法特异性强，重复性好，简便易行，是HFRS汉滩病毒糖膜蛋白较为理想的检测方... 详细信息

用双抗体夹心elisa法检测肾综合征出血热（HFRS）汉滩病毒LR1株糖膜蛋白（GP），并用SDS－PAGE电泳对elisa检测结果进行验证，实验结果显示，双抗体夹心elisa法特异性强，重复性好，简便易行，是HFRS汉滩病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法，对HFRS疫苗的生产和质量控制有重要意义。

关键词：双抗体夹心elisa法肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

双抗体夹心elisa法检测肾综合征出血热汉滩病毒糖膜蛋白

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微生物学免疫学进展 2001年第2期29卷 50-52页

作者：孙小慧杨世龙马燕华叶琛王维新兰州生物制品研究所兰州730046

用双抗体夹心elisa法检测肾综合征出血热 (HFRS)汉滩病毒LR1株糖膜蛋白 (GP) ,并用SDS PAGE电泳对elisa检测结果进行验证 ,实验结果显示 ,双抗体夹心elisa法特异性强 ,重复性好 ,简便易行 ,是HTN病毒糖膜蛋白较为理想的检测方法。

关键词：双抗体夹心elisa法汉滩病毒糖膜蛋白肾综合征出血热

双抗体夹心elisa法检测海产蟹血卵涡鞭虫方法的初步建立

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浙江海洋学院学报（自然科学版） 2011年第1期30卷 46-50页

作者：査智辉施慧谢建军许文军孙忠浙江海洋学院海洋与渔业研究所浙江省海洋水产研究所浙江省海水增养殖重点实验室浙江舟山316100

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心elisa方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL... 详细信息

以针对血卵涡鞭虫的特异性单克隆抗体为捕获抗体,纯化的抗血卵涡鞭虫的兔抗血清为检测抗体,初步建立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心elisa方法。方阵滴定确定最佳反应条件:包被的单克隆抗体浓度为10μg/mL,多抗兔血清工作浓度为14.3μg/mL,待检样品稀释度为1:800;HRP-羊抗鼠IgG按1∶20 000稀释。用建立的elisa方法对86份已知背景样品进行检测,阳性检出为97.6%,血卵涡鞭虫抗原检测的灵敏度为100 pg/mL;与蟹血淋巴细胞、假丝酵母菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌等样本均无交叉反应。结果表明,建立的双抗体夹心elisa方法灵敏度高、特异性强,可用于诊断梭子蟹乳化病血卵涡鞭虫病的检测。

关键词：血卵涡鞭虫三疣梭子蟹单克隆抗体双抗体夹心elisa法

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曲霉抗原双抗体夹心elisa法特异性检测

中国公共卫生 2008年第4期24卷 476-478页

作者：王艳芳梁卫华郝卫潘玉先车小燕南方医科大学珠江医院临床医学基础研究所广州510282

目的用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法。方法采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2... 详细信息

目的用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法。方法采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心elisa法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测。结果间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbs-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原。用mAbs-1建立的双抗体夹心elisa法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心elisa法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心elisa法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应。结论2种曲霉单克降抗体双抗体夹心elisa法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段。

关键词：曲霉单克隆抗体双抗体夹心elisa法环境监测

检测BDV抗原的双抗体夹心elisa法的建立与临床应用

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检测BDV抗原的双抗体夹心ELISA法的建立与临床应用

作者：黄艺婧遵义医学院

学位级别：硕士

目的：建立一种简单、快速检测博尔纳病病毒(BDV)的双抗体夹心elisa法,并探索其应用于临床的可行性。方法：首先根据双抗体夹心elisa法,分别对BDV p24小鼠单克隆抗体、BDV p24兔多克隆抗体和酶标抗体作多梯度稀释,以确定最佳实验条件,... 详细信息

目的：建立一种简单、快速检测博尔纳病病毒(BDV)的双抗体夹心elisa法,并探索其应用于临床的可行性。方法：首先根据双抗体夹心elisa法,分别对BDV p24小鼠单克隆抗体、BDV p24兔多克隆抗体和酶标抗体作多梯度稀释,以确定最佳实验条件,然后对该方法的精密度、灵敏度、稳定性与特异性进行初步评价。并采用己建立的双抗体夹心elisa法检测44例临床确诊为病毒性脑炎(VE)的患者脑脊液(CSF),以及44例神经系统非炎性疾病患者脑脊液样本中是否存在BDV抗原。采用统计学软件对得到的实验结果进行统计学意义分析。结果：BDV p24小鼠单克隆抗体的最佳稀释度为1：160,BDV p24兔多克隆抗体的最佳稀释度为1：2500,酶标抗体的最佳稀释度为1：5000,该法的检测灵敏度为170ng/ml,精密度批内变异法检测临床标本其中病毒性脑炎患者脑脊液中有3例检出BDV抗原阳性,阳性检测率6.8%(3/44),神经系统非炎性疾病患者脑脊液中均未检出阳性病例。病毒性脑炎患者(实验组)阳性率与神经系统非炎性疾病患者(对照组)阳性率进行统计学分析(P>0.05),无统计学意义。结论：成功建立检测BDV抗原的双抗体夹心elisa法,同时为临床检测BDV抗原奠定基础。

关键词：博尔纳病病毒双抗体夹心elisa法抗原病毒性脑炎

特异性IgM和IgG4抗体联合检测及基于IgY的双抗体夹心elisa法在日本血吸虫病诊断中的应用

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特异性IgM和IgG4抗体联合检测及基于IgY的双抗体夹心ELISA法在日...

作者：蒋斌安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:利用本实验室制备并纯化的重组蛋白rSj14-3-3、rSjGST和可溶性虫卵抗原(SEA),建立间接elisa方法(SjSEA-elisa、rSj14-3-3-elisa及rSjGST-elisa),探讨联合检测血清特异性IgM和IgG4对日本血吸虫病的诊断及疗效考核的价值。利用抗可... 详细信息

目的:利用本实验室制备并纯化的重组蛋白rSj14-3-3、rSjGST和可溶性虫卵抗原(SEA),建立间接elisa方法(SjSEA-elisa、rSj14-3-3-elisa及rSjGST-elisa),探讨联合检测血清特异性IgM和IgG4对日本血吸虫病的诊断及疗效考核的价值。利用抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)和酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B组合建立双抗体夹心elisa方法(S-elisa)用于湖沼型疫区人群日本血吸虫病诊断的效果研究。方法:用Lowry法检测包被物的含量,将SEA、rSj14-3-3和rSjGST以及抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)分别包被酶标反应板,用棋盘滴定法确定最适抗原或抗体包被量以及血清稀释度,分别建立三种间接elisa法(SjSEA-elisa、rSj14-3-3-elisa和rSjGST-elisa)以及双抗体夹心elisa(S-elisa)。间接elisa法检测急性血吸虫病、慢性血吸虫病及慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后血清特异性IgM和IgG4的抗体变化,并比较重组蛋白SEA包被的三种间接elisa方法间敏感性和特异性。以改良加藤厚涂片法(Kato-Katz法)检测结果为金标准,采用S-elisa方法检测我省某疫区少年血清循环抗原,并同时用SEA-IHA检测循环抗体,比较两者敏感度和特异性。结果:SjSEA-elisa检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%、87.9%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是45.5%、68.2%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是100%和75.8%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是16%、5%;rSj14-3-3-elisa检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是77.6%、60.3%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是30.3%、48.5%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是86.2%和54.5%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是12%、2.5%:rSjGST-elisa检测时,急性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是72.4%、55.1%,慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是37.9%、50.0%,联合检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者特异性IgM和IgG4阳性率分别是81.0%和56.1%,慢性血吸虫病患者治疗12月、24月后特异性IgG4阳性率分别是14%、2.5%。检测疫区少年174例,Kato-Katz法、S-elisa和SEA-IHA阳性率分别是6.90%、22.41%和15.52%,经x检验,p＜0.01,差异有显著性;S-elisa和SEA-IHA敏感度和特异度比较,经x检验,两者均p＞0.05,差异无显著性;三种方法各自男生与女生检出率比较,差异均无统计学意义。结论:检测血清特异性IgG4对日本血吸虫病有一定的疗效考核价值;并联检测特异性IgM和IgG4对急性血吸虫病早期诊断具有较好的应用价值。S-elisa诊断血吸虫病具有较好的敏感度和特异性,可以用于疫区筛查血吸虫病。

关键词：间接elisa法双抗体夹心elisa法血吸虫病早期诊断疗效考核

血清促红细胞生成素的双抗体夹心elisa法和elisa试剂盒的建立及其方法学研究

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实用临床医学（江西） 2009年第4期10卷 1-4页

作者：曾昭伟王学谦李会强丁红梅天津医科大学研究生院天津医院检验科天津300070 天津医科大学检验系

目的建立血清促红细胞生成素(EPO)的elisa试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心elisa方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用elisa法观察其灵... 详细信息

目的建立血清促红细胞生成素(EPO)的elisa试剂盒及一种检测血清EPO的双抗体夹心elisa方法,并对其临床检测方法学进行研究。方法EPO抗体用缓冲液稀释,150μL/孔滴加到96孔板,用以包被。以正常人血清和临床血清为标本,用elisa法观察其灵敏度、回收率、线性试验、稳定性。结果最佳包被抗体浓度为1∶600,最佳抗原工作浓度为1∶100,酶标抗体工作浓度为1∶5000。标准曲线的回归方程为:y=0.017x+0.3002,r=0.9710,P双抗体夹心elisa法检测血清EPO,其敏感性、特异性、准确度均良好,为临床快速、准确、方便检测EPO提供了实验依据。

关键词：促红细胞生成素双抗体夹心elisa法定量测定试剂盒

甲型H1Nl流行性感冒病毒血凝素HAl氨基端的表达及双抗体夹心elisa法的建立

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中华预防医学杂志 2011年第9期45卷 836-838页

作者：秦利胡健萍杨宇王林林王静农业大学生物科学技术学院沈阳118066 中国检验检疫科学研究院卫生检疫研究所外来传染病研究室

甲型H1N1流行性感冒（简称流感）病毒是一种人类最常见的流感病毒之一，2009年引起流感大流行的病毒并非一种全新的流感病毒[1]，陆一涵等[2]推测可能是北美地区的H1N1病毒发生了一定程度的变异（包括重组和重排）所致。基因组测序发现... 详细信息

甲型H1N1流行性感冒（简称流感）病毒是一种人类最常见的流感病毒之一，2009年引起流感大流行的病毒并非一种全新的流感病毒[1]，陆一涵等[2]推测可能是北美地区的H1N1病毒发生了一定程度的变异（包括重组和重排）所致。基因组测序发现，该病毒包含禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的基因片段[3-4]，其中血凝素（HA）蛋白来源于猪谱系，

关键词：流行性感冒病毒双抗体夹心elisa法血凝素甲型 HAl 流感病毒 H1N1病毒流感大流行