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组蛋白去乙酰化酶SIRT6对猪卵母细胞成熟的影响及其机制研究

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组蛋白去乙酰化酶SIRT6对猪卵母细胞成熟的影响及其机制研究

作者：张丹丹安徽农业大学

学位级别：硕士

卵母细胞体外成熟(IVM)作为胚胎工程的关键环节,在家畜良种繁育、资源保护及生物学研究中具有重要应用价值。但卵母细胞成熟仍面临效率低、质量差等问题,人们对其机制了解有限。SIRT6是一种NAD依赖性组蛋白去乙酰化酶,可参与调控小鼠卵... 详细信息

卵母细胞体外成熟(IVM)作为胚胎工程的关键环节,在家畜良种繁育、资源保护及生物学研究中具有重要应用价值。但卵母细胞成熟仍面临效率低、质量差等问题,人们对其机制了解有限。SIRT6是一种NAD依赖性组蛋白去乙酰化酶,可参与调控小鼠卵母细胞成熟,但关于其在猪卵母细胞成熟中的功能研究尚不清楚。本研究旨在探讨猪卵丘细胞和卵母细胞来源的SIRT6对卵子成熟的影响及其机制,以明确SIRT6对猪卵母细胞成熟的调控作用,为增进对SIRT6生物学功能和猪卵母细胞成熟调控机制的认识提供依据。采用荧光定量PCR和免疫荧光染色技术检测发现:猪卵母细胞成熟期间,卵母细胞和卵丘细胞中均表达SIRT6 m RNA和蛋白。通过SIRT6抑制剂(OSS＿128167,处理组为400μM;对照组为0μM)处理卵丘包裹卵母细胞,与对照组相比发现,处理组的卵丘扩散面积(0.048±0.0073 mmVs.0.026±0.0020mm)、卵母细胞生发泡破裂(GVBD)(24h:94.41±3.41%Vs.23.73±1.55%,28h:100.00±0%Vs.25.01±4.44%,32h:100.00±0%Vs.40.35±6.72%)、第一极体(PB1)排出率(80.60±1.28%Vs.13.95±1.41%)和孤雌激活胚胎的发育效率(卵裂率:85.52±4.41%Vs.43.69±9.97%,囊胚率:28.70±2.07%Vs.0±0%)均显著降低。相反,SIRT6抑制剂处理去除卵丘卵母细胞时,与对照组相比发现,仅能显著降低卵母细胞PB1排出率(80.67±5.60%Vs.31.80±3.39%)。然而,无论是卵丘细胞还是卵母细胞来源的SIRT6受抑制时,都会影响纺锤体和染色体的形成。不仅如此,当抑制卵丘细胞表达的SIRT6时,显著降低卵丘扩散和缝隙连接通道相关基因的表达,及卵母细胞中CDK1磷酸化水平。最后,抑制腺苷酸环化酶活性可以部分恢复SIRT6抑制剂诱导的卵丘包裹卵母细胞GVBD(23.97±7.57%Vs.57.28±12.06%)和PB1排出率(12.77±2.56%Vs.35.99±4.06%)。综上所述,SIRT6参与调节猪卵母细胞成熟;SIRT6在卵丘细胞表达并调控猪卵丘细胞扩散及卵母细胞生发泡破裂,而SIRT6在卵母细胞表达参与调控第一极体排出;无论SIRT6在卵丘细胞还是在卵母细胞表达均参与调控卵子成熟中纺锤体和染色体的形成;SIRT6介导腺苷酸环化酶活性调控猪卵母细胞减数分裂启动和成熟。

关键词： SIRT6 猪卵母细胞卵丘细胞卵母细胞成熟

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卵母细胞成熟障碍综合征一例报告

中国优生与遗传杂志 2017年第12期25卷 115-118,F0003页

作者：邓陶然黄博杜瑶瑶华香腾雪梅尧阳城远孝琼李豫峰郭娜华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖医学中心武汉430030

反复卵母细胞成熟障碍是少数女性多次接受辅助生殖技术助孕仍失败的原因之一。临床上,反复完全性卵母细胞成熟障碍极少见。Beall等[1]提出了卵母细胞成熟障碍综合征（syndrome of oocyte maturation failure,OMFS）的概念,其主要临床特... 详细信息

反复卵母细胞成熟障碍是少数女性多次接受辅助生殖技术助孕仍失败的原因之一。临床上,反复完全性卵母细胞成熟障碍极少见。Beall等[1]提出了卵母细胞成熟障碍综合征（syndrome of oocyte maturation failure,OMFS）的概念,其主要临床特征是患者在不同IVF/ICSI周期的大部分卵母细胞反复发生成熟阻滞而导致原发性不孕,这种情况在临床上发生率更高。现将我院生殖中心1例曾行4次IVF助孕的OMFS患者诊疗情况报道如下。

关键词：卵母细胞成熟辅助生殖技术原发性不孕诊疗情况 maturation oocyte 率更综合征卵泡成熟卵

哺乳动物卵母细胞成熟和受精中细胞骨架重组和作用

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细胞生物学杂志 2005年第1期27卷 19-23页

作者：苏静艳李树峰严云勤东北农业大学生命科学学院细胞生物学实验室哈尔滨150030

　卵母细胞成熟和受精是动物生殖过程的核心环节。细胞骨架是遍布于卵母细胞胞质中的一种复杂的蛋白质纤维网络,研究表明,卵母细胞成熟和受精过程中伴随着广泛的胞质骨架重组。哺乳动物卵母细胞和早期胚胎中细胞骨架具有其独特的分布和... 详细信息

　卵母细胞成熟和受精是动物生殖过程的核心环节。细胞骨架是遍布于卵母细胞胞质中的一种复杂的蛋白质纤维网络,研究表明,卵母细胞成熟和受精过程中伴随着广泛的胞质骨架重组。哺乳动物卵母细胞和早期胚胎中细胞骨架具有其独特的分布和功能,使卵母细胞和胚胎呈现出不同的变化特点。微丝、微管的分布变化与卵母细胞成熟和受精中遗传物质的重组密切相关。近年来,对哺乳动物不同物种间卵母细胞和胚胎中细胞骨架成分的研究取得了很大的进展,结合这些研究成果,对哺乳动物卵母细胞成熟和受精过程中细胞骨架的重组、分布和作用进行了介绍。同时,对多种信号转导途径参与卵母细胞成熟和受精中细胞骨架系统的调控也作了探讨。

关键词：卵母细胞成熟哺乳动物细胞骨架受精过程物种胚胎微丝分布变化信号转导途径作用

G蛋白偶联受体在飞蝗卵黄生成与卵母细胞成熟过程中的功能鉴定

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G蛋白偶联受体在飞蝗卵黄生成与卵母细胞成熟过程中的功能鉴定

作者：陈晨河南大学

学位级别：硕士

昆虫具有极强的繁殖能力,卵黄生成和卵母细胞成熟是昆虫产卵并保障胚胎正常发育的基础。在很多昆虫中,卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在脂肪体中合成,通过血淋巴运输到卵巢,被发育中的卵母细胞摄取,从而促进卵的成熟,这一过程受保幼激素(j... 详细信息

昆虫具有极强的繁殖能力,卵黄生成和卵母细胞成熟是昆虫产卵并保障胚胎正常发育的基础。在很多昆虫中,卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在脂肪体中合成,通过血淋巴运输到卵巢,被发育中的卵母细胞摄取,从而促进卵的成熟,这一过程受保幼激素(juvenile hormone,JH)调控,但其中的分子调控机制并不清楚。飞蝗(Locusta migratoria)是研究JH调控昆虫生殖机制的一个理想模式,一方面飞蝗是不完全变态昆虫的一个代表,其卵巢为无滋式,它的卵黄生成和卵母细胞成熟都由JH调控;另一方面,飞蝗的强大生殖力是蝗灾形成的一个重要因素。G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是真核生物体内最大的膜受体家族,参与调节机体许多关键的生理生化进程,因其广泛而多样的生物学功能,GPCR成为潜在的害虫防治靶标。昆虫GPCR可分为四个亚家族:A亚家族是类视紫红质受体,B亚家族是分泌素受体,C亚家族是代谢型谷氨酸受体,D亚家族是非典型性受体。有研究报道,昆虫的发育、繁殖和行为等都会受到GPCR的调控,但机制并不明确。因此,解析GPCR在卵黄生成与卵母细胞成熟过程中的功能,鉴定起关键作用的GPCR,有助于推动昆虫生殖的内分泌调控机理研究。本论文以飞蝗为研究对象,在基因组和转录组数据的基础上,通过生物信息学分析、基因克隆等,筛选了11个候选GPCR基因。这些基因包括A亚家族成员:Neuromedin U Receptor1(NmUR1);B亚家族成员:G protein-coupled receptor 64(GPR64)、G proteincoupled receptor 124(GPR124)、Latrophilin 3(Lphn3)、G protein-coupled receptor 143(GPR143)、Methuselah-like 14(Mthl14)、Methuselah-like 1(Mthl1)、Methuselah 2(Mth2)、Methuselah-like 5(Mthl5)和Methuselah 15-like(Mth15l),以及C亚家族成员:Orphan receptor-C(OrphanR-C)。利用qRT-PCR、western blot、RNAi等,对上述基因在Vg合成与运输、卵巢生长、卵母细胞成熟中的作用进行了分析。依据表型观察以及Vg转录和蛋白水平检测,基因干扰结果大致分为三类:1)脂肪体中的Vg合成受到抑制;2)Vg向血淋巴分泌受阻;3)Vg被卵母细胞吸收受到干扰。具体研究结果显示,NmUR1干扰导致脂肪体中Vg mRNA水平以及脂肪体、血淋巴和卵巢中的Vg蛋白水平都显著下降,卵巢生长和卵母细胞成熟受阻,说明NmUR1可能在Vg转录调控中发挥功能。Mthl1干扰不影响Vg转录但造成Vg蛋白水平在三个组织中均显著下降,卵巢发育和卵母细胞成熟也受到抑制,表明Mthl1可能在Vg合成中发挥功能。Mthl14干扰引起Vg mRNA水平下降,Vg蛋白在卵巢和血淋巴中减少,而在脂肪体中增多,同样阻碍了卵巢发育和卵母细胞成熟,说明Mthl14可能在脂肪体分泌Vg的过程中发挥重要影响。GPR124和Lphn3干扰后,Vg的mRNA及蛋白水平均显著下降,也抑制卵巢发育和卵母细胞成熟。有趣的是,GPR64干扰后,Vg mRNA水平未受影响,但Vg蛋白含量除卵巢组织显著减少外,在脂肪体和血淋巴中都明显增多,卵巢发育和卵母细胞成熟也受到抑制,表明GPR64可能参与调控Vg在卵巢中运输和卵母细胞对Vg的吸收。其沉默GPR143表达,且影响了Vg蛋白水平的变化,卵巢发育和卵母细胞成熟也受到明显抑制。OrphanR-C RNAi结果显示,OrphanR-C作用于Vg的转录水平,进而抑制卵巢生长和卵母细胞成熟。Mth2干扰对Vg水平、卵巢发育和卵母细胞成熟都不产生明显影响。遗憾的是,未能对Mthl5和Mth15l实现有效干扰,有待进一步研究。本论文研究综合Vg合成与运输、卵巢生长、卵母细胞成熟等表型分析,筛选出了8个影响飞蝗卵黄生成与卵母细胞成熟的GPCR,供后续的深入研究。研究结果对揭示GPCR在JH调节的飞蝗生殖过程中的功能与机制提供了重要的基础数据。

关键词： G蛋白偶联受体保幼激素飞蝗卵黄生成卵母细胞成熟

cGMP信号通路调控鱼类卵母细胞成熟的功能分析

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cGMP信号通路调控鱼类卵母细胞成熟的功能分析

作者：周文妮西北师范大学

学位级别：硕士

环鸟苷酸(c GMP)信号在哺乳动物卵母细胞成熟中的作用中引起了人们广泛的关注,但在鱼类中的作用尚不清楚。在本研究中,我们以斑马鱼为模型,首次在鱼类中证实了c GMP参与鱼类卵母细胞的成熟,但是我们发现c GMP在调控鱼类卵母细胞成熟过... 详细信息

环鸟苷酸(c GMP)信号在哺乳动物卵母细胞成熟中的作用中引起了人们广泛的关注,但在鱼类中的作用尚不清楚。在本研究中,我们以斑马鱼为模型,首次在鱼类中证实了c GMP参与鱼类卵母细胞的成熟,但是我们发现c GMP在调控鱼类卵母细胞成熟过程中的作用模式与哺乳动物不同。有趣的是,我们发现无论是激活或抑制完全生长期卵泡中的NO/s GC/c GMP通路,都会刺激卵母细胞的成熟。c GMP通过PDE3和PKG途径发挥作用,这两条途径是自发成熟和c GMP调控的卵母细胞成熟所必需的。同时我们检测到,在卵母细胞成熟过程中,一氧化氮和c GMP的含量都受黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)的调控。本研究所取得的主要研究结果如下:(1)c GMP可被利钠肽(natriuretic peptide,Np)系统和一氧化氮(nitric oxide,NO)系统所调控,且Np系统和NO系统成员在斑马鱼卵巢中都有表达。在Np系统中,发现有6种配体(nppa,nppb,nppc1,nppc2,nppc3,and nppc4)和4种受体(npr1(npr1b),npr1a,npr2,npr3)。在NO系统中,与哺乳动物类似,斑马鱼的卵巢内有3种一氧化氮合酶NOS(nos1,nos2a和nos2b)和4种受体s GC(gucy1a2,gucy1a3,gucy1b2和gucy1b3)。(2)鱼类Np系统可能并不参与卵子成熟的过程。我们设计和合成斑马鱼Nppc1,Nppc2,Nppc3,Nppc4,Nppa,Nppb的成熟肽,对完全生长期卵泡进行体外孵育,发现并不能显著影响卵母细胞成熟。(3)激活NO/s GC/c GMP信号可诱导卵子成熟。我们利用两种一氧化氮的供体SNAP和NOC-5,两种s GC的激活剂protoporphyrin IX和YC-1,以及两种c GMP的类似物8-Br-c GMP和db-c GMP对完全生长期卵泡进行体外孵育,发现都能显著性升高卵母细胞成熟率。(4)抑制NOS/NO/s GC信号可诱导卵母细胞成熟。我们利用三种NOS的抑制剂L-NAME、AG和Vinyl-L-NIO,一种NO的清除剂PTIO,一种s GC的抑制剂ODQ,对完全生长期卵泡进行体外孵育,发现都能明显促进卵母细胞成熟。(5)抑制PKG与PDE3可抑制卵母细胞的自发成熟。我们利用PKG的抑制剂kt5823和PDE3的抑制剂cilostamide,对完全生长期卵泡进行体外孵育,发现在时间梯度和浓度梯度上都能显著性抑制卵母细胞成熟。(6)c GMP诱导的鱼类卵母细胞成熟过程,是通过PKG和PDE3途径。PKG的抑制剂kt5823和PDE3抑制剂cilostamide,分别能够抑制NO/s GC/c GMP系统在激活和抑制两种状态下的促进作用。证明c GMP对卵母细胞成熟的诱导作用,是通过了PKG以及PDE3途径,这两条途径是自发成熟和c GMP调控的卵母细胞成熟所必需的。(7)在斑马鱼的卵母细胞成熟过程中,LH可以调控一氧化氮和c GMP在卵泡、滤泡层以及卵母细胞内的含量。具体表现为人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,h CG)注射后,滤泡层细胞中的c GMP含量升高,在整个卵泡和卵母细胞内含量降低,而一氧化氮在滤泡层细胞和整个卵泡中含量升高,在卵母细胞内含量变化不明显。这些发现促使我们提出了一个关于斑马鱼卵母细胞成熟中c GMP起双重作用的假说:在LH刺激发生前,滤泡层细胞内产生的c GMP通过通道连接(gap junction)进入卵母细胞内,抑制PDE3对c AMP的水解,进而阻滞卵母细胞的减数分裂过程。LH信号刺激后,滤泡层细胞内升高的NO和c GMP通过PKG途径促进卵母细胞成熟,卵母细胞内的c GMP浓度降低,PDE3对c AMP的水解作用加剧,进而加速卵母细胞的成熟。目前,我们仅发现一氧化氮信号通路在通过c GMP调控斑马鱼卵母细胞成熟的过程中比较重要,利钠肽家族在其中所起的作用还值得进一步研究。这些结果有助于我们更好地理解鱼类卵母细胞成熟的机制。

关键词：斑马鱼卵母细胞成熟 cGMP 一氧化氮黄体生成素

颗粒细胞骨形态发生蛋白-9评估IVF卵母细胞成熟及胚胎发育

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颗粒细胞骨形态发生蛋白-9评估IVF卵母细胞成熟及胚胎发育

作者：李怡河北医科大学

学位级别：硕士

目的:在体外受精-胚胎移植(In vitro ferti1ization-embryo transfer,IVF-ET,IVF)过程中,能够准确判断卵母细胞成熟度对于受精、胚胎发育、妊娠的建立以及胎儿发育具有深刻的影响。提高卵母细胞成熟度对改善IVF妊娠结局具有重大意义。... 详细信息

目的:在体外受精-胚胎移植(In vitro ferti1ization-embryo transfer,IVF-ET,IVF)过程中,能够准确判断卵母细胞成熟度对于受精、胚胎发育、妊娠的建立以及胎儿发育具有深刻的影响。提高卵母细胞成熟度对改善IVF妊娠结局具有重大意义。骨形态发生蛋白-9(Bone morphogenetic protein-9,BMP-9)是骨形态发生蛋白家族(Bone morphogenetic protein,BMP)中的一种,大量存在于肝脏,具有诱导和维持胚胎神经元的类胆碱分化、调节葡萄糖和脂肪酸代谢、调节体内铁的动态平衡等多种重要功能,是目前已知的BMPs中诱导成骨能力最强的因子。近期有研究发现BMP-9在大鼠原始颗粒细胞对类固醇生成存在作用,因此我们推测BMP-9可能存在人卵巢颗粒细胞中并参与生殖系统的调节。本研究检测IVF-ET助孕患者颗粒细胞中BMP-9水平,分析其与年龄、体重指数(Body mass index,BMI)、受精率、优质胚胎率,卵子利用率之间的关系,探讨BMP-9对卵子质量、受精及胚胎发育的影响。方法:选取2015年4月至2015年7月于河北医科大学第四医院生殖医学科接受常规IVF-ET,采用长方案控制性促排卵治疗的患者作为研究对象,共85例。年龄20-38周岁;窦卵泡数≥7个;月经周期规律。采用免疫细胞化学法检测BMP-9在颗粒细胞中的表达定位,逆转录PCR(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测颗粒细胞中BMP-9 m RNA和蛋白的表达水平。控制性促排卵治疗:患者均采用长方案治疗,于黄体期中期开始用药,皮下注射促性腺激素释放激素激动剂(Gonadotrophin releasing hormone agonist,Gn RHa)1.4mg,第14天测定血清卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、雌二醇(Estradiol,E2)水平,并B超下监测卵泡大小及子宫内膜(Endometrium,EM)厚度,达到降调节水平(LH≤2.5IU/L,FSH≤3IU/L,E2≤30pg/ml,EM≤5mm),后给予重组人促卵泡激素注射液(r-FSH)150-225IU促排卵,超声监测子宫内膜及卵泡生长情况,必要时抽取肘静脉血监测LH、E2、孕激素(Progesterone,P)水平,当有2个卵泡直径大于20mm,且血清E2水平为每个卵泡约200-300pg/ml时,当晚注射艾泽250μg(重组人绒促性素注射液,意大利)。36-37h后经阴道超声指导下取卵。卵母细胞及胚胎评价:评估卵子颗粒细胞复合体采用MⅡ卵评分系统。受精后16～20小时采用SCOTT合子评分标准,观察受精卵的原核形态。受精卵继续培养48小时,采用卵裂期胚胎评分标准进行评分,检查胚胎发育情况。颗粒细胞采集:留取全部卵泡液,收集细胞沉淀。50%的Percoll细胞分离液分离颗粒细胞,红细胞裂解液裂解残留的红细胞,PBS洗涤后离心,下层即为颗粒细胞。部分颗粒细胞加入2ml Trizol液完全裂解后置于-80℃冻存,用于RT-PCR实验;部分-80℃直接冻存,用于Western blot实验;另留取少量颗粒细胞涂片,4%多聚甲醛固定后用于免疫细胞化学实验。免疫细胞化学法:对颗粒细胞进行固定及透化处理;封闭内源性过氧化物酶及非特异性结合位点。一抗采用兔抗人多克隆BMP-9抗体(山羊血清按照1:200)(ABCAM),阴性对照以PBS代替一抗,并按照免疫细胞化学法进行检测。Leica显微照相系统进行图像釆集。RT-PCR技术:Trizol法提取颗粒细胞中的总RNA,反转录采用PROMEGA试剂盒,按照说明书进行。以β-actin为内参,将目的基因扩增。产物于20g/L的琼脂糖凝胶电泳,目的基因与内参扩增产物电泳条带亮度密度比值为BMP-9 m RNA的相对表达量。Western Blot:细胞裂解液裂解颗粒细胞;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳;分离蛋白条带,转移至PVDF膜上;5%脱脂奶粉封闭1小时;将PVDF膜放入BMP-9抗体工作液(1∶1 000)中,4℃过夜;TBST洗膜三次;加二抗孵育1小时,用TBST液洗膜三次。β-actin为内参。用双色红外激光扫描器进行扫描,记录灰度值,目的条带与内参照的光密度比值为BMP-9蛋白的相对表达量。统计分析:所有数据采用SPSS13.0统计软件进行统计分析。计量资料采用`x±s表示,组间差异采用t检验,P<0.05即有显著性差异。对相关的计量资料

关键词：骨形态发生蛋白-9 体外受精-胚胎移植卵母细胞成熟胚胎质量颗粒细胞

MiR-145-5p调控Ythdf2影响小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育的研究

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MiR-145-5p调控Ythdf2影响小鼠卵母细胞成熟和早期胚胎发育的研究

作者：郝金栋吉林大学

学位级别：硕士

N6-甲基腺苷(mA)是一种普遍存在于真核生物mRNA中的表观遗传学修饰,其生物学功能受到甲基转移酶、去甲基酶和识别蛋白的调控,呈现一种动态并可逆的表达模式。mA对哺乳动物卵母细胞的成熟及早期胚胎发育有重要的作用,敲除某个mA修饰相关... 详细信息

N6-甲基腺苷(mA)是一种普遍存在于真核生物mRNA中的表观遗传学修饰,其生物学功能受到甲基转移酶、去甲基酶和识别蛋白的调控,呈现一种动态并可逆的表达模式。mA对哺乳动物卵母细胞的成熟及早期胚胎发育有重要的作用,敲除某个mA修饰相关的酶会影响的卵母细胞成熟和胚胎发育,然而许多参与mA生物学功能的酶在卵母细胞成熟和胚胎发育中的作用仍然未知。因此,mA修饰在卵母细胞和胚胎发育过程中的调控作用成为近几年研究的热点。YTHDF2是第一个被发现的mA识别蛋白,可以与mA结合并影响mRNA的稳定性,促进mRNA的降解。Ythdf2可以通过调节母体转录物的剂量来影响卵母细胞的发育能力以及合子基因组的激活过程。miRNA是一种长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA,在基因转录后调控中有广泛的作用。在癌症中已经报道miRNA调控YTHDF2来影响细胞的增殖和迁移,而miRNA是否可以调控Ythdf2来影响配子发生和胚胎发育至今未有报道。miR-145-5p是一种位于人5号染色体,长度为22个核苷酸的miRNA,在卵母细胞和早期胚胎中都有表达。已经证明miR-145-5p可以调控YTHDF2抑制肝癌细胞的增殖,但其调控功能在卵母细胞和胚胎中仍然未知。为了研究miR-145-5p是否可以调控Ythdf2影响卵母细胞的成熟,我们在小鼠GV期卵母细胞中注射Ythdf2的siRNA以及miR-145-5p的模拟物和抑制剂。实验证明,抑制Ythdf2不会影响卵母细胞成熟率,但会降低卵母细胞的发育能力。miR-145-5p在卵母细胞中可以抑制Ythdf2的表达,此外,抑制miR-145-5p可以缓解敲降Ythdf2对卵母细胞的损害。Ythdf2在小鼠合子基因组激活和早期胚胎发育中的功能还未报道。为了研究Ythdf2在早期胚胎发育中的作用以及miR-145-5p对其的调控作用,我们在小鼠合子中注射Ythdf2的siRNA以及miR-145-5p的模拟物和抑制剂。实验证明,抑制Ythdf2会显著降低小鼠胚胎的卵裂率和囊胚率,提高胚胎的凋亡水平。miR-145-5p在早期胚胎发育过程中可以抑制Ythdf2的表达,提高小鼠囊胚mA的水平。抑制miR-145-5p可以促进小鼠早期胚胎的发育,减少胚胎细胞的凋亡。总之,miR-145-5p调控Ythdf2在小鼠卵母细胞的成熟及早期胚胎发育过程中发挥重要的作用。

关键词： m6A YTH域家族蛋白2 miR-145-5p 卵母细胞成熟早期胚胎发育

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卵丘在卵母细胞成熟中的作用

细胞生物学杂志 2005年第4期27卷 403-406页

作者：岳顺利周佳勃严云勤东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

卵丘是指在卵母细胞外周并与之进行代谢联系的颗粒细胞群;卵丘对于卵母细胞成熟有极其重要的作用。主要表现在卵丘参与维持卵母细胞减数分裂阻滞,诱导卵母细胞减数分裂恢复、支持卵母细胞细胞质的成熟。卵丘形态和卵丘扩展影响卵母细胞... 详细信息

卵丘是指在卵母细胞外周并与之进行代谢联系的颗粒细胞群;卵丘对于卵母细胞成熟有极其重要的作用。主要表现在卵丘参与维持卵母细胞减数分裂阻滞,诱导卵母细胞减数分裂恢复、支持卵母细胞细胞质的成熟。卵丘形态和卵丘扩展影响卵母细胞成熟。了解卵丘在卵母细胞成熟中的作用有助于帮助人们进一步揭示哺乳动物卵母细胞成熟的机制。

关键词：卵丘卵母细胞成熟卵母细胞成熟减数分裂恢复卵丘扩展哺乳动物细胞群细胞外细胞质

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雌激素及其受体与卵母细胞成熟的相关性

雌激素及其受体与卵母细胞成熟的相关性

作者：李伊然宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的通过测定取卵日人血清及卵泡液内雌二醇水平、卵丘细胞雌激素-β受体mRNA的表达，探讨卵泡液雌激素浓度与卵丘细胞E2-β受体mRNA的表达量的关系和卵母细胞成熟与卵丘细胞-β受体mRNA的表达量的相关性;通过观察雌激素G蛋白偶联受体GP... 详细信息

目的通过测定取卵日人血清及卵泡液内雌二醇水平、卵丘细胞雌激素-β受体mRNA的表达，探讨卵泡液雌激素浓度与卵丘细胞E2-β受体mRNA的表达量的关系和卵母细胞成熟与卵丘细胞-β受体mRNA的表达量的相关性;通过观察雌激素G蛋白偶联受体GPR30在小鼠卵母细胞上的表达定位和不同时期的表达量以及体内成熟和体外成熟的卵母细胞表达量的比较，探讨GPR30对小鼠卵母细胞成熟调控作用和对卵母细胞体内、体外成熟调控作用的差异。为探索体外环境和体内微环境下雌激素通过调控雌激素受体的表达进而控制卵母细胞发育和凋亡的机制，调节控制卵母细胞的静止、启动及发育成熟提供理论依据。方法选择因男性不孕行单精子卵母细胞胞质内注射（ICSI）治疗的的患者34例，研究对象的一般资料：见附表1，所有研究对象的一般资料无差异性。在取卵日收集外周血、卵泡液及卵丘细胞，分别测定雌二醇浓度和ER-βmRNA的表达量，采用电化学发光法（ECLIA）检测血清及卵泡液中雌二醇（E2）的水平，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime-PCR）检测卵丘细胞ER-βmRNA的表达量，并记录卵母细胞成熟度并进行相关性分析。选择CD1系鼠龄为8－10周的雌性老鼠作为研究对象，通过促排卵方法获取小鼠体内成熟的卵母细胞（MII期），从无任何药物刺激的小鼠获得未成熟卵母细胞（GV期）经体外成熟培养（IVM）发育至成熟卵母细胞（MII期）和老化卵母细胞（Aging期）。采用激光共聚焦扫描显微镜（LSM）获取二维和三维（2D、3D）的显微镜图片，鉴定GPR30在小鼠卵母细胞内的定位并测定其表达量。运用蛋白质免疫印迹的方法，鉴定不同成熟度卵母细胞膜组分中GPR30蛋白的表达量。结果(1)取卵日每卵泡平均血清E2水平与卵泡液中E2水平呈正相关（P=0.002）。（2）MⅡ期卵母细胞内卵泡液E2水平显著高于MⅠ期和GV期卵母细胞水平，差异有统计学意义P卵母细胞的卵丘细胞中ER-βmRNA的表达量是MⅠ期的2.74倍（P细胞的ER-βmRNA的表达量与卵泡液内雌激素浓度呈正相关（4）GPR30为小鼠卵母细胞特异性的雌激素膜受体，在小鼠不同发育时期的卵母细胞均有表达（5）不同成熟期的卵母细胞，GPR30表达量不同，各期表达量比较有显著性差异（P成熟的卵母细胞明显低于体内成熟的卵母细胞，两者比较有显著性差异（P卵母细胞成熟度的指标;（2）ER-β在卵丘细胞的表达量与卵母细胞成熟度和卵泡液内雌激素水平有正相关性（3）GPR30为小鼠卵母细胞特异性的雌激素膜受体。（4）卵母细胞膜GPR30的表达量和卵母细胞的成熟度有相关性。（5）体外培养能减少GPR30在卵母细胞膜的表达量。

关键词：雌激素雌激素受体卵母细胞卵丘细胞卵母细胞成熟