雌激素及其受体与卵母细胞成熟的相关性

作     者：李伊然 

作者单位：宁夏医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李际春;陈子江;千日成

授予年度：2013年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

主      题：雌激素 雌激素受体 卵母细胞 卵丘细胞 卵母细胞成熟 

摘      要：目的通过测定取卵日人血清及卵泡液内雌二醇水平、卵丘细胞雌激素-β受体mRNA的表达，探讨卵泡液雌激素浓度与卵丘细胞E2-β受体mRNA的表达量的关系和卵母细胞成熟与卵丘细胞-β受体mRNA的表达量的相关性;通过观察雌激素G蛋白偶联受体GPR30在小鼠卵母细胞上的表达定位和不同时期的表达量以及体内成熟和体外成熟的卵母细胞表达量的比较，探讨GPR30对小鼠卵母细胞成熟调控作用和对卵母细胞体内、体外成熟调控作用的差异。为探索体外环境和体内微环境下雌激素通过调控雌激素受体的表达进而控制卵母细胞发育和凋亡的机制，调节控制卵母细胞的静止、启动及发育成熟提供理论依据。 方法 选择因男性不孕行单精子卵母细胞胞质内注射（ICSI）治疗的的患者34例，研究对象的一般资料：见附表1，所有研究对象的一般资料无差异性。在取卵日收集外周血、卵泡液及卵丘细胞，分别测定雌二醇浓度和ER-βmRNA的表达量，采用电化学发光法（ECLIA）检测血清及卵泡液中雌二醇（E2）的水平，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime-PCR）检测卵丘细胞ER-βmRNA的表达量，并记录卵母细胞成熟度并进行相关性分析。 选择CD1系鼠龄为8－10周的雌性老鼠作为研究对象，通过促排卵方法获取小鼠体内成熟的卵母细胞（MII期），从无任何药物刺激的小鼠获得未成熟卵母细胞（GV期）经体外成熟培养（IVM）发育至成熟卵母细胞（MII期）和老化卵母细胞（Aging期）。采用激光共聚焦扫描显微镜（LSM）获取二维和三维（2D、3D）的显微镜图片，鉴定GPR30在小鼠卵母细胞内的定位并测定其表达量。运用蛋白质免疫印迹的方法，鉴定不同成熟度卵母细胞膜组分中GPR30蛋白的表达量。 结果(1)取卵日每卵泡平均血清E2水平与卵泡液中E2水平呈正相关（P=0.002）。（2）MⅡ期卵母细胞内卵泡液E2水平显著高于MⅠ期和GV期卵母细胞水平，差异有统计学意义P0.01。（3）MⅡ期卵母细胞的卵丘细胞中ER-βmRNA的表达量是MⅠ期的2.74倍（P0.01），是GV期的3.51倍（P0.01）。卵丘细胞的ER-βmRNA的表达量与卵泡液内雌激素浓度呈正相关（4）GPR30为小鼠卵母细胞特异性的雌激素膜受体，在小鼠不同发育时期的卵母细胞均有表达（5）不同成熟期的卵母细胞，GPR30表达量不同，各期表达量比较有显著性差异（P0.01）。（6）GPR30表达量体外成熟的卵母细胞明显低于体内成熟的卵母细胞，两者比较有显著性差异（P0.05）。 结论（1）外周血雌激素水平可以间接反映卵泡液内雌激素水平作为预测卵母细胞成熟度的指标;（2）ER-β在卵丘细胞的表达量与卵母细胞成熟度和卵泡液内雌激素水平有正相关性（3）GPR30为小鼠卵母细胞特异性的雌激素膜受体。（4）卵母细胞膜GPR30的表达量和卵母细胞的成熟度有相关性。（5）体外培养能减少GPR30在卵母细胞膜的表达量。