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北京油鸡胚蛋孵化过程中营养成分变化

食品工业科技 2019年第19期40卷 291-295,300页

作者：张丽静付劢陈继兰王有英范蓓王艳王东晖王凤忠中国农业科学院农产品加工研究所北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

以北京油鸡为研究对象,在相同的孵化条件下,分析不同孵化期蛋白质、氨基酸、灰分、脂肪、胆固醇及溶菌酶的变化。结果表明:在鸡胚蛋孵化期间,蛋白质水平从孵化开始逐渐增加,10~16 d蛋白质水平比鲜蛋提高了2.19%,在孵化后期,蛋白质逐渐... 详细信息

以北京油鸡为研究对象,在相同的孵化条件下,分析不同孵化期蛋白质、氨基酸、灰分、脂肪、胆固醇及溶菌酶的变化。结果表明:在鸡胚蛋孵化期间,蛋白质水平从孵化开始逐渐增加,10~16 d蛋白质水平比鲜蛋提高了2.19%,在孵化后期,蛋白质逐渐被胚胎吸收,含量略有下降。必需氨基酸占总氨基酸的百分含量(EAA/TAA)为47.85%~51.20%,接近WHO/FAO理想蛋白质标准,能够为人体提供更为丰富的必需氨基酸,其中鲜味氨基酸总量占氨基酸总量的质量分数(FAA/TAA)为37.97%~41.06%。胆固醇及脂肪含量总体呈下降趋势,脂肪含量降低约近1.5倍,灰分含量基本上呈平稳增加趋势,由1.07%增加到1.65%。溶菌酶具有抗炎抗菌活性,在鸡胚蛋孵化过程中,溶菌酶活性由170 U/mg增加至390 U/mg。本研究结果为营养蛋品的开发利用及天然抗菌剂的研究提供了参考。

关键词：北京油鸡鸡胚蛋营养成分溶菌酶

北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达

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南京农业大学学报 2010年第4期33卷 93-99页

作者：郭俣刘长青陆涛峰佟春玲修晓娜关伟军马月辉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094 蚌埠医学院检验系蚌埠医学院生物科学系安徽蚌埠233030 内蒙古农业大学动物科学与医学院内蒙古呼和浩特010018

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基... 详细信息

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求。

关键词：北京油鸡 SMARTcDNA文库 purH基因

北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析

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Zoological Research 2008年第4期29卷 353-362页

作者：刘长青刘帅包阿东陆涛峰吴宏梅张洪海唐学玺关伟军马月辉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094 曲阜师范大学研究生处曲阜273165 中国海洋大学海洋生命学院青岛266003

采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子-27号碱基发生C... 详细信息

采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子-27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来不是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC。将ADSL基因完整开放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-1中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79。该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础。

关键词：北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶结构分析基因表达

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北京油鸡胚胎肝脏间充质干细胞的生物学特性

华中农业大学学报 2013年第6期32卷 99-105页

作者：牧仁边艳超浦亚斌李向臣王凤龙关伟军内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

从7日龄北京油鸡胚胎肝脏中分离间充质干细胞,原代培养并传代至15代,免疫荧光法检测造血祖细胞/肝卵圆细胞的表面标志物CD34、CK19呈阴性表达;RT-PCR检测CD29、CD44、CD71、CD73呈阳性表达。尝试不同培养条件对细胞生长曲线的影响,选取... 详细信息

从7日龄北京油鸡胚胎肝脏中分离间充质干细胞,原代培养并传代至15代,免疫荧光法检测造血祖细胞/肝卵圆细胞的表面标志物CD34、CK19呈阴性表达;RT-PCR检测CD29、CD44、CD71、CD73呈阳性表达。尝试不同培养条件对细胞生长曲线的影响,选取最佳培养方案,同时对细胞进行细胞周期测定。肝脏间充质干细胞通过不同诱导液被成功诱导分化成脂肪细胞、心肌细胞,结果表明,从鸡胎肝中分离获得的间充质干细胞具有和人类间充质干细胞相似的生物学特性及分化潜能,其所具有多向分化的潜能,为今后临床广泛应用提供了可能。

关键词：北京油鸡间充质干细胞生长曲线诱导分化

北京油鸡羊膜上皮细胞的分离、培养及分化潜能的研究

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畜牧兽医学报 2013年第2期44卷 211-219页

作者：高玉花张文秀吴芳春关伟军马月辉中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在研究禽类胚胎羊膜上皮细胞的分离、培养、鉴定及向不同胚层细胞诱导分化等的生物学特性。本研究使用酶消化法从北京油鸡胎膜中分离羊膜上皮细胞,通过免疫荧光和RT-PCR方法鉴定羊膜上皮细胞标志物(Nanog、Oct-4、Sox-2、CK19和Viment... 详细信息

旨在研究禽类胚胎羊膜上皮细胞的分离、培养、鉴定及向不同胚层细胞诱导分化等的生物学特性。本研究使用酶消化法从北京油鸡胎膜中分离羊膜上皮细胞,通过免疫荧光和RT-PCR方法鉴定羊膜上皮细胞标志物(Nanog、Oct-4、Sox-2、CK19和Vimentin),并诱导其向成骨细胞、脂肪细胞和胰岛样细胞诱导分化,检测其多向分化潜能。结果表明,酶消化法获得的鸡羊膜上皮细胞不仅表达干细胞特有的标志,而且成功诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和胰岛样细胞。综上所述,北京油鸡羊膜上皮细胞在体外具有较强的自我更新能力及可塑性,可作为种子细胞进行濒危物种的保存,并为日后利用羊膜上皮细胞进行临床治疗提供一定的理论依据,同时也可为油鸡基因的改良提供模型。

关键词：北京油鸡干细胞羊膜上皮细胞分化潜能

北京油鸡AMPD1基因多态性及其与肌苷酸含量关系的研究

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畜牧兽医学报 2005年第11期36卷 1117-1120页

作者：柴丽娟储明星文杰陈继兰赵桂苹郑麦青刘文忠周忠孝山西农业大学动物科学技术学院太谷030801 中国农业科学院畜牧研究所北京100094

根据人和大鼠的腺苷一磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因序列设计引物,采用PCR-RF-SSCP技术检测了130只北京油鸡AMPD1基因多态性,并分析了AMPD1的不同基因型与北京油鸡肌苷酸含量的关系。结果表明:在北京油鸡中检测到AMPD1基因的A、B、C3个等位基... 详细信息

根据人和大鼠的腺苷一磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因序列设计引物,采用PCR-RF-SSCP技术检测了130只北京油鸡AMPD1基因多态性,并分析了AMPD1的不同基因型与北京油鸡肌苷酸含量的关系。结果表明:在北京油鸡中检测到AMPD1基因的A、B、C3个等位基因,基因频率分别为0.180 8、0.661 5、0.157 7;产生AA、AB、AC、BB、BC、CC6种基因型,基因型频率分别为0.076 9、0.176 90、.030 80、.461 5、0.223 1、0.030 8。最小二乘分析表明基因型AC、BB所对应的肌苷酸含量最小二乘均值显著高于基因型AA所对应的最小二乘均值(P0.05)。

关键词：北京油鸡 AMPD1基因肌苷酸含量 PCR—RF-SSCP

北京油鸡和矮脚鸡心脏型、脂肪型脂肪酸结合蛋白基因多态性的研究

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畜牧兽医学报 2003年第5期34卷 422-426页

作者：叶满红曹红鹤文杰李宏滨陈继兰赵桂萍中国农业科学院畜牧研究所北京100094

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性,设计特异性引物,利用聚合酶链式反应技术(PCR),扩增鸡心脏型脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因第二内含子序列;根据已经发表的鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白(A FABP)基因mRNA序列,设计特异性引物... 详细信息

根据不同物种间同一基因核苷酸序列的保守性及相似性,设计特异性引物,利用聚合酶链式反应技术(PCR),扩增鸡心脏型脂肪酸结合蛋白(H FABP)基因第二内含子序列;根据已经发表的鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白(A FABP)基因mRNA序列,设计特异性引物,扩增鸡A FABP基因第三内含子序列。选用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、PstⅠ、XmnⅠ和HindⅢ8种限制性内切酶对扩增产物分别进行单酶切,发现H FABP基因第二内含子HhaⅠPCR RFLP及A FABP基因第三内含子HinfⅠPCR RFLP。

关键词：北京油鸡矮脚鸡心脏型脂肪型脂肪酸蛋白基因多态性聚合酶链式反应特异性引物内切酶

北京油鸡线粒体D-loop区遗传多样性及系统进化研究

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中国家禽 2023年第8期45卷 24-30页

作者：张冰张剑晏志勋常枨耿爱莲王海宏刘华贵王志鹏初芹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150081 北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京市100097

为了从母系遗传的角度探讨北京油鸡的遗传多样性和系统进化,研究测定了165只北京油鸡线粒体DNA(mtDNA)D-loop区全序列,分析其遗传多样性并结合NCBI下载的43个其他鸡种序列构建了系统发育树。结果显示,北京油鸡mtDNA D-loop区全序列长度1... 详细信息

为了从母系遗传的角度探讨北京油鸡的遗传多样性和系统进化,研究测定了165只北京油鸡线粒体DNA(mtDNA)D-loop区全序列,分析其遗传多样性并结合NCBI下载的43个其他鸡种序列构建了系统发育树。结果显示,北京油鸡mtDNA D-loop区全序列长度1231~1232 bp,存在一处碱基缺失;共发现26处单核苷酸变异位点,组成了13种单倍型;核苷酸多样性为0.00427±0.00074,单倍型多样性为0.563±0.047,核苷酸平均差异数为5.258;北京油鸡13种单倍型可划分为A、B、C、E四个分支,其中C分支为优势分支,占检测个体的73.3%。结果表明,北京油鸡线粒体遗传多样性呈中等水平,保种效果较好。

关键词：北京油鸡线粒体DNA D-loop区遗传多样性系统进化

北京油鸡肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化状态检测与分析

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畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1784-1792页

作者：李金龙唐韶青赵萌王海潮徐青北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京100044 北京市畜牧兽医总站北京100029

以17周龄北京油鸡为试验材料,应用甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)方法检测肌肉和卵巢组织的基因组DNA甲基化模式和程度,进而分析肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化的差异。结果表明,应用12对选... 详细信息

以17周龄北京油鸡为试验材料,应用甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)方法检测肌肉和卵巢组织的基因组DNA甲基化模式和程度,进而分析肌肉和卵巢组织基因组DNA甲基化的差异。结果表明,应用12对选择性扩增引物共产生4 297条清晰可辨的扩增条带,平均每个个体每对引物组合可获得10~20个条带。在检测的个体中,肌肉组织的甲基化水平为35.86%,卵巢组织为31.50%,2种组织的甲基化水平差异显著(P北京油鸡体重与肌肉组织的甲基化水平存在极显著负相关(P0.05)。分离鉴定了5个组织特异性的甲基化片段。结果显示,北京油鸡肌肉和卵巢组织的基因组DNA的甲基化状态存在差异,而肌肉组织的甲基化状态对北京油鸡的体重具有重要作用。

关键词：甲基化组织体重北京油鸡 MSAP