北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达

作     者：郭俣 刘长青 陆涛峰 佟春玲 修晓娜 关伟军 马月辉 GUO Yu;LIU Chang-qing;LU Tao-feng;TONG Chun-ling;XIU Xiao-na;GUAN Wei-jun;MA Yue-hui

作者机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094 蚌埠医学院检验系 蚌埠医学院生物科学系安徽蚌埠233030 内蒙古农业大学动物科学与医学院内蒙古呼和浩特010018 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：2010年第33卷第4期

页      面：93-99页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家863计划项目(2006AA10Z198 2007AA10Z170) 国家自然科学基金项目(30671539) 安徽省省级自然科学研究项目(KJ2009B255Z) 

主　　题：北京油鸡 SMARTcDNA文库 purH基因 

摘      要：利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求。