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基于DNA指纹图谱的水牛角真伪及掺杂鉴别方法研究

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1826-1833页

作者：熊辕陈天韵张恬田娜蒋超中国中医科学院、中药资源中心、道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室北京100700

是否存在掺杂是中药鉴定的难点问题。水牛角主要以水牛角丝或水牛角粉2种形态流通于药材市场,缺乏明显的鉴定特征,存在掺杂风险。然而目前水牛角的掺杂鉴定方法缺失。为解决中药水牛角的真伪及掺杂问题,控制药材水牛角的质量,保证临床... 详细信息

是否存在掺杂是中药鉴定的难点问题。水牛角主要以水牛角丝或水牛角粉2种形态流通于药材市场,缺乏明显的鉴定特征,存在掺杂风险。然而目前水牛角的掺杂鉴定方法缺失。为解决中药水牛角的真伪及掺杂问题,控制药材水牛角的质量,保证临床用药的真实性。使用DNA指纹图谱对来自药材企业和药材市场的43批样品进行鉴定,筛选出可鉴定水牛角和牦牛角的荧光DNA指纹图谱扩增引物,利用荧光毛细管分型技术获得水牛角的DNA指纹图谱。并检测了荧光毛细管分型技术对不同掺杂比例的鉴别效果。筛选出了2对可区分水牛角和牦牛角的荧光STR分型引物16Sa和CRc,建立DNA指纹图谱鉴别方法,牦牛角16Sa迁移峰为223.4~223.9 bp、水牛角为225.5~226.1 bp,牦牛角CRc迁移峰为518.8~524.8 bp、水牛角为535.9~542.5 bp。通过迁移峰的峰高可对掺伪比例在50%以下的掺杂品进行初步定量,定量结果与掺入比例相似。该研究建立了一种简单快捷,可用于中药水牛角及其掺杂品的通用DNA指纹图谱鉴别方法,能够实现对药材水牛角鉴定的同时对掺杂品进行半定量。

关键词：水牛角掺杂 DNA指纹图谱 STR分型分子鉴别动物药

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中药材种子鉴别技术研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第4期30卷 1-11页

作者：刘志浩查良平罗丽赵玉洋李晓琳袁媛中国中医科学院中药资源中心道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室北京100700 中国药科大学中药学院南京211198 安徽中医药大学药学院合肥230012 广东药科大学中药学院广州510006

种子是中药材生产的源头。中药材种子的真伪、优劣直接影响到药材的有效性和安全性。中药材种子质量参差不齐,存在种源混杂、真伪混淆、陈种新卖、成熟度和净度低等问题。为保证中药产业高质量、可持续发展,亟需对中药材种子进行鉴别和... 详细信息

种子是中药材生产的源头。中药材种子的真伪、优劣直接影响到药材的有效性和安全性。中药材种子质量参差不齐,存在种源混杂、真伪混淆、陈种新卖、成熟度和净度低等问题。为保证中药产业高质量、可持续发展,亟需对中药材种子进行鉴别和质量评价,对中药材种子市场进行规范。种子鉴别的方法包括性状鉴别、显微鉴别、微性状鉴别、化学指纹图谱鉴别、分子鉴别及电子鼻、X射线衍射法、电化学指纹图谱鉴别、光谱成像与人工智能识别技术等新兴技术。各类鉴别方法的应用范围及其优缺点各有不同,根据中药材种子品种不同、检测场所要求不同,可选择合适的鉴别方法,以实现鉴别准确、时间和经济成本降低的目标。未来中药材种子鉴别技术发展的方向应基于各项快速发展的新兴技术,开展学科交叉融合,朝着智能化、无损化、单粒检测的方向发展,以满足现代中药产业的需求。该文对目前科研和生产中应用的种子鉴别技术进行系统总结,对不同技术的原理、适用范围和优缺点进行比较,同时对未来种子鉴别技术的发展前景进行展望,以期为中药材种子鉴别及质量评价提供参考。

关键词：中药材种子传统鉴别分子鉴别化学指纹图谱电子鼻光谱鉴别人工智能

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我国外来入侵生物福寿螺的物种鉴定

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期 384-388+398页

作者：蒋玲赵永波李天美大理大学公共卫生学院大理州血吸虫病防治研究所

福寿螺为我国外来入侵生物之一，是传播广州管圆线虫病的主要中间宿主，目前已在我国广泛扩散，并对入侵地的农林牧渔业生产、生态环境及人体健康造成严重威胁。准确、快速地鉴别福寿螺的种类是开展其入侵机制、扩散规律及种群遗传学等... 详细信息

福寿螺为我国外来入侵生物之一，是传播广州管圆线虫病的主要中间宿主，目前已在我国广泛扩散，并对入侵地的农林牧渔业生产、生态环境及人体健康造成严重威胁。准确、快速地鉴别福寿螺的种类是开展其入侵机制、扩散规律及种群遗传学等各项研究的基础，并对制定与实施防治策略有重大意义。目前福寿螺的鉴定方式主要基于传统形态学及分子生物学，其中福寿螺的分子鉴定主要基于特异性引物PCR快速鉴别技术和DNA条形码技术，本文对福寿螺的物种鉴定方式进行综述。

关键词：福寿螺物种鉴定形态学分子鉴别

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利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代

南方农业学报 2022年第10期53卷 2868-2875页

作者：吴圣进陈雪凤刘增亮张雯龙广西农业科学院微生物研究所广西南宁530007

【目的】利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代,为香菇分子辅助育种提供技术支撑。【方法】通过ISSR分析获得标识供体亲本菌株YX7两个细胞核的特异性条带,根据特异性条带序列设计SCAR引物,对菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂... 详细信息

【目的】利用SCAR分子标记鉴别香菇双单杂交后代,为香菇分子辅助育种提供技术支撑。【方法】通过ISSR分析获得标识供体亲本菌株YX7两个细胞核的特异性条带,根据特异性条带序列设计SCAR引物,对菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株进行SCAR-PCR鉴别,并采用传统镜检和拮抗测试方法进行验证。【结果】筛选出分别标识供体菌株YX7两个细胞核核型的特异性条带a和b,据此设计的SCAR引物PA和PB分别对供体菌株YX7的2个不同细胞核具有特异性扩增作用。SCAR-PCR鉴定结果显示,40个待测菌株中,27个菌株为杂合子,其中19个菌株具有a条带标识核型,8个菌株具有b条带标识核型;13个菌株为非杂合子,其中11个菌株同时具有条带a和b标识的两个核型,是菌株YX7本身,另外2个菌株两种核型均未被检测出,属于菌株808的孢子单核体。传统方法验证结果与SCAR分子标记鉴定结果完全一致。与传统方法相比,SCAR标记方法更简便高效、结果更稳定可靠,并可通过核型标识进一步将杂合子分为两组。【结论】SCAR分子标记能高效、全面和精准鉴别香菇双单杂交菌株的杂合子和非杂合子,可应用于香菇杂交分子辅助育种和遗传分析。

关键词：香菇 SCAR 双单杂交杂合子分子鉴别

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新型ISSR分子标记鉴别香菇双单杂合子

热带作物学报 2023年第3期44卷 476-483页

作者：吴圣进张芳芳陈雪凤刘增亮张雯龙广西壮族自治区农业科学院微生物研究所广西南宁530007

杂合子的鉴别是香菇杂交育种中的关键步骤,为了快速准确地鉴别香菇双单杂交后代,本研究设计一种基于区分供体亲本双核的新型ISSR分子标记技术,采用该技术对香菇野生双核菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株... 详细信息

杂合子的鉴别是香菇杂交育种中的关键步骤,为了快速准确地鉴别香菇双单杂交后代,本研究设计一种基于区分供体亲本双核的新型ISSR分子标记技术,采用该技术对香菇野生双核菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株进行鉴别,并以传统的显微观察与拮抗试验和传统ISSR分子标记技术为对照。新型ISSR分析结果表明:仅拥有供体菌株YX7一个核的特异性条带的菌株有27个,可判定为杂合子;其余13个菌株均判定为非杂合子,其中有11个菌株同时拥有供体菌株YX7两个核的特异性条带,是菌株YX7自身;有2个菌株不含供体菌株YX7两个核的任何特异性条带,属于菌株808的孢子单核体。与传统显微观察和拮抗试验方法相比,新型ISSR技术鉴定出的杂合子菌株更全面,不仅包含前者鉴定出的全部19个杂合子,还包括其无法判断的菌株6个和错判为非杂合子的菌株2个。新型ISSR技术采用单个引物就可确定全部27个杂合子菌株和13个非杂合子菌株,并能根据导入的供体细胞核类别将杂合子归为2类,而传统ISSR技术需采用4个引物才能鉴别出27个杂合子,并且不能确定剩余13个菌株为非杂合子,也不能对杂合子进行分类。综上,新型ISSR技术能更快速、全面和精准鉴别香菇双单杂交菌株的杂合子和非杂合子,可为香菇杂交选育和遗传分析提供技术支撑。

关键词：香菇新型ISSR 双单杂交杂合子分子鉴别

基于rDNA ITS序列的何首乌PCR-RFLP分子鉴别

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华南理工大学学报（自然科学版） 2009年第6期37卷 74-78,83页

作者：郑传进赵树进赵振华呙军华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广州军区广州总医院广东广州510010

对何首乌及其常见混淆品的核糖体DNA内转录间隔区（rDNAITS）序列进行了测序分析．结果表明：何首乌与其混淆品毛脉蓼、翼蓼及耳叶牛皮消ITSI区的差异率分别为6．91％、18．10％和42．20％，ITS2区的差异率分别为10．00％、19．40％和43... 详细信息

对何首乌及其常见混淆品的核糖体DNA内转录间隔区（rDNAITS）序列进行了测序分析．结果表明：何首乌与其混淆品毛脉蓼、翼蓼及耳叶牛皮消ITSI区的差异率分别为6．91％、18．10％和42．20％，ITS2区的差异率分别为10．00％、19．40％和43．90％；而何首乌种内各居群间ITS1和ITS2区的差异率分别为0．00％～2．13％和0．00％～1．03％．基于何首乌及其混淆品的rDNAITS序列的差异，找出一个位于ITS2间隔区的何首乌特征性M6I酶切位点，用M6I酶对何首乌rDNAITS序列扩增产物酶切后得到含约531bp和109bp的两片段的聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）图谱，而其混淆品的rDNAITS序列扩增产物不能被NsbI酶切，故图谱呈单一条带．利用建立的PCR．RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品．

关键词：何首乌分子鉴别核糖体DNA内转录间隔区 PCR—RFLP

基于EST-SSR的金银花分子鉴别方法研究

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药学学报 2012年第6期47卷 803-810页

作者：蒋超袁媛刘贵明黄璐琦王绪敏于军陈敏中国中医科学院中药研究所北京100700 道地中药材功能基因组北京市重点实验室北京100700 中国科学院基因组科学及信息重点实验室北京100029

利用简单有效的方法鉴定药用植物种及其变种一直是中药材鉴定首先要解决的问题。金银花是临床常用大宗中药材之一,源自忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的花蕾。为了有效利用金银花EST序列开发功能性分子标记,本文通过生物信... 详细信息

利用简单有效的方法鉴定药用植物种及其变种一直是中药材鉴定首先要解决的问题。金银花是临床常用大宗中药材之一,源自忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的花蕾。为了有效利用金银花EST序列开发功能性分子标记,本文通过生物信息学手段对本实验室保存的忍冬及其变种红白忍冬(L.japonica var.chinensis Thunb.)EST序列进行分析,共获得3 705条忍冬EST-SSRs,且平均每4.05 kb检出一个SSR(simple sequence repeat);2 818条红白忍冬EST-SSRs,平均每7.49 kb检出一个SSR。分析结果表明金银花及其变种红白忍冬主要SSR重复为二核苷酸,其次为三核苷酸,主要重复基序类型为AG/TC和GAG/TCT。通过同源比对,在忍冬及其变种中共筛选出87对重复次数具有差异的EST-SSR。选出15对碱基数差异大于6的EST-SSR进行验证,结果表明其中的13对引物在52份金银花类药用植物中具有有效扩增产物,且引物jp.ssr4、jp.ssr64及jp.ssr65可用于忍冬及其变种、山银花原植物的鉴别。

关键词： EST-SSR 忍冬金银花分子鉴别

利用rDNA的PCR-RFLP对伞滑刃属线虫群体的分子鉴别

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2005年第2期31卷 161-164页

作者：蒋立琴梁定东郑经武顾建锋杨兰英浙江大学植物保护系浙江杭州310029 宁波出入境检验检疫局检验检疫中心浙江宁波315012

应用对rDNA中ITS的PCR-RFLPs技术和方法对来自中国、日本和韩国的松树或木质包装箱中分离出来的伞滑刃属(Bursaphelenchus)6个线虫群体进行了分子鉴定.其中来自浙江镇海的松树和日本的木质包装箱中分离出的各一线虫群体被鉴定为松材线虫... 详细信息

应用对rDNA中ITS的PCR-RFLPs技术和方法对来自中国、日本和韩国的松树或木质包装箱中分离出来的伞滑刃属(Bursaphelenchus)6个线虫群体进行了分子鉴定.其中来自浙江镇海的松树和日本的木质包装箱中分离出的各一线虫群体被鉴定为松材线虫(B.xylophilus),而来自浙江富阳的松树和韩国、香港及日本的木质包装箱中的另一个群体等4群体被鉴定为拟松材线虫(B.mucronatus).本研究中选用的4种限制性内切酶(Hinf 、Hae 、Msp 、cfo )的特异性酶切位点均可以有效地鉴别松材线虫和拟松材线虫.

关键词：松材线虫拟松材线虫核糖体DNA 分子鉴别

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连翘败毒丸中原料药材的分子鉴别

药学学报 2013年第4期48卷 590-596页

作者：崔占虎蒋超李旻辉陈敏周立社袁媛内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014060 中国中医科学院中药资源中心北京100700

为研究分子标记技术在成药鉴定方面的应用,本文选用连翘败毒丸为研究对象,采用改良CTAB法提取其总DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别对psbA-trnH和rbcL两个叶绿体序列进行梯度扩增,将扩增产物与pEASYTM-T5 vec... 详细信息

为研究分子标记技术在成药鉴定方面的应用,本文选用连翘败毒丸为研究对象,采用改良CTAB法提取其总DNA,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别对psbA-trnH和rbcL两个叶绿体序列进行梯度扩增,将扩增产物与pEASYTM-T5 vector连接后,转化到大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞中,挑取单克隆,并选择阳性克隆进行测序。所得序列校正、比对后,进行BlastN比对分析,同时采用MEGA 4.0软件构建系统聚类树。结果表明,通过psbA-trnH序列分析可以鉴定出9种原料药材,rbcL序列分析可以鉴定出6种原料药材。本研究结果说明采用分子标记技术鉴定中成药原料具有一定的可行性。

关键词：中成药分子鉴别 psbA trnH rbcL