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PJ34对帕金森病小鼠黑质凋亡诱导因子核移位的影响

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中国老年学杂志 2009年第23期29卷 3081-3083页

作者：王东玉商秀丽张朝东锦州市中心医院神经内科辽宁锦州121001 中国医科大学第一临床学院神经内科

目的探讨多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺(DA)能神经元凋亡诱导因子(AIF)核移位的影响。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,2、24、72h后取中脑组织进行酪氨酸羟化酶(TH)免... 详细信息

目的探讨多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺(DA)能神经元凋亡诱导因子(AIF)核移位的影响。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,2、24、72h后取中脑组织进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫染色观察黑质DA能神经元的损害情况,AIF免疫组化染色和Western印迹方法检测AIF的核移位情况。另经PJ34预处理该模型后,对上述指标进行检测。结果PD小鼠黑质DA能神经元出现AIF核移位,PJ34预处理显著抑制AIF的核移位,减少PD小鼠黑质致密部DA能神经元的脱失现象(P<0.01)。结论AIF的核移位在PD的发病过程发挥重要作用,PJ34通过抑制黑质DA能神经元AIF的核移位对PD小鼠产生保护作用。

关键词：帕金森病 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶凋亡诱导因子 PJ34

hTR反义寡核苷酸对结直肠癌SW480细胞的凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

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第三军医大学学报 2010年第22期32卷 2400-2403页

作者：李靓李洋王继见重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400010

目的探讨封闭人端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(human telomerase RNA antisense oligonucleotide,hTR ASODN)对结直肠癌SW480细胞凋亡及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)表达的影响。方法通过脂质体将hTR ASODN1次/d,连续3d转染入人结直肠癌SW480细胞,以未加ASODN的脂质体空白组及脂质体转染的正义组为对照。荧光显微镜观察转染情况,流式细胞仪测定转染后SW480细胞的凋亡率,RT-PCR法测定转染后AIF的表达情况。结果 hTR ASODN转染细胞后,倒置显微镜下观察各组细胞,细胞内有绿色荧光均匀分布表示转染良好。流式细胞仪测定转染24、48、72h后,各实验组凋亡率分别为:空白组(3.07±0.11)%、(3.71±0.63)%、(4.23±0.41)%,正义组(4.28±0.41)%、(4.49±0.56)%、(5.13±0.56)%,反义组(13.11±0.32)%、(22.04±0.21)%、(16.71±0.82)%,反义组分别与空白组、正义组比较,差异有统计学意义(P凋亡、抗肿瘤作用。

关键词： hTR 反义寡核苷酸结直肠癌凋亡凋亡诱导因子

营养剥夺诱导髓核细胞凋亡诱导因子核转位的研究

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中华实验外科杂志 2014年第7期31卷 1434-1436页

作者：陆焱刘杰王建解放军第187医院骨科海口571159 沈阳军区空军沈翔705医院急诊科第三军医大学新桥医院骨科

目的通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子（AIF）的表达及细胞器定位。方法体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置入正常环境[杜尔贝科改良型低糖培养基（DMEM/L）培养基、10%胎牛血清、21%... 详细信息

目的通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子（AIF）的表达及细胞器定位。方法体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置入正常环境[杜尔贝科改良型低糖培养基（DMEM/L）培养基、10%胎牛血清、21%O2]和营养剥夺环境（DMEM无糖培养基、无血清、1%O2）培养0、24、48、72 h后,采用细胞免疫荧光染色及Western blot检测AIF蛋白表达水平及细胞器定位,流式细胞仪检测细胞存亡率及线粒体膜电位,酶标仪检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspse）活性。结果细胞活性检测显示实验组活细胞比例分别为（82.0±2.4）%、（61.0±3.1）%、（42.0±2.9）%,较对照组的98%明显降低（P〈0.05）,实验组细胞凋亡比例分别为（12.0±1.2）%、（32.0±1.6）%、（49.0±2.1）%,与对照组的2%比较明显增高（P〈0.05）,线粒体膜电位检测结果显示实验组细胞线粒体膜电位降低,发橙色荧光的细胞比例分别为（80.22±2.31）%、（61.20±1.52）%、（15.01±2.91）%,均显著低于正常对照组[（93.00±3.22）%,P〈0.05],细胞免疫荧光染色及Western blot显示对照组细胞AIF蛋白主要位于线粒体内,而实验组细胞AIF从线粒体释放并转移至细胞核内,同时髓核细胞出现非典型性凋亡,酶标仪检测发现Caspase酶活性无明显变化（P〈0.05）。结论营养剥夺可能通过降低线粒体膜定位,增加其通透性导致AIF释放并转位至细胞核,导致髓核细胞出现非典型性凋亡。

关键词：髓核细胞凋亡诱导因子营养剥夺核转位

乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子表达及凋亡细胞数的影响

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临床神经病学杂志 2012年第1期25卷 40-42页

作者：刘庆杰白宏英刘春岭曾志磊李楠郑州大学第二附属医院神经内科 450014

目的探讨乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子(AIF)表达及凋亡细胞数的影响。方法 54只SD大鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注组(对照组)、脑缺血-再灌注+乌司他丁治疗组(治疗组)。采用大脑中动脉线栓法制作大... 详细信息

目的探讨乌司他丁对脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、凋亡诱导因子(AIF)表达及凋亡细胞数的影响。方法 54只SD大鼠随机分成假手术组、脑缺血-再灌注组(对照组)、脑缺血-再灌注+乌司他丁治疗组(治疗组)。采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。治疗组再灌注时,腹腔注射乌司他丁2万U/kg。采用免疫组化法检测大鼠脑组织细胞色素C表达,采用逆转录(RT)-PCR法检测大鼠脑组织AIF表达,采用原位末端标记法检测大鼠脑组织凋亡细胞数。结果对照组和治疗组大鼠脑组织皮质区细胞色素C、AIF的表达及凋亡细胞数均明显高于假手术组(均P凋亡细胞数明显低于对照组(均P凋亡可能与下调脑缺血-再灌注大鼠脑组织细胞色素C、AIF的表达,减轻线粒体损伤,抑制线粒体通路的凋亡途径有关。

关键词：乌司他丁脑缺血-再灌注细胞色素C 凋亡诱导因子凋亡细胞

铜绿假单胞菌上清液诱导J774细胞凋亡过程中凋亡诱导因子的表达

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山东医药 2010年第41期50卷 25-27页

作者：李颖柴文戍刘砚宁学聪辽宁医学院附属第一医院辽宁锦州121001

目的探讨凋亡诱导因子(AIF)在铜绿假单胞菌(PA)上清液诱导J774细胞凋亡中的表达。方法选用J774细胞作为PA上清液感染的体外细胞模型,使细胞与15%的PA上清液混合,37℃水浴中培养3、6、9 h,采用G im sa染色技术、荧光染色技术、流式双染... 详细信息

目的探讨凋亡诱导因子(AIF)在铜绿假单胞菌(PA)上清液诱导J774细胞凋亡中的表达。方法选用J774细胞作为PA上清液感染的体外细胞模型,使细胞与15%的PA上清液混合,37℃水浴中培养3、6、9 h,采用G im sa染色技术、荧光染色技术、流式双染技术进行J774细胞凋亡检测,W estern b lot法测定AIF含量。结果 PA上清液与细胞培养3 h即有少数J774细胞发生凋亡,随时间延长凋亡细胞数量逐渐增多;PA上清液刺激3 h后AIF开始出现低量表达,6、9 h时AIF表达更加明显。结论 PA上清液可诱导J774巨噬细胞凋亡,其作用具有时间依赖性;AIF蛋白与PA上清液诱导巨噬细胞凋亡明显相关。

关键词：假单胞菌,铜绿细胞凋亡线粒体凋亡诱导因子

人截短型凋亡诱导因子对HeLa细胞的促凋亡作用

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第四军医大学学报 2007年第7期28卷 577-580页

作者：张巍张勇孟艳玲温伟红薛茜任君琳杨安钢第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033

目的:观察人截短型凋亡诱导因子(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号,FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其... 详细信息

目的:观察人截短型凋亡诱导因子(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号,FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3和pIRES2-EGFP真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察,MTT检测等方法检测该基因在转染细胞中的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性.结果:经酶切鉴定与测序证实,带有AIF△1-400的真核表达载体构建成功.瞬时转染后出现细胞形态变化,随转染时间的延长转染细胞数减少,荧光变弱.经间接免疫荧光检测可观察到截短型AIF蛋白位于细胞质中,部分已位于细胞核内.MTT法检测发现AIF△1-400转染后对细胞生长有明显的抑制作用.结论:AIF△1-400仍然具有诱导HeLa细胞凋亡的作用.

关键词：凋亡诱导因子 HeLa细胞细胞凋亡

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达及其与神经细胞凋亡的关系

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中国老年学杂志 2007年第20期27卷 1955-1957页

作者：冯建利姚博闫鹏杜怡峰山东大学山东省立医院神经内科山东济南250021

目的观察大鼠脑缺血再灌注(I/R)后凋亡诱导因子(AIF)的表达,探讨I/R脑区AIF变化与神经细胞凋亡的关系。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术... 详细信息

目的观察大鼠脑缺血再灌注(I/R)后凋亡诱导因子(AIF)的表达,探讨I/R脑区AIF变化与神经细胞凋亡的关系。方法应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,TTC染色观察梗死灶的形成,应用原位末端标记(TUNEL)和免疫组化技术分别观察大鼠假手术组、MCAO90min再灌注0、3、6、12、24、48、72h时额顶叶皮层缺血脑区AIF表达及神经细胞凋亡程度的变化。结果脑I/R24h,TTC染色见明显的梗死灶形成。除缺血90min凋亡细胞数量与假手术组比较无统计学意义外,其余各指标与假手术组相比均有统计学意义(P凋亡细胞数量的差异无统计学意义外,其余各组间差异均有统计学意义(P诱导AIF阳性细胞表达增加,并引起神经细胞凋亡。

关键词：脑缺血细胞凋亡凋亡诱导因子

他罗利姆对癫痫大鼠海马氧化应激、凋亡诱导因子及神经元凋亡的影响

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中国老年学杂志 2013年第19期33卷 4779-4782页

作者：刘金之薛萍张涛李晓林杨倩倩林艳王爱华山东大学附属千佛山医院保健神经内科山东济南250014 聊城市人民医院神经内科山东大学附属千佛山医院神经内科

目的研究免疫抑制剂他罗利姆(FK506)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)及线粒体膜电位、凋亡诱导因子(AIF)的影响。方法 (1)将126只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、对照组各42只。... 详细信息

目的研究免疫抑制剂他罗利姆(FK506)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)及线粒体膜电位、凋亡诱导因子(AIF)的影响。方法 (1)将126只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、对照组各42只。建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫模型,FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24、1 h 2次腹腔注射FK506,采用比色法和羟胺法分别检测海马组织中NO、MDA含量、NOS活性;采用免疫组化法检测海马组织神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;尼氏染色观察神经元形态变化。(2)24只Wistar大鼠随机分为癫痫组、FK506干预组、生理盐水干预组、对照组,每组6只。FK506干预组在注射匹鲁卡品之前24 h、1 h 2次腹腔注射FK506,生理盐水干预组注射等体积生理盐水;于癫痫发作24 h后处死,应用流式细胞仪测定线粒体内罗丹明123的荧光强度和线粒体的大小;Western印迹检测大鼠海马线粒体和细胞核AIF的水平。结果与癫痫组相比,FK506干预组NO、MDA含量、NOS活性明显降低(P均<0.01);海马nNOS、iNOS的表达降低(P<0.01);线粒体膜电位升高(P<0.05);海马线粒体AIF水平显著增高,而细胞核AIF水平显著降低(P均<0.05);海马存活神经元增加。结论 FK506可能通过抑制NO引起的氧化应激损伤,稳定线粒体膜电位,抑制AIF的易位,发挥脑保护作用。

关键词：他罗利姆癫痫持续状态一氧化氮合酶线粒体膜电位凋亡诱导因子

乙醇对脑缺血再灌注大鼠海马凋亡诱导因子和胱天蛋白酶-3表达的影响

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国际脑血管病杂志 2013年第2期21卷 102-107页

作者：李健刘志辉张培王彬潍坊医学院临床医学院神经精神病学教研室 261031

目的探讨乙醇对脑缺血再灌注大鼠海马区凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）和胱天蛋白酶．3表达的影响。方法68只健康成年雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组（4只）、生理盐水对照组以及小剂量（1．0g／kg）、中剂量（1．5... 详细信息

目的探讨乙醇对脑缺血再灌注大鼠海马区凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）和胱天蛋白酶．3表达的影响。方法68只健康成年雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组（4只）、生理盐水对照组以及小剂量（1．0g／kg）、中剂量（1．5g／kg）和大剂量（2．0g／kg）乙醇组，生理盐水对照组和各剂量乙醇组再分别按干预时间点分为缺血再灌注0h、1h、2h和3h亚组（每组4只）。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。各剂量乙醇组和生理盐水对照组在缺血2h再灌注0h、1h、2h和3h时腹腔注射相应剂量乙醇或等体积生理盐水。脑缺血2h再灌注24h时采用行为学评分评价大鼠神经功能缺损。采用免疫组织化学法检测脑缺血2h再灌注24h时缺血侧海马区AIF和胱天蛋白酶．3表达。结果行为学评价显示，假手术组神经功能缺损评分均为0分；不同剂量乙醇组神经功能缺损评分均显著性低于相同干预时间点的生理盐水对照组（P均=0．000），且不同剂量乙醇组相同干预时间点之间均存在显著性差异（P均=0．000），大剂量乙醇组均最低；相同剂量乙醇组不同干预时间点之间无显著性差异（P均〉0．05）。免疫组织化学显示，假手术组AIF和胱天蛋白酶-3阳性细胞数量分别为（17．21±2．86）个和（20．60±4．39）个，均显著性少于缺血再灌注0h时的生理盐水对照组和各剂量乙醇组（P均=0．000）；不同剂量乙醇组海马区AIF和胱天蛋白酶-3阳性细胞数量均显著性少于相同干预时间点的生理盐水对照组（P均=0．000），且不同剂量乙醇组相同干预时间点之间均存在显著性差异（P均=0．000），大剂量乙醇组均最少；相同剂量乙醇组不同干预时间点之间均无显著性差异（P均〉0．05）。结论乙醇对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织具有保护作用，其机制可能与抑制AIF和胱天蛋白酶-3表达有关。

关键词：脑缺血乙醇凋亡诱导因子胱天蛋白酶3 海马神经保护药疾病模型动物大鼠