营养剥夺诱导髓核细胞凋亡诱导因子核转位的研究

作     者：陆焱 刘杰 王建 Lu Yan;Liu Jie;Wang Jian

作者机构：解放军第187医院骨科海口571159 沈阳军区空军沈翔705医院急诊科 第三军医大学新桥医院骨科 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2014年第31卷第7期

页      面：1434-1436页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主　　题：髓核细胞 凋亡诱导因子 营养剥夺 核转位 

摘      要：目的 通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子（AIF）的表达及细胞器定位。方法 体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置入正常环境[杜尔贝科改良型低糖培养基（DMEM/L）培养基、10%胎牛血清、21%O2]和营养剥夺环境（DMEM无糖培养基、无血清、1%O2）培养0、24、48、72 h后,采用细胞免疫荧光染色及Western blot检测AIF蛋白表达水平及细胞器定位,流式细胞仪检测细胞存亡率及线粒体膜电位,酶标仪检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspse）活性。结果 细胞活性检测显示实验组活细胞比例分别为（82.0±2.4）%、（61.0±3.1）%、（42.0±2.9）%,较对照组的98%明显降低（P〈0.05）,实验组细胞凋亡比例分别为（12.0±1.2）%、（32.0±1.6）%、（49.0±2.1）%,与对照组的2%比较明显增高（P〈0.05）,线粒体膜电位检测结果显示实验组细胞线粒体膜电位降低,发橙色荧光的细胞比例分别为（80.22±2.31）%、（61.20±1.52）%、（15.01±2.91）%,均显著低于正常对照组[（93.00±3.22）%,P〈0.05],细胞免疫荧光染色及Western blot显示对照组细胞AIF蛋白主要位于线粒体内,而实验组细胞AIF从线粒体释放并转移至细胞核内,同时髓核细胞出现非典型性凋亡,酶标仪检测发现Caspase酶活性无明显变化（P〈0.05）。结论 营养剥夺可能通过降低线粒体膜定位,增加其通透性导致AIF释放并转位至细胞核,导致髓核细胞出现非典型性凋亡。