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关木通过大鼠肾脏和肾上腺的毒效应及其可能机制

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关木通过大鼠肾脏和肾上腺的毒效应及其可能机制

作者：王迎春大连医科大学

学位级别：硕士

前言关木通(Aristolochia manshuriensis Kom,AMK),为马兜铃科(Aristolochiaceae)马兜铃属(Aristolochia)植物的中药材,具有清心火、利小便、通经下乳等功效,是常用中药。马兜铃属草药的慢性肾损害于1993年由比利时医生Vanhetweghem首... 详细信息

前言关木通(Aristolochia manshuriensis Kom,AMK),为马兜铃科(Aristolochiaceae)马兜铃属(Aristolochia)植物的中药材,具有清心火、利小便、通经下乳等功效,是常用中药。马兜铃属草药的慢性肾损害于1993年由比利时医生Vanhetweghem首次报道。其后,法国报道4例服用含广防己减肥药者发生的肾损害,英国两例女性患者服用含有关木通的中药治疗湿疹2～4年后,发生肾功能衰竭。相继西班牙、美国、英国、日本、奥地利、埃及等国家禁止销售和使用这类中药。当时国际上称这种慢性肾损害为“中草药肾病”(Chinese Herbs Nephropathy, CHN)。国内外学者经过大量病因学研究认为其肾毒性是该属植物主要成分马兜铃酸(Aristolochic Acid, AA)所致,我国学者提出应称之为马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy,AAN),得到国内外一些主要研究者的认同。根据研究结果表明,AA还具有较强的致突变性和致癌性。但含AA植物对内分泌系统损害的研究较少,已知肾上腺皮质是内分泌器官中对化学物质作用最敏感的腺体,分泌的肾上腺皮质激素是机体重要生命活动所必需的激素。但含AA植物对大鼠肾上腺是否有毒效应,与肾损害之间的关系及其相关机制尚未见报道。本实验研究采用整体动物实验系统,建立我国临床应用最广泛的AMK所致大鼠急性肾损害模型,观察AMK对大鼠肾上腺是否有毒效应及其与肾损害之间的关系,并探讨其可能机制。方法健康成年Sprague-Dawley (SD)雌性大鼠36只,按体重随机分为6组:即给药1 d组,3 d组,5 d组及3个相应对照组。按中药

关键词：关木通肾上腺肾毒性 8-羟基脱氧鸟苷诱生型一氧化氮合酶

反相HPLC法测定不同产地关木通中马兜铃酸A的含量

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中国中药杂志 2003年第5期28卷 465-467页

作者：由丽双王智民姜旭王维皓中国中医研究院中药研究所北京100700

关木通为马兜铃科植物东北马兜铃Aris-tolochia manshuriensis Kom的干燥藤茎。近年来，关于关木通能够引起肾损害的问题在国际上争议较大，并受到产业界、学术界、政府各个方面的极大关注。为了去除关木通中的马兜铃酸类有毒成分，利... 详细信息

关木通为马兜铃科植物东北马兜铃Aris-tolochia manshuriensis Kom的干燥藤茎。近年来，关于关木通能够引起肾损害的问题在国际上争议较大，并受到产业界、学术界、政府各个方面的极大关注。为了去除关木通中的马兜铃酸类有毒成分，利用炮制手段达到“去毒存效”的目的，我们首先应明确其含量。文献中测定马兜铃酸A的含量有TLC扫描法，测定马兜铃酸的含量有HPLC法，测定马兜铃酸总酸的方法有紫外分光光度法。本文将报道以RP-HPLC法测定不同产地关木通中马兜铃酸A的含量。

关键词：关木通中药材马兜铃酸A 含量测定反相高效液相色谱法

配伍滋阴养血中药对关木通马兜铃酸A含量的影响

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辽宁中医杂志 2009年第10期36卷 1766-1767页

作者：全世建丁洁王红丹广州中医药大学广东广州510405

目的:通过反相高效液相色谱法观察比较关木通配伍不同滋阴养血中药后马兜铃酸A的变化趋势,探讨各中药组配伍对马兜铃酸A的影响。方法:以DiamonsilTM(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(体积比74∶24∶1)为流动相,... 详细信息

目的:通过反相高效液相色谱法观察比较关木通配伍不同滋阴养血中药后马兜铃酸A的变化趋势,探讨各中药组配伍对马兜铃酸A的影响。方法:以DiamonsilTM(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-水-冰醋酸(体积比74∶24∶1)为流动相,检测波长315nm。结果:与关木通组相比,各配伍组马兜铃酸A含量均有降低;其中配伍当归组,以3∶1比例配伍马兜铃酸A含量最低。结论:在方剂配伍理论指导下,通过合理配伍降低关木通的毒性是可行的。复方配伍减毒理论有一定的科学依据。

关键词：关木通配伍马兜铃酸A

雷公藤、关木通、益母草对大鼠肾毒性的比较研究

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中药药理与临床 2005年第2期21卷 26-28页

作者：孙蓉吴旭东刘建伟孙玲吕丽莉山东省中医药研究院济南250014 中国药科大学新药筛选中心南京210038 齐鲁医院济南250012 山东省医药工业研究所济南250013

目的比较观察雷公藤、关木通、益母草对大鼠的肾毒性。方法雷公藤、关木通、益母草给大鼠连续灌胃90天,观察动物的一般情况、尿常规、尿微量蛋白、肝肾功能、肾脏病理形态学改变。剩余1/3大鼠进行停药30天恢复期观察。结果雷公藤、关木... 详细信息

目的比较观察雷公藤、关木通、益母草对大鼠的肾毒性。方法雷公藤、关木通、益母草给大鼠连续灌胃90天,观察动物的一般情况、尿常规、尿微量蛋白、肝肾功能、肾脏病理形态学改变。剩余1/3大鼠进行停药30天恢复期观察。结果雷公藤、关木通、益母草三种药物都会造成不同程度的尿常规异常、尿微量蛋白异常和肾功能改变,停药后肾功能指标有的可复,有的不可恢复。雷公藤、关木通、益母草三种药物的大剂量都会造成不同程度的肾脏形态学改变,但损害部位有所不同。停药后,肾实质损伤多数为可逆性,间质纤维化难于恢复。结论雷公藤、关木通、益母草一定剂量均可以造成不同性质、不同程度的大鼠实验性肾损伤,有必要对益母草“非马兜铃酸性”肾脏毒性作用机制进行深入的系统研究。

关键词：益母草雷公藤关木通肾毒性大鼠病理形态学改变不同程度毒性作用机制尿微量蛋白尿常规异常肾功能改变肾功能指标肾实质损伤间质纤维化比较观察肝肾功能蛋白异常损害部位系统研究停药后肾脏恢复期大剂量

UPLC-TQD-MS法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制

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中成药 2018年第11期40卷 2576-2579页

作者：邵珠莹潘金火张月婵王建春严国俊南京中医药大学药学院江苏南京210023 南京中医药大学附属张家港医院江苏省企业研究生工作站江苏张家港215600

目的超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联(UPLC-TQD-MS)法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制。方法关木通配伍干姜的分析采用ACQUITYUPLC BEHC8色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm);流动相1 mmol/L乙酸铵(含0. 1%乙酸)-甲醇;体积流量0. 2 m L... 详细信息

目的超高效液相色谱-三重四级杆质谱串联(UPLC-TQD-MS)法探讨关木通配伍干姜减毒存效机制。方法关木通配伍干姜的分析采用ACQUITYUPLC BEHC8色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm);流动相1 mmol/L乙酸铵(含0. 1%乙酸)-甲醇;体积流量0. 2 m L/min;柱温30℃;采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反映监测模式(NRM)进行质谱分析。结果马兜铃酸A在0. 809~51. 750μg (r=0. 999 5)的范围内线性关系良好,平均加样回收率为98. 18%,RSD为1. 4%。关木通-干姜(1∶2)配伍使用时关木通中马兜铃酸A显著降低,降低率达到87. 79%,对大鼠的利尿作用没有变化,对大鼠急性肾功能损伤程度明显低于关木通生品组。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于关木通配伍干姜的质量控制。

关键词：关木通干姜 UPLC-TQD-MS 辛开苦降减毒存效

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不同炮制方法对关木通减毒存效作用的比较

中国实验方剂学杂志 2012年第10期18卷 149-152页

作者：张春红曹蕊李虔全张娜张连学李旻辉内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014060 吉林农业大学中药材学院长春130118

目的:比较各种炮制方法对关木通减毒存效作用,选择最佳的关木通炮制方法。方法:以关木通生品及各炮制品中马兜铃酸A、齐墩果酸及常春藤皂苷元含量为指标,比较了5种炮制方法(醋炙、蜜炙、姜炙、碱制、盐炙)减毒存效效果。结果:生品、醋... 详细信息

目的:比较各种炮制方法对关木通减毒存效作用,选择最佳的关木通炮制方法。方法:以关木通生品及各炮制品中马兜铃酸A、齐墩果酸及常春藤皂苷元含量为指标,比较了5种炮制方法(醋炙、蜜炙、姜炙、碱制、盐炙)减毒存效效果。结果:生品、醋炙品、蜜炙品、姜炙品、碱制品、盐炙品中马兜铃酸A含量分别为0.27%,0.13%,0.15%,0.20%,0.14%,0.18%;齐墩果酸含量分别为0.21%,0.15%,0.20%,0.13%,0.01%,0.01%;常春藤皂苷元含量分别为0.11%,0.08%,0.09%,0.07%,0.01%,0.01%。结论:关木通最佳减毒存效炮制方法为蜜炙法。

关键词：炮制关木通减毒存效

茶多酚对关木通所致小鼠肾脏损伤及锌、铜、镁含量的影响

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中国职业医学 2005年第3期32卷 27-29页

作者：陈贵良刘惠茹姚林张艳淑华北煤炭医学院预防实验动物中心河北唐山063000 华北煤炭医学院附属医院 063000

目的探讨关木通染毒对小鼠肾脏锌、铜、镁含量的影响及茶多酚的拮抗作用。方法将60只昆明小鼠随机分为:正常对照组、关木通染毒组、茶多酚(TP)处理TP1、TP2、TP3剂量组。用关木通给小鼠连续灌胃染毒,同时用茶多酚进行干预。合计给药25d... 详细信息

目的探讨关木通染毒对小鼠肾脏锌、铜、镁含量的影响及茶多酚的拮抗作用。方法将60只昆明小鼠随机分为:正常对照组、关木通染毒组、茶多酚(TP)处理TP1、TP2、TP3剂量组。用关木通给小鼠连续灌胃染毒,同时用茶多酚进行干预。合计给药25d后,称体重,取肾脏称重,并测定微量元素锌、铜、镁含量。结果小鼠体重、肾重:关木通组与对照组比较显著下降(P关木通组与对照组比较显著上升(P关木通组与对照组比较显著下降(P关木通对肾脏造成的微量元素失衡并对关木通所致肾损伤有一定的保护作用,且存在剂量效应关系。

关键词：茶多酚关木通肾脏损伤锌铜镁

小蓟饮子及其配伍对关木通肾毒性的减毒作用及机理研究

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小蓟饮子及其配伍对关木通肾毒性的减毒作用及机理研究

作者：林玲湖北中医学院

学位级别：硕士

目的：通过体内外实验，研究小蓟饮子及其配伍对关木通肾毒性的减毒配伍途径及可能的减毒机理。方法：体内实验将大鼠随机分为7个组，分别给予生理盐水、关木通水煎液、小蓟饮子水煎液、关木通与小蓟饮子中君、臣、佐、使不同配伍... 详细信息

目的：通过体内外实验，研究小蓟饮子及其配伍对关木通肾毒性的减毒配伍途径及可能的减毒机理。方法：体内实验将大鼠随机分为7个组，分别给予生理盐水、关木通水煎液、小蓟饮子水煎液、关木通与小蓟饮子中君、臣、佐、使不同配伍的水煎液灌胃，3周后，观察各组大鼠的一般情况，测定相关肾功能指标并对肾组织形态学进行观察。体外实验 1对关木通对照组、小蓟饮子组、体内实验可能筛选出的有效减毒配伍组，用高效液相色谱法测定各组中马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)的含量。根据关木通对照组中AAI的浓度，分别配制与之浓度相一致的各组实验药液。 2应用体外细胞培养技术，进行人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的培养。 3建立不同浓度关木通(按其中所含AAⅠ计算)所导致的HK-2细胞凋亡模型，并确定一理想浓度进行减毒机理研究。 4各组药液分别加入体外培养好的HK-2细胞中。每隔4小时观察细胞形态改变，24小时后于倒置显微镜下观察并照相。 5分组处理24小时后，流式细胞仪检测，分析凋亡细胞比例。 6分组处理24小时后，用ELIsA试剂盒检测细胞上清液中转化生长因子β1(TGFβ1)的表达情况。结果：体内实验 1各组大鼠的一般情况小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组大鼠的一般情况，比单纯关木通组有明显改善。 2大鼠相关肾功能比较结果小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组的血BUN、Scr与关木通组比较明显降低(P＜0.01)。 3大鼠肾组织切片在光镜和电镜下的观察结果分别在光镜和电镜下观察各组大鼠肾组织切片，可见正常对照组的肾小球、肾小管及肾间质未见明显异常，其余各组有不同程度的损伤，但小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组的损伤程度明显小于关木通组、关木通+佐药组及关木通+使药组。体外实验 1马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)的含量结果采用高效液相色谱法检测关木通组、小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组的AAⅠ的含量分别为0.6034mg／ml，0.1 06 ***／ml，0.11 19mg／ml，0.1600mg／ml。 2 HK-2细胞体外培养结果经传代培养后的HK-2细胞，一般24小时全部贴壁，纯度极高，生长迅速，很快融合成片，密集时可重叠生长，3-5天即可进行传代培养。细胞培养成功且符合实验要求。 3 HK-2细胞形态学观察结果在倒置显微镜下观察，正常对照组HK-2细胞为卵圆形或多边形贴壁细胞，细胞间连接紧密，成片生长。小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组可见细胞轮廓清晰，细胞折光度增强，细胞变小、变圆。关木通组可见到大多数细胞明显缩小变圆，与周围细胞脱离，细胞膜仍保持完整，但表面有“发泡”现象，部分细胞漂浮于培养液中。 4 HK-2细胞凋亡比例结果用流式细胞仪检测分析凋亡细胞比例发现小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组的HK-2细胞凋亡率低于单纯的关木通组(P＜0.05)。 5细胞上清液中TGFβ1的表达结果用ELIsA试剂盒检测TGFβ1的表达情况发现小蓟饮子组、关木通+君药组、关木通+臣药组的细胞上清液中TGFβ1的分泌水平低于单纯关木通组(P＜0.01)。结论：本研究表明： 1小蓟饮子全方及小蓟饮子中的君药、臣药有减轻关木通肾毒性的作用;2小蓟饮子全方及小蓟饮子中的君药、臣药能减少关木通中马兜铃酸Ⅰ的含量;3小蓟饮子全方及小蓟饮子中的君药、臣药对关木通诱导HK-2细胞的凋亡及TGFβ1的分泌水平有一定的抑制作用。小蓟饮子全方及小蓟饮子中君药、臣药除通过降低关木通中马兜铃酸Ⅰ的含量而达到减轻关木通肾毒性的作用外，本身也能通过抑制HK-2细胞的凋亡及TGFβ1的分泌水平而达到减毒的作用。

关键词：配伍关木通肾毒性研究小蓟饮子

导赤散中不同配伍对关木通肾毒性影响的实验研究

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导赤散中不同配伍对关木通肾毒性影响的实验研究

作者：杨蕾黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

近年来，关木通肾毒性方面的研究日益受到众多研究者的重视，并在不同方面取得了长足的进展。不同的剂量和配伍关系能够明显影响中药毒性的大小，关木通肾毒性也与其使用剂量和配伍有密切关系。本项目通过动物实验的方法，以小鼠生存时... 详细信息

近年来，关木通肾毒性方面的研究日益受到众多研究者的重视，并在不同方面取得了长足的进展。不同的剂量和配伍关系能够明显影响中药毒性的大小，关木通肾毒性也与其使用剂量和配伍有密切关系。本项目通过动物实验的方法，以小鼠生存时间、肾功能变化和肾脏组织病理学检查为观测指标，观察不同剂量关木通和导赤散中不同药物与其配伍后对关木通肾毒性的影响。结果表明：关木通肾毒性随其使用剂量的增加而增大;关木通与生地、竹叶配伍后，能明显改善肾脏功能及肾脏组织损害情况;大剂量甘草可能对关木通的肾毒性有协同作用。因而，认为临床使用关木通时应严格控制使用剂量，在使用导赤散时应以生地为君，适当减少关木通和甘草的用量，对于含关木通的其它方剂当适当加用养阴之品。本研究从实验角度验证了中药配伍对其毒性影响的重要作用，为临床合理用药提供科学的参考依据。

关键词：关木通导赤散配伍肾毒性