检索结果-南通市图书馆

保幼激素ⅲ对三带喙库蚊滞育发生期间卵巢滤泡和体内RNA变化的影响

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国媒介生物学及控制杂志 1998年第3期9卷 161-164页

作者：董言德薛瑞德赵彤言姜晓舜尤洪涛军事医学科学院微生物流行病研究所

目的：探索保幼激素ⅲ（ＪＨ３）对滞育三带喙库蚊卵巢滤泡和体内ＲＮＡ变化的影响。方法：短光照和低温联合作用导致三带喙库蚊滞育后，用２ｐｐｍ０．５ｕｌ或３ｐｐｍ０．５ｕｌ／蚊外源ＪＨ３点滴处理，观察卵巢滤泡发育情况，并测... 详细信息

目的：探索保幼激素ⅲ（ＪＨ３）对滞育三带喙库蚊卵巢滤泡和体内ＲＮＡ变化的影响。方法：短光照和低温联合作用导致三带喙库蚊滞育后，用２ｐｐｍ０．５ｕｌ或３ｐｐｍ０．５ｕｌ／蚊外源ＪＨ３点滴处理，观察卵巢滤泡发育情况，并测定蚊体内ＲＮＡ和卵巢内蛋白质含量的变化。结果：低温和短光照引起三带喙库蚊滞育后，卵巢滤泡发育受到抑制，体内ＲＮＡ的含量明显减少，ＪＨ３处理可诱导部分滞育的三带喙库蚊转入发育状态，解除滞育的个体卵巢第一滤泡增大，体内ＲＮＡ含量增加，但对卵巢蛋白的含量没有影响。结论：ＪＨ３可诱导滞育三带喙库蚊卵巢发育，体内ＲＮＡ合成增加。

关键词：三带喙库蚊滞育保幼激素ⅲ RNA 卵巢

饲养材料和保幼激素ⅲ对门源蝠蛾幼虫生长发育的影响及通径分析

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西南农业学报 2023年第7期36卷 1562-1572页

作者：王涛李秀璋陈建博唐楚煜梁静李玉玲青海大学畜牧兽医科学院西宁810016

【目的】探究饲养材料和保幼激素ⅲ(Juvenile hormoneⅢ,JHIII)对门源蝠蛾(Hepialus menyuanicus)幼虫生长发育的影响,并用通径分析明确饲养材料营养物质和JHIII对幼虫生长发育的直接和间接关系。【方法】以刚蜕皮的3龄幼虫为研究对象,... 详细信息

【目的】探究饲养材料和保幼激素ⅲ(Juvenile hormoneⅢ,JHIII)对门源蝠蛾(Hepialus menyuanicus)幼虫生长发育的影响,并用通径分析明确饲养材料营养物质和JHIII对幼虫生长发育的直接和间接关系。【方法】以刚蜕皮的3龄幼虫为研究对象,采用双因素试验设计,使用4种饲养材料[J:蕨麻(Potentilla anserina)、H:胡萝卜(Daucus carota)、Z:珠芽蓼(Polygonum viviparum)和D:大黄(Rheum palmatum)]和3个JHIII滴度水平(B1:13.32μg/g、B2:16.56μg/g和B3:22.76μg/g)对幼虫进行饲养(50 d),分析饲养材料和JHIII对幼虫生长发育(头宽、体长、体重、存活率)的影响,进一步分析饲养材料营养物质(粗蛋白、粗纤维、可溶性糖、粗灰分、水分、碳水水合物)与幼虫生长发育的相关性,并进行回归分析和通径分析。【结果】饲养材料和JHIII都能显著影响幼虫的生长发育且具有显著的互作效应(P幼虫头宽、体长、体重和存活率的直接作用最大(P=-2.56,P=-1.89,P=-3.66,P=2.36);粗蛋白对头宽和体长的间接促进作用最大(P=3.99,P=3.79),可溶性糖对体重的间接促进作用最大(P=5.40),粗灰分对存活率的间接抑制作用最大(P=-5.14),且粗蛋白、可溶性糖、粗灰分均通过JHIII对头宽、体长、体重、存活率的间接作用最大(P=2.23,P=1.64,P=2.93,P=-2.86)。【结论】本研究初步发现了饲养材料影响幼虫生长发育的简单机制。JHIII是幼虫生长发育的直接影响因子,饲养材料的营养物质是间接因子并通过影响JHIII滴度的变化来影响幼虫的生长发育,导致幼虫生长发育不一致,其中粗蛋白、可溶性糖、粗灰分通过抑制JHIII滴度分别促进幼虫头宽和体长生长、促进体重发育、降低幼虫存活率。研究结果为门源蝠蛾的人工驯化和继代饲养提供科学参考。

关键词：门源蝠蛾保幼激素ⅲ 营养物质生长发育

保幼激素和20-羟基蜕皮酮分别上调棉铃虫不同脂肪酶的表达维持血淋巴游离脂肪酸稳态

维普期刊数据库

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

保幼激素和20-羟基蜕皮酮分别上调棉铃虫不同脂肪酶的表达维持血...

作者：闫俏山东大学

学位级别：硕士

研究背景及科学问题:游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)是动物体内重要的代谢物质,参与了氧化供能,脂质合成以及信号转导。动物体内的游离脂肪酸主要来自于食物或自身糖类,当体内糖类物质不足时,储存的甘油三酯(triglycerides,TAG)被分... 详细信息

研究背景及科学问题:游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)是动物体内重要的代谢物质,参与了氧化供能,脂质合成以及信号转导。动物体内的游离脂肪酸主要来自于食物或自身糖类,当体内糖类物质不足时,储存的甘油三酯(triglycerides,TAG)被分解为游离脂肪酸和甘油,维持机体中游离脂肪酸稳态。消化道中的脂肪酶负责将食物中的甘油三酯分解为游离脂肪酸和甘油,而动物组织中的脂肪酶则将机体中储存的甘油三酯分解为游离脂肪酸。但是,机体内过多的游离脂肪酸也可能导致高血脂和血管堵塞等疾病,因此动物体内游离脂肪酸的含量需要调控在适度水平(homeostasis)。动物机体调控不同脂肪酶的表达从而维持体内游离脂肪酸动态平衡的分子机制尚未阐明。完全变态昆虫在取食期通过进食和消化获得脂肪酸(fatty acids,FA)等营养物质,而变态时期则依靠分解自身储存的脂肪来提供能量物质。已知胰岛素(insulin)和保幼激素(juvenile hormone,JH)维持幼虫生长发育,而蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)拮抗胰岛素和JH,促进变态发育。因此,完全变态昆虫为研究动物机体在不同发育和生理状态下的游离脂肪酸代谢调控机制提供了理想模型。本文以鳞翅目昆虫棉铃虫(Helicoverpa armigera)为模型,揭示了 JH和20E分别通过不同转录因子上调不同脂肪酶的表达来维持取食期和变态期幼虫血淋巴游离脂肪酸的动态平衡,进而维持个体发育的分子机制。研究结果:以人基因组的脂肪酶为路标构建棉铃虫脂肪酶系统进化树,结果显示棉铃虫基因组中的脂肪酶分为三类,一类与人肠道中的胰脂肪酶亲缘关系较近,一类与人脂肪细胞中的脂肪酶亲缘关系较近,另一类与人酸性脂肪酶亲缘关系较近。基于转录组数据分析,棉铃虫脂肪酶呈阶段特异性表达,主要分为两类,一类主要在取食期幼虫的中肠内高表达,另一类主要在变态期幼虫的脂肪体中高表达。分别选取与人胰脂肪酶亲缘关系相近的取食期中肠内高表达的脂肪酶lipase member H-A-like(Lha-like)及与人脂肪细胞中的脂肪酶亲缘关系相近的变态期脂肪体中高表达的脂肪酶monoacylglycerol lipase ABHD12-like(Abhd12-like)进行研究。JH Ⅲ诱导Lha-like在取食期幼虫的中肠内高表达,而20E诱导Abhd12-like在变态期幼虫的脂肪体中高表达。Lha-like的表达也受胰岛素上调,但不受20E上调,而Abhd12-like的表达不受胰岛素及JH Ⅲ上调。经软件分析发现Lha-like的5’上游序列存在与保幼激素应答元件(JHRE,juvenile hormone response element)的E-box(5’-CACGTG-3’)高保守的序列。虫体敲降保幼激素的胞内受体(methoprene-tolerant 1,Met1)可以抑制Lha-like的表达。在棉铃虫表皮细胞(Helicoverpa armigera epidermal cell line,HaEpi)共表达 pLha-LUCI-GFP-His 荧光素酶报告基因质粒和MET1-RFP-His过表达质粒,双荧光素酶报告实验(加入pRL-TK质粒)显示JH Ⅲ通过MET1上调Lha-like的转录。Abhd12-like的5’上游序列中存在叉头盒转录因子O(forkhead box transcription factor O,FOXO)的经典结合元件(FOXO-binding element,FOXOBE,即 5’-TTGTTTAC-3’)和与蜕皮激素应答元件(edysone response element,EcRE,即 5’-TCAATG-3’)高保守的序列。共转染后的实验结果表明20E通过FOXO直接上调Abhd12-like的转录,而EcR则是间接激活Abhd12-like的转录活性。虫体注射dsRNA敲降Lha-like的表达,发现幼虫血淋巴中游离脂肪酸的含量下降,脂肪体中甘油三酯水平下降,幼虫出现延迟化蛹、化小蛹的表型。虫体敲降Abhd12-like的表达,发现血淋巴中游离脂肪酸的含量也下降,但脂肪体中甘油三酯水平升高,幼虫出现延迟化蛹的表型。说明两种脂肪酶在不同阶段维持血淋巴游离脂肪酸的动态平衡。结论及意义:JH Ⅲ通过MET1上调Lha-like的基因转录,LHA-like通过分解食物中的甘油三酯,释放游离脂肪酸,进而促进脂肪体中甘油三酯的合成,为幼虫进入变态期储备能量物质。20E则通过FOXO上调Abhd12-like的基因转录,ABHD12-like通过分解变态期幼虫脂肪体中的甘油三酯,释放游离脂肪酸,从而维持停止取食后变态发育所需要的能量。不同激素通过不同的转录因子

关键词：游离脂肪酸 LHA-like ABHD12-like 保幼激素ⅲ 保幼激素胞内受体 20-羟基蜕皮酮叉头盒转录因子O

茚虫威亚致死剂量对褐飞虱和二化螟保幼激素和保幼激素酯酶基因影响的比较研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

茚虫威亚致死剂量对褐飞虱和二化螟保幼激素和保幼激素酯酶基因影...

作者：张红梅扬州大学

学位级别：硕士

褐飞虱Nilaparvata lugens (Stal) (Hemiptera:Delphacidae)属同翅目,飞虱科;二化螟Chilo suppressalis (Lepidoptera:Pyralidae)属鳞翅目,夜蛾科,同为水稻上的重要害虫。近年来,新型嗯二唑类杀虫剂茚虫威在生产中广泛使用防治水稻等作物的鳞翅目害虫(如二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟)等。前期的研究表明亚致死剂量的茚虫威抑制了褐飞虱生殖。而昆虫的生殖主要受卵黄蛋白的卵黄蛋白原调节,而保幼激素调控卵黄蛋白合成。保幼激素酯酶属羧酸酯酶家族,水解保幼激素为无生物活性的保幼激素酸。本文研究了亚致死剂量茚虫威对褐飞虱和二化螟保幼激素ⅲ含量及保幼激素酯酶基因mRNA相对表达水平的影响,进一步揭示茚虫威抑制生殖的机理,比较研究其对同一生境下的靶标与非靶标害虫的亚致死生殖效应,对害虫综合治理及茚虫威的药效评价和合理使用具有重要的指导意义。实验结果表明如下：1.茚虫威亚致死剂量处理褐飞虱,雌虫保幼激素ⅲ含量和保幼激素酯酶基因Nljhe mRNA表达量的影响茚虫威处理的褐飞虱交配前后1,3和5 d雌虫体内保幼激素ⅲ含量均随杀虫剂浓度的增加而显著降低。交配前1,3和5d保幼激素ⅲ含量的平均值分别比对照降低了32.2%,31.7%和44.5%;交配后1,3和5d保幼激素ⅲ含量的平均值与对照相比,降低了42.8%,52.3%和46.4%。此外,茚虫威处理的褐飞虱交配后雌虫保幼激素ⅲ含量显著高于交配前,表明交配促进了雌虫保幼激素ⅲ的合成。随着茚虫威浓度的增加褐飞虱雌虫Nljhe基因mRNA的表达水平升高。茚虫威浓度与交配前、后褐飞虱雌虫Nljhe基因mRNA的表达水平呈线性相关,特别是交配前和交配后3 d。交配前1、3和5 d褐飞虱雌虫Nljhe基因mRNA的表达水平的平均值分别是对照的4.8、5.0和4.4倍,交配后1,3和5 d Nljhe基因mRNA的表达水平的平均值分别是对照的6.5、7.6和5.3倍。茚虫威处理显著诱导交配前后褐飞虱雌成虫Nljhe基因mRNA的表达水平。此外,交配后1、3、5 d的Nljhe基因mRNA的相对表达水平分别高于交配前1、3、5 d,表明交配诱导褐飞虱雌虫Nljhe基因mRNA的表达。2.茚虫威亚致死剂量处理二化螟幼虫保幼激素ⅲ含量和保幼激素酯酶基因Csjhe mRNA表达量的影响通过反转录多聚酶链式反应技术(RT-PCR)克隆了二化螟保幼激素酯酶基因cDNA片段,长为1292bp.与家蚕Bombyx mori (Lepidoptera:BombMsidae)、粘虫(Mythimna separata) (Lepidoptera:Noctuidae)和云杉卷叶蛾Choristoneura fumiferana (Lepidoptera:Tortricidae)的JHE相似度较高,分别为78%、74%、71%。处理3d后的4龄幼虫体内的保幼激素ⅲ的含量随茚虫威浓度的增加而显著降低。与对照相比,0.8、0.4、0.2、0.1g/L茚虫威处理二化螟3龄幼虫3d后,保幼激素ⅲ含量分别降低了37.7%、32.0%、22.3%和11.0%,说明茚虫威抑制了保幼激素的合成。处理6d后的5龄幼虫体内的保幼激素ⅲ含量无显著差异,但与处理3d后的4龄幼虫相比,除0.8g/L处理外,其体内保幼激素ⅲ的平均含量均低于处理3d后的幼虫,说明二化螟末2龄幼虫体内的保幼激素滴度开始下降。与对照相比,除0.1g/L茚虫威处理外,4龄幼虫保幼激素酯酶基因Csjhe mRNA的相对表达量随杀虫剂浓度的升高而显著升高。0.2、0.4、0.8 g/L的茚虫威处理后,二化螟4龄幼虫的Csjhe mRNA的相对表达量分别是对照的1.38、1.92、5.25倍。0.1、0.2g/L的茚虫威处理后,二化螟5龄幼虫体内的Csjhe mRNA的相对表达量分别是对照的1.46和1.87倍,但其他浓度处理后,5龄幼虫体内的Csjhe mRNA的相对表达量反而下降。3.茚虫威亚致死剂量处理对褐飞虱雌虫和二化螟幼虫保幼激素ⅲ含量和保幼激素醑酶基因影响的比较茚虫威亚致死剂量对褐飞虱雌虫交配前后体内保幼激素含量及保幼激素酯酶基因Nljhe相对表达量的变化,与茚虫威不同浓度处理的二化螟的4龄幼虫体内保幼激素含量及保幼激素酯酶基因Csjhe基因mRNA表达的变化一致。表明茚虫威抑制保幼激素的合成,诱导JHE基因mRNA的表达。本文通过比较研究,表明茚虫威通过抑制JH的合成调控褐飞虱和二化螟的生殖,而且表明茚虫威适用于水稻田问害虫防治。

关键词：茚虫威二化螟褐飞虱保幼激素ⅲ 生殖保幼激素酯酶基因基因表达水平

三唑磷诱导褐飞虱雌虫卵黄蛋白基因表达及保幼激素滴度动态的变化

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

三唑磷诱导褐飞虱雌虫卵黄蛋白基因表达及保幼激素滴度动态的变化

超声波胁迫对松褐天牛生理生化及取食行为影响的研究

公共植保与绿色防控——中国植物保护学会2010年学术年会

作者：戈林泉程耀徐婕吴进才扬州大学园艺与植物保护学院

褐飞虱是一种典型的农药诱导再猖獗害虫。过去对害虫再猖獗机制的研究主要集中在生理学和生态学方面研究农药诱导刺激雌成虫生殖。保幼激素在调节昆虫生长、发育、滞育和生殖等方面起着重要的作用。昆虫的生殖主要受卵黄蛋白和卵黄原蛋... 详细信息

褐飞虱是一种典型的农药诱导再猖獗害虫。过去对害虫再猖獗机制的研究主要集中在生理学和生态学方面研究农药诱导刺激雌成虫生殖。保幼激素在调节昆虫生长、发育、滞育和生殖等方面起着重要的作用。昆虫的生殖主要受卵黄蛋白和卵黄原蛋白的合成调控。卵黄原蛋白的合成主要依靠保幼激素调控合成。我们目前的研究结果表明,三唑磷诱导褐飞虱雌成虫体内卵黄蛋白基因的表达,并且与雌成虫生殖有关。在羽化后2d,交配前卵黄蛋白基因表达量是对照的2.4倍;交配后其表达量是对照的5.4倍。在交配前后褐飞虱雌成虫体内的保幼激素ⅲ滴度随着农药的浓度而增加。交配前雄成虫体内保幼激素ⅲ滴度随着农药浓度增加而增加,交配后却明显的下降,表明交配期间雄虫体内的保幼激素ⅲ转移到雌成虫体内。我们的研究结果使我们能够更好地理解农药诱导刺激褐飞虱生殖的分子和激素调控机制。

关键词：三唑磷褐飞虱保幼激素ⅲ 卵黄蛋白基因交配

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

超声波胁迫对松褐天牛生理生化及取食行为影响的研究

作者：吴小玲华中师范大学

学位级别：硕士

声音是一种重要的环境因子,对许多昆虫的生活影响显著。松褐天牛(Monochamus alternatus Hope),隶属于鞘翅目(Coleoptera),天牛科(Cerambycidae),是重要的森林害虫,不仅危害松树,而且是松材线虫的主要媒介。为了研究声波对松褐天牛的影... 详细信息

声音是一种重要的环境因子,对许多昆虫的生活影响显著。松褐天牛(Monochamus alternatus Hope),隶属于鞘翅目(Coleoptera),天牛科(Cerambycidae),是重要的森林害虫,不仅危害松树,而且是松材线虫的主要媒介。为了研究声波对松褐天牛的影响机制,探索防治松褐天牛的新思路,本文研究了超声波胁迫对松褐天牛生理生化及行为(保幼激素ⅲ滴度、乙酰胆碱酯酶活性、取食行为等)的影响。主要结果如下:1、无超声波辐照时(正常环境),刚羽化的松褐天牛成虫的保幼激素ⅲ(juvenile hormone Ⅲ,JHⅢ)滴度在前3天较低,随后的2天逐渐升高。雌成虫的JHⅢ滴度从第6天开始有所下降,而后的几天则保持稳定的含量,雄成虫的JHⅢ滴度也从第6天开始有所下降,随后的几天则是显著性升高。从第9天开始,雌、雄成虫的JHⅢ滴度之间出现极显著性差异(p<0.01)。暴露于超声波辐照下的松褐天牛成虫(1、3、5日龄)的JHⅢ滴度与对照组相比是下降的,JHⅢ滴度的变化率存在显著差异(p<0.05)。松褐天牛(1、3、5日龄)暴露在超声波下12 h时JHⅢ滴度变化率最大,其次是24 h,而暴露于超声波辐照下1 h的影响最小。松褐天牛(1日龄)在不同频率的超声波(60 kHz、30 kHz、LHC20)下暴露12h时JHⅢ滴度的变化率也存在显著差异(p<0.05)。当在似蝙蝠第二谐波60kHz下辐照时,松褐天牛的JhⅢ滴度变化率为63.6%±2.2%;当在似蝙蝠第一谐波30 kHz下辐照时,松褐天牛的JHⅢ滴度变化率为16.8%± 1.8%;而当在超声装置LHC20下辐照时,松褐天牛的JHⅢ滴度变化率为48%±4.5%,并且这三个不同的处理组间均存在着显著性的差异(P<0.01)。暴露于超声波辐照下,剪除触角组、有触角组的松褐天牛成虫的JHⅢ滴度均显著低于正常对照组(p<0.01);剪除触角组的雌松褐天牛的JHⅢ滴度变化率为18.2%± 1.3%,极显著低于有触角组的雌松褐天牛的JHⅢ滴度变化率(44.6%±3.2%)(p<0.001),剪除触角组的雄松褐天牛的JHⅢ滴度变化率为18.0%±1.1%,极显著低于有触角组的雌松褐天牛的JHⅢ滴度变化率(45.2%±4.1%)(p<0.001)。2、松褐天牛成虫暴露在超声波下的时间不同,乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性变化存在差异。当超声波辐照15 min、30 min、45 min、60 min时,松褐天牛成虫(1日龄)的AChE活性分别是对照组的0.83倍、1.39倍、1.11倍、1.09倍。在长时间的超声波辐照下,松褐天牛成虫(1日龄)的AChE活性是升高的。辐照6 h时,AChE活性是对照组的1.14倍,未达到显著性差异。辐照12 h时,测试组的AChE活性是对照组的1.22倍,达到显著差异水平(p<0.05)。辐照24h时,AChE活性是对照组的1.16倍,也达到显著差异水平(p<0.05)。不同日龄的松褐天牛对超声波的胁迫应答也存在差异。超声波辐照30 min时,1日龄松褐天牛成虫AChE活性是显著升高(p<0.05),而5日龄松褐天牛成虫AChE活性是显著降低(P<0.05)。触角剪除组的1日龄和5日龄松褐天牛成虫AChE活性显著低于对照组(P<0.05)。实验中还发现,在短时间的超声波辐照下,不同性别的松褐天牛AChE活性不同,但不存在显著性差异。雄成虫AChE活性的变化范围是0.0801 ±0.0101 U/mg protein 到 0.1317±0.009 U/mg protein,而雌成虫 AChE 活性变化范围从 0.0803±0.0042 U/mg protein 到 0.1382±0.0100 U/mg protein。3、无超声波辐照时(正常环境),松褐天牛在养虫笼中随机分布,当暴露于超声波辐照下并随着辐照时间的延长,松褐天牛的位置分布出现一定程度的差异,它们喜好分布于距离超声波较远的位置,并且超声波辐照下的松褐天牛的取食面积显著少于对照组的取食面积(p<0.05)。上述结果表明:超声波作为一种环境胁迫因子,对松褐天牛体内JHⅢ滴度、AChE活性、取食行为和位置分布具有一定的影响,可以成为一种潜在的防控松褐天牛的技术手段。

关键词：超声波松褐天牛保幼激素ⅲ 乙酰胆碱酯酶取食行为

中华豆芫菁HMGR基因克隆及斑蝥素生物合成途径初探

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华豆芫菁HMGR基因克隆及斑蝥素生物合成途径初探

作者：姜鸣西北农林科技大学

学位级别：硕士

斑蝥素(cantharidin,C10H12O4)是一种广泛存在于芫菁科及部分拟天牛科和蜡蝉科昆虫体内的萜类防御性毒素,不仅具有重要的医学价值,同时也具有很强的杀虫作用及抑菌、除草活性,在农业领域具有极大的潜在应用价值。由于原料缺乏而致斑蝥... 详细信息

斑蝥素(cantharidin,C10H12O4)是一种广泛存在于芫菁科及部分拟天牛科和蜡蝉科昆虫体内的萜类防御性毒素,不仅具有重要的医学价值,同时也具有很强的杀虫作用及抑菌、除草活性,在农业领域具有极大的潜在应用价值。由于原料缺乏而致斑蝥素无法进行大规模生产,这一直是限制其应用的一大障碍。为了从生物合成方面解决斑蝥素生产原料问题,本研究以中华豆芫菁Epicauta chinensis Laporte为材料,利用RT-PCR和RACE技术克隆了甲羟戊酸途径的关键限速酶——3-羟甲基戊二酰辅酶A-还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMGR)基因,并对该基因及其编码的蛋白进行了生物信息学分析;同时通过向虫体内注射该酶的抑制剂康帕丁及基因表达激活剂保幼激素ⅲ,观察注射后对虫体斑蝥素含量的影响,以此来推断斑蝥素在芫菁体内的合成是否与甲羟戊酸途径有关。主要研究结果如下:1.克隆得到了中华豆芫菁Epicauta chinensis Laporte HMGR基因全长cDNA序列共3167 bp,包含一个2595 bp的开放阅读框,共编码864个氨基酸,5’非编码区228 bp,3’非编码区344bp,其与辣根猿叶虫Phaedon cochleariae的HMGR cDNA序列一致性可达74%,与其他昆虫的HMGR cDNA序列一致性达60%以上,可初步判定克隆所得为中华豆芫菁HMGR基因,上传至GeneBank获得序列号为JX096638。2.生物信息学分析发现,中华豆芫菁HMGR蛋白预测的理论分子量为95.1 kDa,等电点pI=6.11,预测分子式为C4234H6765N1127O1247S53,不稳定系数为45.59,故推测此蛋白为不稳定蛋白,存在7个跨膜区,属于跨膜蛋白,有2个O-糖基化位点,4个N-糖基化位点和2个O-GlcNAc糖基化位点,不存在信号肽结构,可推测该蛋白是锚定于膜上起作用的非分泌型糖蛋白。二级结构预测中无规则卷曲占42.94%,α-螺旋占37.38%,延伸链占19.68%,三维结构在空间上折叠成“V”字形,包含N-结构域、S-结构域和L-结构域三个结构域,其中L-结构域包含两个HMG-CoA结合基序和一个NADP(H)结合基序,S-结构域含一个NADP(H)结合基序。氨基酸序列同源性比对与辣根猿叶虫Phaedon cochleariae的相似度达到74.5%,与鳞翅目昆虫的相似度为46%～48%。3.康帕丁(1.6mM)注射实验结果显示,实验组其斑蝥素的平均含量为1.01%,对照组的平均含量为2.11%,统计学分析发现两者具有极显著差异(P保幼激素ⅲ(Juvenile hormone Ⅲ,JH Ⅲ)注射实验结果显示,实验组的斑蝥素平均含量为2.48%,对照组的斑蝥素平均含量为1.24%,统计分析表明两者具有显著性差异(P保幼激素ⅲ对芫菁体内斑蝥素合成有促进作用。同时发现,在保幼激素注射的不同处理时间组间,斑蝥素的含量表现出一种先增高后降低的趋势(6h至12h增加,12h至22h减少),但均高于同时间段的对照组,说明保幼激素的作用时效较短,这可能与其作为激素在体内起作用有关。5.通过对保幼激素ⅲ注射实验试虫的HMGR基因表达检测发现,实验组的平均相对基因表达量为1.56,对照组的为0.68,说明注射保幼激素对芫菁体内的HMGR基因表达量有显著的增高,同时在保幼激素注射组内HMGR基因的相对表达量根据处理时间的不同,也表现出了先增高再降低的趋势(6h至12h增加,12h至22h减少)。6.结合分析保幼激素注射实验中试虫体内斑蝥素含量与其HMGR基因表达量的相关关系,结果表明试虫体内斑蝥素含量与HMGR基因表达量的相关系数R2=0.873,说明斑蝥素含量与HMGR基因表达量之间存在着显著的正相关关系,进一步推断出保幼激素对芫菁体内的斑蝥素合成有促进作用,斑蝥素的生物合成与甲羟戊酸途径相关。本研究首次克隆得到了中华豆芫菁HMGR基因的全长cDNA序列,并对其进行了相关的生物信息学分析,通过激活HMGR的基因表达及抑制其酶活性,得出斑蝥素在芫菁体内的合成与甲羟戊酸途径有关,并通过荧光实时定量RT-PCR的方法检测得到,HMGR基因的表达量与斑蝥素在芫菁体内的生物合成量具有一定相关性。

关键词：斑蝥素克隆生物信息学甲羟戊酸途径保幼激素ⅲ 康帕丁

茚虫威和氯虫苯甲酰胺对褐飞虱亚致死效应的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

茚虫威和氯虫苯甲酰胺对褐飞虱亚致死效应的研究

作者：杨霞扬州大学

学位级别：硕士

褐飞虱Nilaparvata lugens (Stal),半翅目,飞虱科,是一种典型的杀虫剂诱导再猖獗型害虫。近年来,防治鳞翅目害虫(三化螟、稻纵卷叶螟等)的新药茚虫威、氯虫苯甲酰胺大量应用于生产实践。杀虫剂亚致死剂量刺激害虫生殖是杀虫剂诱导害虫... 详细信息

褐飞虱Nilaparvata lugens (Stal),半翅目,飞虱科,是一种典型的杀虫剂诱导再猖獗型害虫。近年来,防治鳞翅目害虫(三化螟、稻纵卷叶螟等)的新药茚虫威、氯虫苯甲酰胺大量应用于生产实践。杀虫剂亚致死剂量刺激害虫生殖是杀虫剂诱导害虫再猖獗最重要的因素。研究茚虫威和氯虫苯甲酰胺对褐飞虱的亚致死效应,可为其更好的合理使用提供理论依据。本文研究了两种杀虫剂亚致死剂量处理对褐飞虱雌虫繁殖力,卵黄原蛋白基因(Nlvg)表达和卵黄蛋白含量的影响,以及茚虫威亚致死剂量处理后对褐飞虱雌虫卵巢和脂肪体核酸、蛋白质、保幼激素ⅲ(JHⅢ)含量的影响,结果表明如下：1.茚虫威和氯虫苯甲酰胺亚致死剂量处理对褐飞虱雌虫生殖、Nlvg基因表达和卵黄蛋白含量的影响茚虫威和氯虫苯甲酰胺显著抑制了褐飞虱雌虫的产卵和Nlvg基因的表达,其中茚虫威10、20、40和80mg/L处理的褐飞虱雌虫Nlvg基因表达水平与对照相比降低了35.4%、74.4%、79.6%和61.9%,氯虫苯甲酰胺7.5、15、30、60和80mg/L处理的褐飞虱雌虫Nlvg基因表达水平与对照相比降低了79.3%、40.2%、40.0%、79.8%和51.8%。褐飞虱雌虫卵巢和脂肪体的卵黄蛋白含量低于对照处理,说明两种杀虫剂抑制了卵黄蛋白在脂肪体的合成,并阻止其向卵巢的运输。低水平Nlvg基因的表达导致雌虫卵巢卵黄蛋白含量的降低,而卵黄蛋白含量和Nlvg基因表达呈负相关,表明杀虫剂通过影响Nlvg基因的表达来调控褐飞虱的繁殖。研究这两种新药对褐飞虱生殖的影响,对于害虫再猖獗治理具有重要的科学意义。2.茚虫威处理对褐飞虱雌虫卵巢和脂肪体核酸代谢、蛋白质含量的影响取食茚虫威所有浓度处理的水稻后,褐飞虱雌虫卵巢和脂肪体RNA、蛋白质含量显著高于对照处理,但DNA含量除了羽化5天的褐飞虱雌虫处理组外,其余处理没有明显变化。总体上,褐飞虱雌虫卵巢和脂肪体的RNA、蛋白质含量随杀虫剂浓度的升高而显著降低,且与茚虫威浓度间呈显著的负相关,说明卵巢和脂肪体的RNA、蛋白质含量比DNA敏感,茚虫威影响卵巢和脂肪体的RNA含量,最终影响卵巢和脂肪体蛋白质的合成,并且所有处理和对照组卵巢、脂肪体RNA/蛋白质的比值约为0.20。3.茚虫威处理对褐飞虱雌虫保幼激素ⅲ含量的影响褐飞虱雌虫交配前后JHⅢ含量随茚虫威浓度的增加而显著降低,且与茚虫威浓度呈显著的负相关。交配前1,3和5d保幼激素ⅲ含量的平均值分别比对照显著降低了32.2%,31.7%和44.5%;交配后1,3和5d保幼激素ⅲ含量的平均值与对照相比,分别降低了42.8%,52.3%和46.4%。随羽化天数的增加,雌虫保幼激素ⅲ含量降低,且交配后高于交配前。本研究为我们深入了解茚虫威抑制褐飞虱繁殖的生理生化机制,同时为稻田合理地使用茚虫威提供了理论基础。

关键词：褐飞虱茚虫威氯虫苯甲酰胺生殖卵黄蛋白卵黄原蛋白基因卵巢脂肪体蛋白质核酸保幼激素ⅲ