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体外构建组织工程软骨种子细胞的研究进展

中国矫形外科杂志 2007年第4期15卷 278-280页

作者：孙天威张学利天津市人民医院脊柱外科中心天津市脊柱外科研究所300121

体外构建组织工程软骨的首要问题是种子细胞的来源,目前获得种子细胞的可能途径主要有以下几种:(1)培养扩增自体获得的软骨细胞;(2)同种异体软骨细胞;(3)骨髓基质干细胞及其他组织来源干细胞;(4)胚胎干细胞;(5)基因修饰细胞.本文就当前... 详细信息

体外构建组织工程软骨的首要问题是种子细胞的来源,目前获得种子细胞的可能途径主要有以下几种:(1)培养扩增自体获得的软骨细胞;(2)同种异体软骨细胞;(3)骨髓基质干细胞及其他组织来源干细胞;(4)胚胎干细胞;(5)基因修饰细胞.本文就当前体外构建组织工程软骨的种子细胞研究进展综述如下:

关键词：骨种子细胞体外构建构建组织工程同种异体软骨细胞骨髓基质干细胞组织工程软骨基因修饰细胞胚胎干细胞

绿色荧光蛋白标记骨髓间质干细胞示踪技术在体外构建组织工程骨中的应用研究

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生物医学工程学杂志 2011年第1期28卷 121-124,137页

作者：徐彩霞项鹏陈蕊王迎军陈晓峰孟永春刘畅华南理工大学材料学院生物材料研究所广州510640 中山大学干细胞与组织工程研究中心广州510080

探讨绿色荧光蛋白(hrGFP)标记技术在组织工程骨体外构建中对大鼠骨髓间质干细胞(rBMSCs)的示踪作用。用293FT细胞包装含hrGFP基因的慢病毒载体,收集病毒液转染rBMSCs,转染后细胞持续表达绿色荧光,流式细胞仪检测转染率81.3%。将hrGFP标... 详细信息

探讨绿色荧光蛋白(hrGFP)标记技术在组织工程骨体外构建中对大鼠骨髓间质干细胞(rBMSCs)的示踪作用。用293FT细胞包装含hrGFP基因的慢病毒载体,收集病毒液转染rBMSCs,转染后细胞持续表达绿色荧光,流式细胞仪检测转染率81.3%。将hrGFP标记的rBMSCs与生物玻璃-胶原蛋白-透明质酸-磷酸丝氨酸支架复合培养体外构建组织工程骨。荧光显微镜下观察到绿色荧光的细胞在支架表面很好地黏附、增殖。成骨诱导后,表达绿色荧光的细胞内部及支架表面均有COLⅠ的阳性表达。说明HrGFP标记技术能直观有效地观察组织工程骨体外构建过程中细胞的黏附、生长及成骨分化等行为。

关键词：绿色荧光蛋白骨髓间质干细胞组织工程骨体外构建

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体外构建组织工程化同种带瓣管道的研究

山东医药 2007年第5期47卷 28-29页

作者：冯德广张凯伦余海彬徐成阳李红卫初佩俊华中科技大学同济医学院附属协和医院湖北武汉430022 郑州大学第二附属医院

利用密度梯度离心法分离出胸骨骨髓10ml间充质干细胞(HMSCs),体外培养、扩增、纯化后加入特定生长因子将其定向诱导分化为内皮细胞(ECs)并作为种子细胞;液氮保存的人同种带瓣管道表面的ECs利用SDS及EDTA等去污剂完全脱去,并作为种植支... 详细信息

利用密度梯度离心法分离出胸骨骨髓10ml间充质干细胞(HMSCs),体外培养、扩增、纯化后加入特定生长因子将其定向诱导分化为内皮细胞(ECs)并作为种子细胞;液氮保存的人同种带瓣管道表面的ECs利用SDS及EDTA等去污剂完全脱去,并作为种植支架。将已培养好的ECs高密度种植在管道支架上,静态培养2周后用扫描电镜观察管道表面再内皮化程度。结果HMSCs在特定环境下定向分化为ECs;人同种带瓣管道表面的ECs被完全脱去,而中心部分的基质细胞及弹性纤维、胶原纤维完整保留;体外构建的组织工程化带瓣管道表面重新覆盖了完整的ECs单层。证实将HMSCs定向诱导分化后的ECs种植于脱ECs的人同种带瓣管道上,构建同种组织工程化带瓣管道具有可行性。

关键词：体外构建带瓣管道组织工程

T7启动子介导体外构建Nucleostem in特异性短发夹状干扰RNA

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中国药理学通报 2006年第6期22卷 731-735页

作者：岳保红朱晓燕孙玲赵小强陈艳丽王清霞刘帅张钦宪郑州大学第一附属医院检验科郑州大学医学检验系河南郑州450052 郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室郑州大学第一附属医院血液科河南郑州450052

目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共... 详细信息

目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共同序列中筛选出2个3′端为AA的21个碱基片段作为shRNA合成的对应序列,9个碱基的5′-UCUCUUGAA-3′作为Loop环。以23个碱基的5-′GGATC-CTAATACGACTCACTATA-3′作为T7启动子(T7 Promoter)序列,构建shRNA的体外合成双链DNA模板,一条链5′端无AA,顺序为启动子、shRNA正义信息链、Loop环、shRNA反义信息链,共70个碱基;另一条是该链的互补链,5′端带有AA,共72个碱基。在T7 RNA聚合酶(T7 RNA polym erase)作用下合成shRNA,纯化后通过凝胶电泳比较灰度值确定shRNA浓度;shRNA作用于HL-60细胞,通过观察细胞形态变化和NS-mRNA抑制率验证干扰效果。结果体外合成的两条shRNA电泳无降解和弥散现象,浓度分别为5.24μmol.L-1和3.35μmol.L-1;干扰HL-60细胞48 h后,细胞密度和聚集程度下降,细胞之间大小相差悬殊,经shRNA-NS-2作用的HL-60细胞一部分由圆形变成了梭形并有明显的伪足;与对照组相比NS-mRNA抑制率分别达到37.82%和71.88%。结论体外成功构建和合成了两条针对Nu-c leostem in基因的shRNA,且抑制该基因表达的作用明显,shRNA-NS-2使HL-60细胞形态发生了改变。所合成的shR-NA-NS-2可作为进一步研究该基因和探索白血病的基因治疗的工具。

关键词： T7启动子核干细胞因子体外构建 DNA模板短发夹状干扰RNA

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体外构建组织工程心肌块的研究进展

中华实验外科杂志 2015年第5期32卷 1215-1216页

作者：武开宏孙剑莫绪明南京医科大学附属南京儿童医院心胸外科 210008

在心脏外科领域,目前使用的各种补片、管道都没有生长能力,无法辅助心脏功能.对于终末期心脏病,细胞治疗已经从基础走向临床研究.但对于大面积心肌梗死,细胞治疗仍然无能为力,而且这类疾病往往造成更大的社会负担,是心血管疾病致残、致... 详细信息

在心脏外科领域,目前使用的各种补片、管道都没有生长能力,无法辅助心脏功能.对于终末期心脏病,细胞治疗已经从基础走向临床研究.但对于大面积心肌梗死,细胞治疗仍然无能为力,而且这类疾病往往造成更大的社会负担,是心血管疾病致残、致死的主要原因.采用组织工程方法体外构建有活性、植入后能与机体发生电机械融合的组织工程心肌必将会在心血管外科领域产生深远的影响.现就体外构建组织工程心肌块的研究现状作一综述.

关键词：构建组织工程心肌梗死体外构建心血管疾病组织工程方法外科领域细胞治疗生长能力

大鼠骨髓间充质干细胞与神经生长因子的体外构建的实验研究

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中华显微外科杂志 2007年第1期30卷 32-34,I0002页

作者：施永彦喻爱喜张功礼余永桂江良波武汉大学中南医院骨科武汉市430071 郧阳医学院附属人民医院显微骨科

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的体外构建表达神经生长因子（nerve growth factor，NGF）的能力，同时使MSCs被绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）稳定标记，通过病毒载体将NGF和GFP基因高效... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的体外构建表达神经生长因子（nerve growth factor，NGF）的能力，同时使MSCs被绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）稳定标记，通过病毒载体将NGF和GFP基因高效转染到MSCs中。方法取2月龄100—150gWistar大鼠，全骨髓法分离培养纯化大鼠MSCs，利用携带人NGFβ基因的修复缺陷性重组腺病毒（AdhNGFβ）和携带GFP基因的复制缺陷性逆转录病毒（Rt-GFP）转染MSCs，荧光显微镜观察GFP阳性的MSCs，免疫细胞化学和Western-blot检测hNGFβ的表达。结果Rt-GFP转染后，80％-90％MSCs可激发出明亮的绿色荧光，且荧光不随培养时间延长和传代次数增加而衰减。Ad-hNGFβ的转染MSCs中hNGFβ阳性率（90．17±2．14）显著高于阴性对照组（2．17±0．75）和空白对照组（1．83±0．98．P〈0．01），转染后MSCs中NGFβ表达量（188．67±8．71）显著高于阴性对照组（25．67±4．08）和空白对照组（27．50±3．33，P〈0．01）。结论大鼠间充质干细胞的体外构建中Ad—hNGFβ可以高效转染MSCs，实现NGF在MSCs中高效表达，Rt—GFP可以使MSCs获得长效标记。

关键词：骨髓间充质干细胞组织工程神经生长因子体外构建

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组织工程角膜的体外构建和形态学观察

中国老年学杂志 2008年第17期28卷 1693-1695页

作者：赵劲松黄岚峰苏冠方刘早霞吉林大学第二医院眼科吉林长春130041

目的探讨以骨髓间质干细胞(BMSCs)作为种子细胞,利用胶原涂层作为细胞载体,体外构建组织工程角膜的可行性。方法将兔骨髓细胞悬液分离后,经过传代培养得到稳定的BMSCs,以1×106/ml种植于胶原涂层的6孔培养板中培养3、5、7d,观察细胞形... 详细信息

目的探讨以骨髓间质干细胞(BMSCs)作为种子细胞,利用胶原涂层作为细胞载体,体外构建组织工程角膜的可行性。方法将兔骨髓细胞悬液分离后,经过传代培养得到稳定的BMSCs,以1×106/ml种植于胶原涂层的6孔培养板中培养3、5、7d,观察细胞形态学变化和膜形成状态,并进行组织学研究;对照组采用无胶原涂层的6孔培养板培养。结果培养3d,细胞长满培养板,并于周边部逐渐形成复层细胞区;培养5d,复层细胞区面积逐渐增大,周边部开始收缩,并与培养板分离;培养7d,细胞层与培养皿底部完全分开,形成完整的膜状结构,并具有一定强度。显微镜下观察培养7d的BMSCs按照一定方向排列,HE染色见细胞呈复层生长,状态良好;对照组在培养7d后见到细胞密度明显增加,但没有形成膜状结构。结论利用BMSCs和胶原基质可以共同构建复层膜状细胞结构,其细胞排列有序并具有一定机械强度,可期望用于组织工程角膜的体外构建和角膜病变患者的眼表重建;但构建复合物的生物学功能和活性尚有待进一步研究。

关键词：组织工程角膜骨髓间质干细胞体外构建

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灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨

上海交通大学学报（医学版） 2006年第9期26卷 1006-1010页

作者：吕晓杰周广东李宏曹珲刘霞刘凯崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的初步探讨应用灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨的可行性及其效果。方法消化、分离猪耳廓软骨细胞,接种于聚羟基乙酸支架上培养1周,形成细胞-支架复合物。实验分2组(每组8个样本):实验组放入灌流-液压式反应器连续培养3周;... 详细信息

目的初步探讨应用灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨的可行性及其效果。方法消化、分离猪耳廓软骨细胞,接种于聚羟基乙酸支架上培养1周,形成细胞-支架复合物。实验分2组(每组8个样本):实验组放入灌流-液压式反应器连续培养3周;反应器主要参数设置:灌流量100μL/m in,顺、逆时针方向各30 m in,灌流时间开/关各8 h/16 h,液压强度100 kPa,频率0.5 Hz,作用时间4 h/d。对照组则继续在培养皿内培养。第4周时取材,分别从大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化和生物化学等方面对实验组和对照组形成的软骨组织进行检测和比较。结果大体观察见实验组和对照组均形成了软骨样组织,组织湿重检测实验组为(191.03±18.55)mg,对照组为(130.78±10.33)mg(P体外构建组织工程化软骨,并且可以在一定程度上弥补传统构建方法的不足,提高体外构建软骨的质量。

关键词：灌流-液压式反应器软骨细胞组织工程体外构建

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TGF-β1缓释载体体外构建组织工程软骨

中华显微外科杂志 2005年第4期28卷 324-327页

作者：曾春蔡道章全大萍廖凯荣卢华定李晓峰史德海中山大学附属第三医院骨科广州市510630 中山大学高分子研究所广州市510275

目的制备负载TGF-β1壳聚糖缓释微球的三维多孔壳聚糖支架,检测TGF-β1缓释载体对软骨细胞功能的影响。方法乳化交联法制备TGF-β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合,检测其体外降解并通过ELISA法检测微球的载药、释药性能。将软骨... 详细信息

目的制备负载TGF-β1壳聚糖缓释微球的三维多孔壳聚糖支架,检测TGF-β1缓释载体对软骨细胞功能的影响。方法乳化交联法制备TGF-β1壳聚糖缓释微球并将其与壳聚糖支架复合,检测其体外降解并通过ELISA法检测微球的载药、释药性能。将软骨细胞置于复合载体中立体培养,通过苏木素伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色、扫描电镜观察复合载体对细胞的增殖、功能的影响。结果缓释微球的TGF-β1包封率达90.1%,并具有良好的药物缓释性能,软骨细胞在复合载体中增殖良好,并能够保持其表型及Ⅱ型胶原分泌功能。结论负载TGF-β1壳聚糖缓释微球的壳聚糖支架作为软骨细胞的载体在组织工程软骨的构建及软骨损伤的修复中有良好的应用前景。

关键词：壳聚糖微球转化生长因子缓释软骨组织工程软骨缓释载体 TGF 体外构建 ELISA法检测