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腺病毒介导反义c-myc增强骨肉瘤细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

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中华外科杂志 2005年第12期43卷 799-802页

作者：杨迪生解先宽叶招明陶惠民浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的构建表达反义cmyc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义cmyc转染的人骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用基因重组技术,将约720bp的人cmyccDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义cmyc的重组腺... 详细信息

目的构建表达反义cmyc的重组腺病毒,探讨重组腺病毒介导反义cmyc转染的人骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性的影响。方法应用基因重组技术,将约720bp的人cmyccDNA反向克隆到腺病毒载体,经重组、扩增、病毒包装后构建表达反义cmyc的重组腺病毒(AdAscmyc),并在体外转染骨肉瘤MG63细胞,采用瑞士染色、吖啶橙染色、蛋白免疫印迹(WesternBlot)、细胞体外增殖抑制试验(MTT)、流式细胞仪(FCM)等观察细胞形态、检测cmyc蛋白表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期,分析AdAscmyc体外转染的骨肉瘤MG63细胞对顺铂化疗敏感性。结果成功构建AdAscmyc,滴度可达2×109pfu/ml,体外转染MG63细胞48h后,可降低cmyc蛋白表达,并与浓度为2.0、5.0μg/ml的顺铂作用2h后,可抑制MG63细胞的体外增殖,抑制率分为33.4%、54.2%,与对照腺病毒(AdLacZ)转染组相比差异有统计学意义(P介导反义cmyc能诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡并增加MG63细胞对顺铂化疗敏感性。

关键词：化疗敏感性骨肉瘤细胞介导反义 myc 顺铂实验研究 MG-63细胞重组腺病毒 G2/M期阻滞基因重组技术体外转染蛋白免疫印迹增殖抑制试验体外增殖抑制细胞周期分析构建表达蛋白表达腺病毒载体 Asc 吖啶橙染色流式细胞仪

腺病毒介导反义基质金属蛋白酶-2基因抑制肝癌生长的实验研究

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中华肝脏病杂志 2005年第9期13卷 671-674页

作者：张明满严律南李德华苟兴华刘江文苏芝韩蕾赵兰英四川大学华西医院普外科成都610041 成都地奥制药集团有限公司新药部

目的探讨携带反义基质金属蛋白酶-2(MMP2)基因的重组腺病毒(Ad-MMP2AS)对人肝癌细胞株(Bel-7402)体外侵袭性和人肝癌动物模型生长的抑制作用。方法Ad-MMP2AS感染人肝癌细胞Bel-7402后,用Boyden Chamber检测Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞降解... 详细信息

目的探讨携带反义基质金属蛋白酶-2(MMP2)基因的重组腺病毒(Ad-MMP2AS)对人肝癌细胞株(Bel-7402)体外侵袭性和人肝癌动物模型生长的抑制作用。方法Ad-MMP2AS感染人肝癌细胞Bel-7402后,用Boyden Chamber检测Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞降解人工基底膜Matrigel的抑制作用; Western blot和明胶酶谱分析测定Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞分泌MMP2的影响。将感染Ad-MMP2AS的Bel-7402细胞接种于裸鼠皮下观察其成瘤能力;Ad-MMP2AS瘤内注射,观察它对肝癌生长的抑制作用;肿瘤组织切片、HE染色观察瘤细胞生长情况。结果Ad-MMP2AS感染的Bel-7402细胞分泌MMP2被抑制、穿过Matrigel的Bel-7402细胞数下降52.05%、成瘤量下降3.3倍;瘤内注射Ad-MMP2AS后瘤体生长抑制率为63.06%。结论重组腺病毒介导的反义MMP2基因(Ad-MMP2AS)能抑制肝癌的生长,对肝癌有治疗潜力。

关键词：癌,肝细胞基质金属蛋白酶基因疗法腺病毒,人基质金属蛋白酶-2 重组腺病毒介导人肝癌细胞株介导反义人肝癌细胞Bel-7402 基因抑制

腺病毒介导反义基质金属蛋白酶-2抑制肝癌生长和血管生成的研究

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中华实验外科杂志 2005年第11期22卷 1325-1327页

作者：张明满严律南苟兴华李德华苏芝韩蕾赵兰英李明皓四川大学华西医院普外科成都610041 成都地奥制药集团有限公司新药部

目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶(MMP2)基因的重组腺病毒(Ad-MMP2AS)对人肝癌动物模型生长和血管生成的抑制作用。方法用我们构建的Ad-MMP2AS感染人肝癌细胞株(Bel-7402)。Boyden Chamber检测Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞降解人工基底膜... 详细信息

目的探讨携带反义二型基质金属蛋白酶(MMP2)基因的重组腺病毒(Ad-MMP2AS)对人肝癌动物模型生长和血管生成的抑制作用。方法用我们构建的Ad-MMP2AS感染人肝癌细胞株(Bel-7402)。Boyden Chamber检测Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞降解人工基底膜(Matrigel)的抑制作用;Western blotting和明胶酶谱分析测定Ad-MMP2AS对Bel-7402细胞分泌MMP2的影响;用感染Ad-MMP2AS的Bel-7402细胞接种于裸鼠皮下观察其成瘤能力;Ad-MMP2AS瘤内注射,观察它对肝癌生长的抑制作用;肿瘤组织切片、HE染色观察瘤细胞生长情况;免疫组织化学分析肿瘤组织血管密度。结果Ad-MMP2AS感染的Bel-7402细胞穿过Matrigel的Bel-7402细胞数下降52%、成瘤量下降4.3倍;瘤内注射Ad-MMP2AS使瘤体生长减少63%;肿瘤组织血管密度减少2.6倍。结论Ad-MMP2AS能抑制肝癌的生长和肿瘤血管的生成,对肝癌有治疗潜力。

关键词：癌,肝细胞基质金属蛋白酶腺病毒基因治疗基质金属蛋白酶-2 人肝癌细胞株重组腺病毒血管生成介导反义癌生长

腺病毒介导反义血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA对人肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响

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中华结核和呼吸杂志 2005年第4期28卷 263-267页

作者：涂明利王汉琴雷怀定罗国仕刘先军刘为舜熊畅刘玉全任思群郧阳医学院附属太和医院呼吸内科湖北十堰442000 郧阳医学院解剖学教研室

目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASM... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验。又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图。结果转染AdCMVahAT1后48h的PASMC,AT1RmRNA明显低于对照组[AT1R/βactin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平(A值为176.39±21.63)显著低于DMEM组(A值为310.21±29.82)和AdCMVLacZ组(A值为306.45±30.09),差异均有统计学意义(P均<0.01),转染AdCMVahAT1后24h的PASMC迁移距离为(40.93±9.69)μm,显著短于DMEM组的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ组的(77.80±10.66)μm,差异均有统计学意义(P均<0.01)。给予AngⅡ刺激48h,AngⅡ组PASMC的增殖指数(59.69±3.46)

关键词：血管紧张素Ⅱ1型受体细胞生物学行为逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 介导反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) PASMC 肺动脉平滑肌细胞 DMEM 流式细胞仪检测 AT1R cDNA转染 β半乳糖苷酶增殖指数蛋白表达水平 AngⅡ介导腺病毒介导