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人精液磷酸二酯酶Ⅰ性质研究

生物化学与生物物理进展 1993年第6期20卷 471-473页

作者：韩刚毅王实济南军区军事医学研究所济南250014 河南省新乡市职业病防治研究所

精液中含有多种酶类，其中一些活性高、性质稳定的酶可以作为现场勘验工作中的精液标志物，为发现和鉴别物证提供线索。

关键词：人精液磷酸二酯酶Ⅰ 同功酶精液

人精液酸性磷酸酶对小鼠B淋巴细胞产生特异性抗体的免疫抑制研究

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生殖与避孕 1997年第2期17卷 98-101页

作者：李伟毅程丽萍陈广洁朱云风上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

本文主要探讨人精液酸性磷酸酶（ACP）对B淋巴细胞功能的影响。体内实验：实验组小鼠（BALB／c）预先经腹腔注射纯化的人精液ACP，对照组小鼠以等量生理盐水代替，随后用SRBC免疫各小鼠，于免疫后d5进行溶血空斑试验和血清抗体凝集效价... 详细信息

本文主要探讨人精液酸性磷酸酶（ACP）对B淋巴细胞功能的影响。体内实验：实验组小鼠（BALB／c）预先经腹腔注射纯化的人精液ACP，对照组小鼠以等量生理盐水代替，随后用SRBC免疫各小鼠，于免疫后d5进行溶血空斑试验和血清抗体凝集效价测定。体外实验；各小鼠先用SRBC免疫，随后取出脾脏细胞；实验组细胞加入人精液ACP，对照组加入等量生理盐水，作用24h，进行溶血空斑试验。结果表明，人精液ACP在体内外均能明显抑制实验组小鼠的溶血空斑数目和血清抗体的凝集效价，与对照组相比，P＜0．01。提示人精液ACP具有免疫抑制作用：能抑制小鼠B淋巴细胞产生特异性抗体的免疫应答能力。

关键词：人精液酸性磷酸酶免疫抑制剂溶血空斑试验

人精液和阴道杆菌滤液在诱发小鼠宫颈癌中的作用

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中华肿瘤杂志 1990年第6期12卷 401-403页

作者：孙瑜曾毅湖北医学院病毒所中国预防中心病毒研究所

我们应用甲基胆蒽诱导小鼠宫颈癌的动物模型,研究了人精液和从宫颈癌病人宫颈部分离的阴道杆菌培养滤液(SB)的肿瘤促进作用。发现用SB处理的小鼠就可诱导宫颈癌的发生,癌发率达12%,可以诱导Raji细胞EB病毒早期抗原表达阳性的精液和革兰... 详细信息

我们应用甲基胆蒽诱导小鼠宫颈癌的动物模型,研究了人精液和从宫颈癌病人宫颈部分离的阴道杆菌培养滤液(SB)的肿瘤促进作用。发现用SB处理的小鼠就可诱导宫颈癌的发生,癌发率达12%,可以诱导Raji细胞EB病毒早期抗原表达阳性的精液和革兰氏阳性杆菌滤液能协同甲基胆蒽诱导宫颈癌,其癌发率从甲基胆蒽的11.8%增到54.2%。单用甲基胆蒽和与SB合用,两者之间差异有显著性意义。实验结果提示,SB具有复合致癌因子,对其机制进行了探讨。

关键词：人精液小鼠宫颈癌

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人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性研究

人精液抗菌多肽29肽的分离纯化及活性研究

作者：喻志勇昆明医学院

学位级别：硕士

目的：分离并纯化正常人精液抗菌多肽，并检测其抗菌活性及抗菌谱。方法：以昆明医学院附一医院男性科就诊病人的精液为原料，提取抗菌活性多肽，将40人正常精液高速离心后取上清液，经过mono-s一阳离子柱层析提取活性粗制品，再经过... 详细信息

目的：分离并纯化正常人精液抗菌多肽，并检测其抗菌活性及抗菌谱。方法：以昆明医学院附一医院男性科就诊病人的精液为原料，提取抗菌活性多肽，将40人正常精液高速离心后取上清液，经过mono-s一阳离子柱层析提取活性粗制品，再经过分子筛(sephadexG-25)，及RP-HPLC．G8柱多步柱层析分离纯化后，各步分离均采用琼脂糖弥散法检测纯化分子的抗菌活性，Tricine-SDS-PAGE电池检测其分子量，肽质量指纹谱(PMF)鉴定。结果：从人精液中纯化出一分子量约为3.5KD左右的抗菌活性多肽，对大肠杆菌(ATCC)、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌等有抗菌活性，其中对大肠杆菌的抑菌活性最强，经肽质量指纹谱(petide mass fingerprinting)鉴定分析后，该抗菌肽很可能为一新肽，该肽由29个胺基酸残基组成命名为29肽。并研究了该分子的部分性质，该肽带正电荷，偏碱性，有较强的疏水性，推断很可能是低分子量的链状脂肽。结论：29肽很可能是一种新的有较高抗菌活性人源性多肽。具有进一步开发研究价值。

关键词：人精液抗菌肽分离纯化

人精液和卵泡液中抑制素B（INH-B）的分离纯化与鉴定研究

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人精液和卵泡液中抑制素B（INH-B）的分离纯化与鉴定研究

作者：杜江北京协和医学院

学位级别：硕士

研究背景：血清抑制素B(INH-B)的检测在男性不育症的诊治中已逐渐得到广泛的应用。一般认为INH-B更能直接反映睾丸的生精功能,并具有无创性的优点,可作为评价男性生育力的重要指标,诸如预测非阻塞性无精症患者行睾丸穿刺能否获得精子的... 详细信息

研究背景：血清抑制素B(INH-B)的检测在男性不育症的诊治中已逐渐得到广泛的应用。一般认为INH-B更能直接反映睾丸的生精功能,并具有无创性的优点,可作为评价男性生育力的重要指标,诸如预测非阻塞性无精症患者行睾丸穿刺能否获得精子的参考依据。目前国际国内应用的血清INH-B检测试剂盒几乎全是英国DSL公司的产品,且价格昂贵。DSL公司以Groome NP实验室的雄厚研究基础为支撑,将其研究结果成功转化。查阅文献凡INH-B研究所用的抗体最初都是该实验室惠赠。在90's年代开发出第一代INH-B ELISA检测试剂盒,在2000年又改进推出第二代产品。本研究课题的立项源于市场的需求,因国内尚无自主知识产权的INH-B检测试剂盒,在某试剂公司的要求下进行合作开发国产化产品。研究目的：制备高特异性、高亲和力的单克隆抗体是研发的核心问题。因此,本研究将集中开展INH-B单抗制备的关键步骤与必要条件的探索。研究表明,男性体内IN的重要生理活性形式为INH-B,其组装过程大部分在生精细胞内完成,然后释放到循环系统和精液中。女性卵泡液中INH-B的含量为几十ng/ml～几百ng/ml,比血液及精液中的含量高约103倍本实验拟尝试从人精液和/或人卵泡液中分离纯化INH-B,为单抗的筛选提供天然抗原分子。由于对人精液和卵泡液中INH-B的研究相对薄弱,更多的研究资料来源于动物,因此本研究还将对其存在形式和理化性质获得更直接的资料。主要目的有三个：1.探索人精液和卵泡液中INH-B的有效分离纯化方法。2.鉴定人精液和卵泡液中INH-B的可能分子存在形式。3.扩大人卵泡液中蛋白质组成的信息资料。研究路线与方法：1.目的蛋白的富集：采用人精液和卵泡液为研究材料,分别利用乙腈、丙酮、乙醇三种有机溶剂沉淀法去除样品中的高丰度蛋白,富集低丰度蛋白INH-B,以及利用饱和硫酸铵分级沉淀方法,比较四种方法对于低丰度目的蛋白INH-B的富集效果。以INH-B ELISA检测盒的结果为依据,跟踪监测并比较四种方法对于低丰度目的蛋白INH-B的富集效果。2.选用DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱和羟基磷灰石柱层析、肝素亲和柱方法,分离初步富集的样品以进一步纯化。同样方法监测并比较三种方法对于样品的分离纯化效果。3.利用蛋白质等电点分离法(Rotofor System)对富集样品和柱分离样品分别做等电分离比较,以确定柱分离步骤的有效性,同时鉴定INH-B的等电点。4.利用免疫共沉淀(CO-IP)和Western-blot方法寻找阳性条带,利用质谱分析方法鉴定样品中INH-B的α、βB两个亚基的分子存在形式及成熟卵泡液中部分蛋白质的组成。研究结果：1.由于精液特殊的粘稠性(含大量的精胶蛋白),在对其进行有机溶剂蛋白沉淀和饱和硫酸铵分级沉淀的过程中,去除精胶蛋白的同时会损失大部分的INH-B。因此,经多次实验验证后,我们放弃了对于精液中INH-B的分离纯化和鉴定研究。2.卵泡液样品经丙酮、乙醇、乙腈处理后分别可清除60.9%、46.3%、88.7%的高丰度蛋白,同时乙腈法能回收61.8%的INH-B。3.通过比较肝素亲和柱方法、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱和羟基磷灰石柱层析三种方法,其中第二种方法最稳定,并且能回收样品中83.2%的INH-B。4.乙腈沉淀处理的卵泡样品中仍有较多的杂蛋白,因此,经DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱处理后的样品比直接用乙腈沉淀样品做Rotofor System分离的效果要好。其中,INH-B的回收率为75.3%,卵泡液中INH-B的pI在4.55左右。5.通过质谱方法,鉴定出六种成熟卵泡液中存在的蛋白质,分别是载脂蛋白D(Apolipoprotein D)、载脂蛋白A(Apolipoprotein A)、载脂蛋白M(ApolipoproteinM)、视黄醇结合蛋白4 (Retinol-binding protein 4)、甲状腺素运载蛋白(Transthyretin OS)、SERPINA1蛋白Alpha型抗胰蛋白酶(SERPINA1 Isoform 2 of Alpha-1-antitrypsin)。结论：1.卵泡液是INH-B研究的最合适材料。同时,利用乙腈法处理卵泡原液去除高丰度蛋白是最有效的方法并能保留较多的INH-B。2.使用人卵泡液为实验材料,利用INH-B本身的生化性质,通过乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“三步分离法”,初步纯化获得人体卵泡液中天然INH-B蛋白分子粗制品,纯化回收率达38.7%,并较准确鉴定出其在人体中的等电点为4.55。3.利用现有的商品化抗体并没有鉴定出在精液和卵泡液中INH-B的分子存在形式。但经多个步骤纯化已经获得相对含量较高的INH-B粗制品

关键词：人精液人卵泡液抑制素B质谱蛋白质分离纯化

分泌抗人精液特异蛋白P_(30)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

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中国法医学杂志 1990年第2期5卷 72-76页

作者：张琦严红王香菊公安部第二研究所

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳... 详细信息

作者通过杂交瘤技术建立了9株产生抗精浆特异蛋白 P_(30) 单克隆抗体的杂交瘤细胞系。它们是由 SP2/0骨髓瘤与经 P_(30) 免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞按常规方法进行细胞融合、并经克隆化筛选得出.这些细胞株均经体外培养3个月以上能够稳定分泌抗 P_(30) 单克隆抗体。该抗体只能识别纯化的 P_(30) 和精液中的 P_(30) ;与人精液以外的其他体液和多种人体组织无交叉反应;与几种常见动物的精液和血液无交叉反应。这些 P_(30) 单克隆抗体均属 IgG 类和 IgG_1亚类。其培养上清液和腹水的抗体效价最高分别达到320和128,000。以 ELISA 法应用这些单克隆抗体能很好地鉴定精液和精斑。

关键词：人精液特异蛋白P30 精斑鉴定

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人精液中前列腺素的来源

国外医学(计划生育分册) 1983年第4期 185-186页

作者：曹霖

虽然一般认为人精液中的前列腺素(PGs)是由精囊所分泌,但实验证据不足。本文以一系列实验研究搞清人精液中前列腺素的来源。收集具有生育能力的;输精管结扎一年以上的和不育的三组男子精液,进行精液容量、精子计数、精子活力、L

关键词：前列腺素女用避孕药人精液 PGE

人精液对RAJI细胞中EPSTEIN-BARR病毒早期抗原的诱导

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病毒学报 1986年第2期 181-183页

作者：纪志武,曾毅,伊滕洋平中国预防医学科学院病毒学研究所中国预防医学科学院病毒学研究所日本京都大学医学院

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某... 详细信息

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某些人的精液也含有能激活EB病毒的物质。本文报告中国人的精液,以及人精液与从宫颈癌病人分离的细菌培养液,对EB病毒早期抗原的诱导作用和协同诱导作用。

关键词： Epstein-Barr病毒人精液早期抗原

人精液中的LDH-C4和其与睾丸功能的关系

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国际生殖健康/计划生育杂志 1986年第3期 187-188页

作者：孙光

乳酸脱氢酶同功酶（LDH-C4）存在于人的睾丸、精子和精液中。这种酶存在于初级精母细胞和生殖细胞系的较晚阶段,其在精液中的活性被认为是精子或其前体细胞漏出的表现。LDH-C4约占精子中总LDH活性的80%,已知其与睾丸成熟有关,某些睾丸... 详细信息

乳酸脱氢酶同功酶（LDH-C4）存在于人的睾丸、精子和精液中。这种酶存在于初级精母细胞和生殖细胞系的较晚阶段,其在精液中的活性被认为是精子或其前体细胞漏出的表现。LDH-C4约占精子中总LDH活性的80%,已知其与睾丸成熟有关,某些睾丸功能障碍则伴有这种酶的消失。生化分析精液中的器官特异性标记物可研究产生这些标记物的器官的分泌功能。已知前列腺的标记物有酸性磷酸酶、锌、镁离子、枸橼酸,精囊的标记物为果糖和前列腺素。由于LDH-C4专门与生精上皮内的几种细胞有关,故其可成为这些细胞的标记物。精液LDH-C4的半定量分析已用于鉴

关键词： LDH-C4 人精液精子数