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胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3限制性表位肽诱导的细胞毒性T淋巴细胞的体外免疫应答

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解剖学报 2020年第4期51卷 548-552页

作者：陈红莲时冉冉张丽刘辉马永超漯河医学高等专科学校内科学教研室河南漯河462000

目的探讨胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位诱导的CTL对肺癌细胞的作用。方法使用软件Net CTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB预测选取IGF2BP3的人类白细胞抗原a2(HLA-a2)限制性表位肽。T2a2与表位肽的... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位诱导的CTL对肺癌细胞的作用。方法使用软件Net CTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB预测选取IGF2BP3的人类白细胞抗原a2(HLA-a2)限制性表位肽。T2a2与表位肽的亲和力实验检测候选表位与T2a2细胞表面HLA-a2分子的结合能力,酶联免疫斑点(ELISPOT)实验检测候选表位肽诱导CTL分泌γ干扰素(IFN-γ)的能力,羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染色检测细胞诱导CTL的能力。结果P143、P199、P280、P409、P515具有较好的结合力。表位肽P409、P515诱导的CTL具有较好的分泌IFN-γ的能力,并且对靶细胞具有一定的杀伤作用。结论P409、P515有望用于肿瘤的过继免疫治疗,可以成为抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。

关键词：胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3 人类白细胞抗原a2 细胞毒性T淋巴细胞免疫印迹法人

肿瘤抗原PIWIL2的HLA-a2限制性CTL表位鉴定

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中国病理生理杂志 2015年第7期31卷 1315-1319页

作者：时冉冉李伯和袁磊付陈增陈娇王建国漯河医学高等专科学校分子生物学实验室河南漯河462002

目的:鉴定肿瘤抗原PIWIL2的人类白细胞抗原a2(HLA-a2)限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR、Western blot方法检测PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中的表达情况,然后通过BIMAS、Rank Pep、Net MHC、Net CTL1.2及IEDB软件预测打分来选取PIWIL2的HLA-a2限制性的表位。候选表位肽通过标准的Fmoc化学合成法合成,结合力实验用于检测候选表位与T2a2细胞表面HLA-a2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导CTL分泌IFN-γ的能力,体外细胞毒性实验检测候选肽诱导CTL的能力。结果:PIWIL2在肿瘤细胞系MCF-7、SW480和HT-29中均有表达。候选肽P485、P493、P965具有中等结合力。ELISPOT实验结果显示表位肽P485和P965诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力。细胞毒性实验结果显示表位肽P485和P965对MCF-7细胞均有一定的杀伤作用。结论:表位肽P485和P965是优秀的PIWIL2抗原HLAa2限制性CTL候选表位,可能成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。

关键词： PIWIL2 人类白细胞抗原a2 细胞毒性T淋巴细胞

HLA-a2小干扰RNA的设计及沉默效果检测

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中国组织工程研究 2014年第29期18卷 4605-4610页

作者：刘建生赵刚裴丹郑德宇辽宁医学院解剖学教研室辽宁省锦州市121001

背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人的主要组织相容性复合物,在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达,可以延长移植物的存活时间。目的:设计HLA-a2小干扰RNA,检测其对HLA-a2表达沉默的作用。方法:设计4种HLA-a2 ... 详细信息

背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人的主要组织相容性复合物,在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达,可以延长移植物的存活时间。目的:设计HLA-a2小干扰RNA,检测其对HLA-a2表达沉默的作用。方法:设计4种HLA-a2 siRNA靶点序列构建其慢病毒表达体系,体外感染HLA-A过表达的293T细胞,观察4种靶点的敲减效率并筛选出有效靶点序列。体外培养人胚肺成纤维细胞,并用携带目的干扰序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Western blot检测在人胚肺成纤维细胞中对HLA-a2表达沉默的作用。结果与结论:根据Genbank中HLA-a2的mRNA序列,设计合成了3个小干扰RNA,在体外能有效的沉默HLA-a2在293细胞中的表达,将基因序列亚克隆入干扰载体后感染人胚肺成纤维细胞,也能有效的沉默HLA-a2的表达,效率达80%左右。

关键词： HLA抗原 RNA干扰基因沉默成纤维细胞组织构建组织工程人类白细胞抗原a2 人胚肺成纤维细胞辽宁省自然科学基金

MAGE-A3、HLA-A1及HLA-a2在食管鳞癌中的表达及其相关性研究

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MAGE-A3、HLA-A1及HLA-A2在食管鳞癌中的表达及其相关性研究

作者：王丽郑州大学

学位级别：硕士

肿瘤严重危害人类的健康及生命,特别是恶性肿瘤,具有很高的致死率。食管癌发病率占全部恶性肿瘤的1%～2%,仅次于胃癌位居第2位,世界范围内因癌症死亡的病例中,食管癌位居第6位。我国为食管癌高发区,在进入21世纪时,仍有900万居民面临食... 详细信息

肿瘤严重危害人类的健康及生命,特别是恶性肿瘤,具有很高的致死率。食管癌发病率占全部恶性肿瘤的1%～2%,仅次于胃癌位居第2位,世界范围内因癌症死亡的病例中,食管癌位居第6位。我国为食管癌高发区,在进入21世纪时,仍有900万居民面临食管癌的威胁,每年约有18万人死于食管癌。目前治疗食管癌的三大传统疗法-外科手术、放疗和化疗各有其局限性,无法根除肿瘤。近年来随着分子生物学和基因工程技术的发展,根据肿瘤生物学特性,以基因免疫治疗为代表的生物治疗方法成为一个重要的研究方向,构成肿瘤尤其是恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分。肿瘤基因免疫治疗依赖于细胞免疫和体液免疫两大免疫系统的活化,具有肿瘤高度特异性的特点,对正常细胞及组织几乎不产生损伤。保证免疫治疗成功的关键是发现并鉴定肿瘤特异性抗原,黑色素瘤相关抗原3(melanoma-associated antigens 3, MAGE-A3)作为人类已经发现并鉴定的肿瘤特异性抗原,除了睾丸和胎盘之外的正常组织以及良性肿瘤中不表达外,广泛表达于人体的多种肿瘤组织及细胞,如黑色素瘤、头颈部鳞癌、食管癌,肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌等。人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)是免疫系统中的重要组成部分,参与机体递呈抗原,决定免疫细胞对肿瘤的识别和杀伤,它与肿瘤的关系一直备受关注。HLA-Ⅰ类分子主要捕获细胞内病原体的抗原肽,并递呈给免疫系统。HLA-Ⅱ类分子主要处理外源性抗原。人体内HLA-I类分子可以将MAGE-A3所编码的蛋白中某些多肽递呈于细胞表面,后者可被自体细胞毒性T淋巴细胞(autologous cytotoxic T lymphocyte, CTLs)识别,所以,MAGE-A3是一种CTLs介导的特异性免疫治疗的理想靶分子。在MAGE-A3抗原蛋白上存在许多抗原决定簇,它们可以与不同的HLA-I类分子相结合,诱导产生特异性的CTLs来杀伤MAGE-A3阳性的肿瘤细胞。所以针对肿瘤细胞的特异性细胞免疫治疗的成败与否,在很大程度上取决于HLA-I类分子的参与。效应性T淋巴细胞上的TCR识别并结合HLA-I类分子/MAGE-A3抗原肤复合体后,该细胞才能被有效地激活。在我国HLA-A1和HLA-a2在食管癌患者中具有较高的分布频率,因此,了解MAGE-A3、HLA-A1及HLA-a2分子在食管癌患者中的表达及分布情况,就可以对应用MAGE-A3抗原肽特异性免疫治疗食管癌的可能性及有效性进行估测。材料与方法1.标本收集：本研究共收集60例食管癌组织、30例癌周3cm以内的不典型增生组织及3cm以外的30例正常食管黏膜组织。癌组织经无RNA酶水冲洗以清除可能污染的瘤细胞后,再切取肿瘤组织,常规石蜡包埋,切片,不典型增生组织及正常食管黏膜组织离体40min内迅速放入-80℃冰箱保存。2MAGE-A3基因的表达检测及重组抗原的制备：RT-PCR法检测MAGE-A3在食管癌组织中的表达情况。采用DNA重组技术将MAGE-A3全长cDNA克隆到pET30a(+)载体上,转化为大肠杆菌BL21(DE3), IPTG诱导表达,经SDS-GAGE和westernblot鉴定后,制备其可溶性蛋白,研究其对T细胞增殖能力的影响。***-A1和HLA-a2基因的表达：用间接过氧化酶免疫组织化学法对食管癌组织石蜡切片进行检测并综合分析。4.统计学处理：SPSS13.0进行数据整理和分析。对数值变量,首先作正态性和方差齐性检验,符合正态分布和方差齐性条件的作t检验和方差分析,不符合正态分布和方差齐性条件的作非参数检验进行不同组间差异的分析。对分类变量,作χ2检验。检验水准α=0.05。结果1MAGE-A3抗原蛋白表达情况：共提取所有标本蛋白120例。其中癌组织60例,Western blot方法检测发现有21例癌组织为MAGE-A3抗原阳性,阳性率为35.00%。另外还在食管不典型增生组织中发现有2例MAGE-A3表达阳性。成功获得MAGE-A3可溶性蛋白,人T细胞能够对自身抗原呈递细胞加工处理的MAGE-A3蛋白产生应答。2MAGE-A3抗原与与食管癌预后的关系：MAGE-A3抗原阳性(84.20%)的食管鳞癌患者手术后18个月的生存率明显高于其抗原阴性者(57.60%)。3HLA-A1和-a2基因分布情况：食管癌组织中HLA-A1、-a2的阳性率分别为8.33%(56/60)、53.33%(32/60);食管不典型增生组织中HLA-A1、-a2的阳性率分别为6.66%(2/30)、46.66%(14/30);正常食管黏膜组织中中HLA-A1、-a2的阳

关键词：黑色素瘤相关抗原3 人类白细胞抗原A1 人类白细胞抗原a2 食管癌聚合酶链反应蛋白印迹

慢性HBV感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系研究

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检验医学与临床 2014年第18期11卷 2571-2572页

作者：韩海霞吴玉兰陈琳吴月平邵建国江苏省南通市第三人民医院 226006

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系。方法选择51例慢性乙型肝炎患者（A组）、43例乙型肝炎肝硬化患者（B组）和40例体检健康者（C组）外,采用流式细胞术检测人类白细胞抗原a2（HLA-a2）,采用H... 详细信息

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系。方法选择51例慢性乙型肝炎患者（A组）、43例乙型肝炎肝硬化患者（B组）和40例体检健康者（C组）外,采用流式细胞术检测人类白细胞抗原a2（HLA-a2）,采用HLA-a2限制的HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（Pro5MHC）法检测Pro5MHC、CD8双阳性细胞[HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）],并比较不同HBV DNA水平患者各指标检测结果。结果 A组、B组HLA-a2阳性率均明显高于C组（P〈0.05）。随着HBV DNA水平的升高,HBV特异性CTL水平逐渐减低（P〈0.05）,但CD8＋细胞水平无明显变化（P〉0.05）。HBV DNA水平大于105 copies/mL的患者,Pro5MHC/CD8＋水平明显低于HBV DNA水平为103-105 copies/mL的患者以及HBV DNA水平小于103 copies/mL的患者（P〈0.05）。结论 HLA-a2是乙型肝炎肝硬化的易感基因之一。HBV感染患者体内HBV特异性CTL水平随着病毒复制程度的升高而减低。Pro5MHC/CD8＋可作为判断病毒复制程度的客观指标。

关键词：特异性细胞免疫人类白细胞抗原a2 慢性乙型肝炎肝硬化

MAGE-12的HLA-a2限制性CTL表位肽预测及其三维结构构建

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国际检验医学杂志 2012年第20期33卷 2470-2474页

作者：李艳秋鲍布和高默杰倪兵吴玉章武警后勤学院附属医院检验科天津300162 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的从理论上分析、预测黑色素瘤抗原(MAGE)-12的人类白细胞抗原(HLA)-a2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽,并构建其三维结构。方法以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构... 详细信息

目的从理论上分析、预测黑色素瘤抗原(MAGE)-12的人类白细胞抗原(HLA)-a2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽,并构建其三维结构。方法以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法。结果预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-a2限制性CTL表位要求。结论预测出的4个HLA-a2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究。

关键词：肿瘤抗原黑色素瘤抗原12 表位人类白细胞抗原a2