HLA-A2小干扰RNA的设计及沉默效果检测

作     者：刘建生 赵刚 裴丹 郑德宇 Liu Jian-sheng;Zhao Gang;Pei Dan;Zheng De-yu

作者机构：辽宁医学院解剖学教研室辽宁省锦州市121001 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2014年第18卷第29期

页      面：4605-4610页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：辽宁省自然科学基金资助项目(2013022066 2013022048) 辽宁省教育厅项目(L2013335) 辽宁医学院青年基金项目(Y2011Z022)~~ 

主　　题：HLA抗原 RNA干扰 基因沉默 成纤维细胞 组织构建 组织工程 人类白细胞抗原A2 人胚肺成纤维细胞 辽宁省自然科学基金 

摘      要：背景:人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是人的主要组织相容性复合物,在移植排斥反应中起关键作用。降低HLA的表达,可以延长移植物的存活时间。目的:设计HLA-A2小干扰RNA,检测其对HLA-A2表达沉默的作用。方法:设计4种HLA-A2 siRNA靶点序列构建其慢病毒表达体系,体外感染HLA-A过表达的293T细胞,观察4种靶点的敲减效率并筛选出有效靶点序列。体外培养人胚肺成纤维细胞,并用携带目的干扰序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Western blot检测在人胚肺成纤维细胞中对HLA-A2表达沉默的作用。结果与结论:根据Genbank中HLA-A2的mRNA序列,设计合成了3个小干扰RNA,在体外能有效的沉默HLA-A2在293细胞中的表达,将基因序列亚克隆入干扰载体后感染人胚肺成纤维细胞,也能有效的沉默HLA-A2的表达,效率达80%左右。