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人类杯状病毒流行病学及疫苗研究进展

临床儿科杂志 2006年第2期24卷 151-154页

作者：黄湘金玉兰州医学院第一附属医院儿科甘肃兰州730000

人类杯状病毒(human caliciviruses,HuCV)是世界范围内仅次于轮状病毒引起非细菌性腹泻的重要病原,虽然其毒性较弱且发病过程具有自限性,但传染性很强,随着检测手段和分子生物学技术的发展,HuCV的重要性和危害性逐渐得到认识,其流行病... 详细信息

人类杯状病毒(human caliciviruses,HuCV)是世界范围内仅次于轮状病毒引起非细菌性腹泻的重要病原,虽然其毒性较弱且发病过程具有自限性,但传染性很强,随着检测手段和分子生物学技术的发展,HuCV的重要性和危害性逐渐得到认识,其流行病学特征及疫苗研究也日益受到重视,现就 HuCV的结构、特性、流行病学特征及疫苗研究作一综述.

关键词：人类杯状病毒疫苗研究病毒流行病学流行病学特征分子生物学技术非细菌性腹泻世界范围内轮状病毒发病过程检测手段

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人类杯状病毒医院感染调查研究

中华医院感染学杂志 2012年第7期22卷 1333-1335页

作者：曾爱华金小宝朱家勇广东药学院药科学院药理系广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的调查研究广州地区人类杯状病毒(HuCV)的感染流行特征。方法收集广东省中医院病毒性腹泻粪便标本380份,用荧光定量PCR方法检测样本中的HuCV[包括诺瓦克样病毒(NLVs)和扎幌样病毒(SLVs)]核酸。结果人类杯状病毒总检出率为28.68%,其中N... 详细信息

目的调查研究广州地区人类杯状病毒(HuCV)的感染流行特征。方法收集广东省中医院病毒性腹泻粪便标本380份,用荧光定量PCR方法检测样本中的HuCV[包括诺瓦克样病毒(NLVs)和扎幌样病毒(SLVs)]核酸。结果人类杯状病毒总检出率为28.68%,其中NLVs和SLVs检出率分别为22.89%、7.11%;HuCV在4个季度的感染率分别为46.29%、10.09%、6.42%和36.70%;另外,1例样本同时感染了GⅡ型NLVs和GⅡ型SLVs,有4例样本同时感染了GⅠ、GⅡ型NLVs。结论 HuCV是导致广州地区病毒性腹泻的重要病原体之一,高发期集中在第一、四季度,诺瓦克样病毒在HuCV感染中占主导作用;广州地区存在着HuCV不同基因型的混合感染。

关键词：人类杯状病毒基因型感染流行

人类杯状病毒的pET-28a（+）-SVA构建及高效表达和LAMP法检测

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人类杯状病毒的pET-28a（+）-SVA构建及高效表达和LAMP法检测

作者：陈宗峰福建师范大学

学位级别：硕士

人类杯状病毒(Human caliciviruses,HucV)包括诺如病毒属(NV)和札如病毒属(SV),是导致胃肠炎和病毒性腹泻的重要病毒之一。目前分离和研究较多的是NV,而SV国内基础研究资料的匮乏,给病毒的检测和疫苗的研制带来了很多困难。本课题研究... 详细信息

人类杯状病毒(Human caliciviruses,HucV)包括诺如病毒属(NV)和札如病毒属(SV),是导致胃肠炎和病毒性腹泻的重要病毒之一。目前分离和研究较多的是NV,而SV国内基础研究资料的匮乏,给病毒的检测和疫苗的研制带来了很多困难。本课题研究工作的目的在于:构建SV原核表达载体,并以此为代表表达人类杯状病毒衣壳蛋白,同时建立环介导等温扩增技术检测方法。对认识病毒感染的本质,快速诊断,研制疫苗以及抗病毒药物提供重要的基础资料,对了解婴幼儿腹泻的发病机制及疾病的预防具有重大的指导意义。本课题包括两个部分:一是对人类杯状病毒衣壳基因序列进行人工合成、然后克隆构建原核表达载体,并表达。二是建立环介导等温扩增技术检测人类杯状病毒的方法。一、设计引物,人工合成SV衣壳基因,TA克隆后测定其核苷酸序列。将其定向克隆入pET-28a(+)载体,构建新的原核表达载体,经菌落PCR和酶切鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。通过适当的培养基组成、接种量、诱导OD值、IPTG浓度和诱导时间等因素表达SV衣壳蛋白。最后,收集菌体,破菌,离心,分离上清和包涵体。SDS-PAGE显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在。Western-blotting结果显示,SV蛋白能够特意地与六组氨酸抗体发生免疫反应,在15kd处有一条明显的条带。二、环介导等温扩增(简称LAMP)是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术,电泳后在凝胶上显现出由不同大小的区带组成的阶梯式图谱。本实验建立了环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测人类杯状病毒的方法,该方法与传统PCR方法相比,LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备等优点,为临床检测腹泻病毒快速简便的新方法。

关键词：人类杯状病毒诺如病毒札如病毒克隆衣壳蛋白表达环介导等温扩增

广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒感染的分子流行病学研究

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南方医科大学学报 2006年第7期26卷 967-970页

作者：詹惠春聂军刘翼唐亚丽戴迎春李建栋陈清俞守义南方医科大学公共卫生与热带医学学院流行病学教研室广东广州510515

目的了解广州某医院秋冬季儿童腹泻中人类杯状病毒(HuCV)感染的分子流行病学特点。方法连续2个秋冬季腹泻流行季节收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本。采用ELISA检测轮状病毒,RT-PCR检测HuCV。部分阳性标本PCR产物进行纯化、测序... 详细信息

目的了解广州某医院秋冬季儿童腹泻中人类杯状病毒(HuCV)感染的分子流行病学特点。方法连续2个秋冬季腹泻流行季节收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本。采用ELISA检测轮状病毒,RT-PCR检测HuCV。部分阳性标本PCR产物进行纯化、测序,结合参考株相应核苷酸序列进行进化分析。结果诺瓦克样病毒(Norwalk-likevirus,NLVs)阳性率为12.35%(80/648),扎幌样病毒(Sapporo-likevirus,SLVs)阳性率为0.31%(2/648)。NLVs各月阳性率无显著性差异,主要感染2岁以下患儿。2003年流行株为GⅡ-3群和GⅡ-4群,2004年为GⅡ-4群。2株SLVs均为GⅠ-1群。结论NLVs是广州地区秋冬季节儿童腹泻的重要病原体,其流行株为GⅡ-3群、GⅡ-4群病毒株,但在不同的时间段可能存在不同的流行优势株;广州地区存在SLVs所致感染,与我国报告的SLV基因型不同。

关键词：人类杯状病毒诺瓦克样病毒扎幌样病毒轮状病毒基因型

2009—2010年南京地区腹泻婴幼儿中人类杯状病毒感染流行病学特点分析

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临床儿科杂志 2012年第10期30卷 924-927页

作者：林谦程卫霞金玉李玫练敏周进苏陆芬段招军南京医科大学附属南京儿童医院消化科江苏南京210008 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

目的研究南京地区5岁及以下腹泻患儿人类杯状病毒感染的分子流行病学特点。方法2009年7月至2010年6月在南京儿童医院共采集1-59个月的腹泻患儿粪便标本300份，采用多重RT-PCR方法检测人类杯状病毒（诺如病毒、札如病毒）。结果300份标... 详细信息

目的研究南京地区5岁及以下腹泻患儿人类杯状病毒感染的分子流行病学特点。方法2009年7月至2010年6月在南京儿童医院共采集1-59个月的腹泻患儿粪便标本300份，采用多重RT-PCR方法检测人类杯状病毒（诺如病毒、札如病毒）。结果300份标本中71份检出人杯状病毒，检出率23．67％。其中，诺如病毒67份，其中58份为GⅡ／4基因型（2006b亚型），8份为GⅡ／3基因型，1份为GⅡ／12基因型；扎如病毒4份，其中2份为GⅠ／1基因型，GⅠ／2和GⅡ／1基因型各1份。结论人类杯状病毒是南京地区腹泻婴幼儿中的主要病原体之一，主要的流行优势株是诺如病毒GⅡ／4基因型（2006b亚型）

关键词：腹泻人类杯状病毒流行病学基因型儿童

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广州地区贝类中人类杯状病毒感染调查研究

食品研究与开发 2011年第10期32卷 155-158页

作者：曾爱华金小宝朱家勇广东药学院药科学院广东广州510008 广东药学院基础学院广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510008

从2007年10月-2009年9月，在广州市水产品市场收集127个牡蛎、94个毛蚶、342个花蛤、265个带子，采用荧光定量PCR方法检测人类杯状病毒HuCV的感染，旨在为贝类的安全监控提供基础研究资料。研究结果表明：牡蛎的HuCV阳性检出率最高，为2... 详细信息

从2007年10月-2009年9月，在广州市水产品市场收集127个牡蛎、94个毛蚶、342个花蛤、265个带子，采用荧光定量PCR方法检测人类杯状病毒HuCV的感染，旨在为贝类的安全监控提供基础研究资料。研究结果表明：牡蛎的HuCV阳性检出率最高，为24.4l％（31／127）；毛蚶和带子样品中HuCV，4-阳性率分别为11．70％（11／94）和1．89％（5／265）；而花蛤中未检出HuCV。牡蛎中存在着人类杯状病毒不同基因型的混合感染。结果还显示贝类中的HuCV感染一般在秋冬季节流行：在2007年10月～2008年2月和2008年10月-2009年2月期间，牡蛎中HuCV总检出率分别为23．08％（12／52）和35．85％（19／53）；而在2008、2009年的3月～9月间，牡蛎中均未发现HuCV感染。

关键词：贝类人类杯状病毒感染流行

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人类杯状病毒的研究进展

国外医学（病毒学分册） 2003年第4期10卷 128-128,F002-F0043页

作者：戴迎春李志峰聂军第一军医大学热带卫生系流行病教研室广州510515

随着检测手段的进步和分子生物学技术的发展 ,人类杯状病毒 (Hu CVs)的重要性和危害性逐渐得以认识。本文就目前 Hu CVs的研究进展和进一步的研究方向作一综述。

关键词：人类杯状病毒诺瓦克样病毒 NLVs 扎幌样病毒 SLVs HuCVs 流行病学非菌性急性胃肠炎病原学

广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒分子流行病学、临床特征及感染的危险因素研究

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广州儿童秋冬腹泻中人类杯状病毒分子流行病学、临床特征及感染的...

作者：刘翼第一军医大学

学位级别：硕士

研究背景、目的、意义人类杯状病毒(Human Calicivirus,HuCV)包括诺瓦克样病毒(Norovirus,NVs or Norwalk-like virus,NLVs)和扎幌样病毒(Sappovirus,SVs or Sapporo-like virus,SLVs),是导致人类急性胃肠炎的常见病原体,也是仅次于轮状病毒导致儿童急性腹泻的重要病原体。 NLVs与SLVs分别是在1968年、1977年的美国俄亥俄州的Norwalk地区及日本扎幌地区发现的。此后,在世界多个国家均检测到此两类病毒,NLVs又曾被称为小RNA病毒、小圆结构病毒。1998年国际病毒分类委员会根据病毒形态、结构、抗原特性、基因序列和遗传进化分析等研究成果,将此两类病毒归入杯状病毒科。HuCV毒株间具有很大的核苷酸序列多样性,依据基因结构中RNA多聚酶及壳蛋白区域序列的差异,将NLVs分为三个遗传组(genetic group),每一遗传组又分别包括多个不同的群(cluster)。SLVs分为三个基因型,五个基因亚型。Farkas等最近研究表明,SLVs存在更多的基因型与基因亚型,表明了HuCV基因的多样性。长期以来,由于检测方法的局限,对HuCV给人类造成的危害及其严重程度缺乏正确的认识,常常低估其危害。1992年以美籍学者JiangXi为首的研究组建立并发展了RT-PCR方法检测HuCV后,HuCV所致疾病的危害性和严重性越来越被研究者重视。 HuCV呈全球流行趋势,已成为人类非菌性急性胃肠炎暴发和散发的最主要原因之一。在1997年7月-2000年6月美国发生的233起非菌性急性胃肠炎的暴发

关键词：人类杯状病毒诺瓦克样病毒扎幌样病毒轮状病毒临床特征危险因素

浙江地区急性腹泻患者中人类杯状病毒分子流行病学研究

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浙江地区急性腹泻患者中人类杯状病毒分子流行病学研究

作者：诸葛小玲浙江大学

学位级别：硕士

[背景和目的]人类杯状病毒(Human Caliciviruses, HuCVs)包括诺如病毒(Norovirus, NV)和札如病毒(Sapovirus, SAV),是引起全世界人类非细菌性急性胃肠炎暴发的主要病原,也是仅次于轮状病毒引起婴幼儿急性腹泻散发的常见病原之一诺如病... 详细信息

[背景和目的]人类杯状病毒(Human Caliciviruses, HuCVs)包括诺如病毒(Norovirus, NV)和札如病毒(Sapovirus, SAV),是引起全世界人类非细菌性急性胃肠炎暴发的主要病原,也是仅次于轮状病毒引起婴幼儿急性腹泻散发的常见病原之一诺如病毒又称诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus),最初由Kapikian等在1972年通过免疫电镜的方法从美国俄亥俄州诺瓦克镇一起非细菌性胃肠炎暴发的患者粪便中分离得到;札如病毒(Sapovirus, SAV)以前称札幌样病毒(Sapporo-like virus),因最初于1977年在日本札幌市被发现而命名,是人和猪非细菌性急性胃肠炎的主要病原体之一。长期以来,由于对杯状病毒缺乏简易、敏感的检测手段,使其导致人类患病的危害被严重低估。近年来,随着对杯状病毒分子流行病学研究的深入,其重要性和危害性正逐渐被全面、系统的认识。2005年1月,加拿大和美国相继宣布暴发NV感染,引起了人们的广泛关注。2006年11月,日本、新加坡、意大利等地相继发生了NV集体感染事件,特别是日本暴发了25年来最严重的传染性胃肠炎疫情,不到两个月累计发生35.76万人感染NV,引起了全球的广泛关注。同期我国包括北京、广东佛山、福建等省市均出现NV疫情,据全国病毒性腹泻监测网对11个省份5岁以下腹泻儿童的监测,NV检出率为15%左右。由于该病毒传染性很强,常可导致突发性公共卫生事件,美国已将其列为乙类生物恐怖因子。美国疾病控制中心(CDC)最新估计,96%的非细菌胃肠炎暴发与NV有关,而SAV则是婴儿和小龄儿童病毒性腹泻的主要病原体。我国对诺如病毒的研究起步较晚,1995年方肇寅等首次在我国婴幼儿腹泻粪便标本中检测到诺如病毒。此后,北京、长春、河北、兰州、广州、福州等地均在儿童腹泻粪便标本中检出NV。最近方肇寅等人在对1999年至2005年来自我国13个地区的婴幼儿腹泻粪便HuCVs研究中其阳性率为8.3%-38.6%,主要以NV为主,检出率仅次于RV,表明我国AGE病例中NV感染也相当普遍。札如病毒在世界各地都有报道,2005年2月,日本某幼儿园中23人(包括6名成人)感染SAV病毒。我国上海交大华修国等于2008年在国内不明原因腹泻人群与腹泻仔猪体内分离到一种新的杯状病毒,经过鉴定和动物回归实验证明该病毒为SAV。目前,国际上SAV的总体研究水平还处于起步阶段。虽然杯状病毒感染在我国普遍存在,但是浙江地区杯状病毒感染的分子流行特征尚缺乏系统研究,因此,研究杯状病毒在浙江地区的分子流行病学规律、流行毒株特征及进化情况,可以为本地区杯状病毒引起的急性腹泻的防治提供科学依据,对我国急性腹泻的预防控制工作也具有重要意义。[对象和方法]1.研究对象2009年1月至2011年1月来自浙江地区5个哨点医院肠道门诊(包括杭州、宁波、绍兴、湖州、衢州)就诊的急性腹泻患者3153例,包括5岁以下婴幼儿和成人。每日腹泻次数超过3次或大便性状出现明显异常(水泻样、蛋花汤样、粘液样或粘糊样)定义为腹泻病例。2.实验方法2009-2011年监测期间连续收集以上3153例急性腹泻患者的粪便标本,并同时进行调查,填写调查表,电话随访完善调查表。对收集的标本采用多重PCR方法进行轮状病毒(RV)、杯状病毒(NV和SAV)等病毒检测,并选取部分扩增后的杯状病毒阳性产物进行序列测定,应用DNAMAN(5.***.0.0)和MEGA4.0软件对杯状病毒和相关参考株进行序列的多重比对和系统进化分析。[结果]1.2009年1月至2011年1月,本研究共检测浙江地区3153份急性腹泻标本,杯状病毒检出率较高,为18.42%,仅次于轮状病毒的检出率(20.10%)。2.诺如病毒共检出265份(12.36%,265/2144;52份为NV-G基因型,213份为NV-GⅡ基因型);札如病毒检出率为6.06%(130/2144)。杯状病毒感染全年均有发生,以冬春季节(11-4月)感染较多,另外夏季(6-8月)检出率也相对较高。3.随机抽取15株诺如病毒和10株SAV进行测序分析,NV基因型别包括：G Ⅰ-1(3株)、G Ⅰ-2(1株)、G Ⅱ-4/2006b变异株(7株)、G Ⅱ-2(1株)、G Ⅱ-7(1株)和G Ⅱ-4/2008变异株(2株);SAV基因型别包括：G Ⅰ-2(5株)、G Ⅰ-1(4株)和G Ⅱ-1(1株)。[结论]1.杯状病毒是浙江地区引起急性腹泻的一个重要病原,仅次于轮状病毒的检出率

关键词：人类杯状病毒诺如病毒札如病毒分子流行病学进化