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华西医科大学学报 2002年第1期33卷 94-97页

作者：何晓嫱陈俊杰王若菡游乐然刘戟陈建业林佳四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学研究所 UniversityofMaryland BaltimoreMD21201USA

目的　为进一步研究神经生长因子 (β- NGF)及其基因的结构及功能奠定基础。方法　自行设计合成一对特异引物 ,直接从人血细胞基因组 dna中 PCR扩增出 NGF基因片段 ,克隆至 p GEM- T Easy载体 ,p GEM- T- NGF克隆片段再定向插入原核表... 详细信息

目的　为进一步研究神经生长因子 (β- NGF)及其基因的结构及功能奠定基础。方法　自行设计合成一对特异引物 ,直接从人血细胞基因组 dna中 PCR扩增出 NGF基因片段 ,克隆至 p GEM- T Easy载体 ,p GEM- T- NGF克隆片段再定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T,构建的重组体 p5 TNF转化大肠杆菌 JM10 9并经IPTG诱导表达。结果　经限制性酶谱和 dna测序确证 ,p GEM- T- NGF克隆片段为 β- NGF全长编码序列(380 bp) ;SDS- PAGE、分光光度计扫描和 Western印迹显示 ,p5 TNF转化菌有 40 .5× 10 3u特异区带 ,融合蛋白表达量为 5 0 3.2 mg/ L,占菌体可溶性蛋白总量 (7.4g/ L) 6 .8% ,该产物具 NGF抗原活性。结论　本研究成功克隆 β-NGF基因全长编码序列并在大肠杆菌中获稳定表达 ,同时证实国人 β-

关键词：人基因组dna 神经生长因子大肠杆菌基因表达基因治疗

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人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达

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作者：白艳艳苏州大学

学位级别：硕士

人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达神经生长因子(Nerve growth factor, NGF)是最重要的神经营养因子之一，在神经、免疫、造血、生殖及内分泌等系统均有重要生物学作用，尤其在神经系统中的作用已被公认。NGF对调节神... 详细信息

人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达神经生长因子(Nerve growth factor, NGF)是最重要的神经营养因子之一，在神经、免疫、造血、生殖及内分泌等系统均有重要生物学作用，尤其在神经系统中的作用已被公认。NGF对调节神经元的生长、发育、分化、存活及神经损伤的再生修复均具有重要作用，在Alzheimer’s病、脊髓损伤和外周神经病变等疑难性神经系统疾病中已证实有较好治疗效果。天然NGF可从表达丰富的人组织中直接提取，但操作中存在诸多问题，远不能满足临床用药的需要，且因为NGF是大分子蛋白，不易透过血脑屏障，故治疗受到限制。NGF分子的β链是具有NGF活性的小分子片段，能穿过血脑屏障。为了能寻求一种切实可行及表达高活性小分子NGF的生产途径，我们通过基因工程和细胞工程技术设计了两种NGF的体外重组方案。第一部分人β-NGF基因与原核表达载体PBV220-β-NGF的构建及其在大肠杆菌中的表达目的为β-NGF的基因制药选择一种新方法。方法设计一对特异引物，直接从人血细胞基因组dna中PCR扩增出NGF基因片段，先克隆至PUC-T载体中，经过酶切获得NGF片段后再定向插入原核表达载体PBV220，将构建的重组体PBV220-β-NGF转化大肠杆菌DH5α，并将筛选的阳性克隆通过42℃诱导表达。结果人日一NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵果细胞中的表达中文摘要经限制酶酶切电泳和dna测序证实，确为p一GF全长序列(约 380bp);全菌经SDS一队GE电泳和薄层扫描显示，p一NGF蛋白量占菌体总蛋白量20.7%。结论成功克隆pGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达，其生物学活性有待于进一步研究。

关键词：人基因组dna 神经生长因子大肠杆菌基因表达

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人β-NGF基因在大肠杆菌中的表达

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苏州大学学报（医学版） 2004年第4期24卷 466-468页

作者：白艳艳杨吉成李丽娥盛伟华谢宇锋缪竞诚苏州大学基础医学系细胞和分子生物学教研室江苏苏州215007

目的　为 β NGF的基因制药选择一种新方法。方法　直接从人血细胞基因组dna中PCR扩增出 β NGF基因片段 ,将构建的重组体 pBV2 2 0 β NGF转化大肠杆菌DH5α,并将筛选的阳性克隆通过 4 2℃诱导表达。结果　经限制酶酶切电泳和dna测... 详细信息

目的　为 β NGF的基因制药选择一种新方法。方法　直接从人血细胞基因组dna中PCR扩增出 β NGF基因片段 ,将构建的重组体 pBV2 2 0 β NGF转化大肠杆菌DH5α,并将筛选的阳性克隆通过 4 2℃诱导表达。结果　经限制酶酶切电泳和dna测序证实 ,确为 β NGF全长序列 (约 380bp) ;全菌经SDS PAGE电泳显示表达了 β NGF蛋白。结论　成功克隆了 β NGF基因全长序列并在大肠杆菌中获稳定表达。

关键词：人基因组dna 神经生长因子大肠杆菌基因表达

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