人神经生长因子基因在大肠杆菌中的表达

作     者：何晓嫱 陈俊杰 王若菡 游乐然 刘戟 陈建业 林佳 

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学研究所 UniversityofMarylandBaltimoreMD21201USA 

出 版 物：《华西医科大学学报》 (Journal of West China University of Medical Sciences)

年 卷 期：2002年第33卷第1期

页      面：94-97页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：人基因组DNA 神经生长因子 大肠杆菌 基因表达 基因治疗 

摘      要：目的 为进一步研究神经生长因子 (β- NGF)及其基因的结构及功能奠定基础。方法 自行设计合成一对特异引物 ,直接从人血细胞基因组 DNA中 PCR扩增出 NGF基因片段 ,克隆至 p GEM- T Easy载体 ,p GEM- T- NGF克隆片段再定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T,构建的重组体 p5 TNF转化大肠杆菌 JM10 9并经IPTG诱导表达。结果 经限制性酶谱和 DNA测序确证 ,p GEM- T- NGF克隆片段为 β- NGF全长编码序列(380 bp) ;SDS- PAGE、分光光度计扫描和 Western印迹显示 ,p5 TNF转化菌有 40 .5× 10 3u特异区带 ,融合蛋白表达量为 5 0 3.2 mg/ L,占菌体可溶性蛋白总量 (7.4g/ L) 6 .8% ,该产物具 NGF抗原活性。结论 本研究成功克隆 β-NGF基因全长编码序列并在大肠杆菌中获稳定表达 ,同时证实国人 β-