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五味子醇甲对小鼠神经管畸形的预防作用及机制研究

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解放军医学杂志 2023年

作者：茹意谢良骐王新亮肖保国金小明马存根柴智樊慧杰山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心复旦大学华山医院神经病学研究所美国印第安纳大学医学院

目的观察五味子醇甲（SCH）对小鼠神经管畸形（NTDs）的预防作用及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法将C57BL/6小鼠按照雌雄2∶1比例合笼，将交配后有阴栓的雌鼠（孕鼠）随机分为对照组、模型组、SCH组、叶酸组，每组9只。除对照组外... 详细信息

目的观察五味子醇甲（SCH）对小鼠神经管畸形（NTDs）的预防作用及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法将C57BL/6小鼠按照雌雄2∶1比例合笼，将交配后有阴栓的雌鼠（孕鼠）随机分为对照组、模型组、SCH组、叶酸组，每组9只。除对照组外，在孕鼠妊娠7.5 d(E 7.5 d)时腹腔注射全反式维甲酸（atRA）(7.5 mg/kg)诱导胎鼠NTDs模型；在E 0.5 d—E 11.5 d期间，叶酸组孕鼠连续灌胃给予叶酸（61.0μg/kg/d）,SCH组孕鼠连续灌胃给予SCH(8.0 mg/kg/d),1次/d；在E 11.5 d实行剖宫产手术取出胎鼠。将PC12细胞分为对照组、模型组、SCH组，模型组采用atRA(20μmol/L)干预12h建立细胞损伤模型，SCH组再使用SCH(2.5μmol/L)干预24 h。体视显微镜下鉴定胎鼠NTDs;HE染色观察胎鼠神经管闭合情况；Western Blotting检测磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B (PI3K/Akt)信号通路p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果与对照组比较，模型组胎鼠NTDs发病率明显升高（P0.05）,SCH组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显增高（P<0.05）。与对照组比较，模型组PC12细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平降低（P<0.05）；与模型组比较，SCH组PC12细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平增高（P<0.05）。结论 SCH可降低atRA导致的胎鼠NTDs发病率，其预防效果优于叶酸，这可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：神经管畸形五味子醇甲 PI3K/Akt信号通路预防

五味子醇甲通过调控自噬流减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

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中国病理生理杂志 2021年第2期37卷 269-276页

作者：臧瑞郭涛李旭华杨继苹何红云武煜明邓仪昊云南中医药大学云南昆明650500 昆明理工大学云南昆明650500

目的:探究五味子醇甲(Sch A)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其潜在机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组[大脑中动脉闭塞(MCAO)组]及Sch A低、中、高剂量治疗组,每组6只。制备大鼠左侧MCAO模型,90 min后再灌注... 详细信息

目的:探究五味子醇甲(Sch A)减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其潜在机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组[大脑中动脉闭塞(MCAO)组]及Sch A低、中、高剂量治疗组,每组6只。制备大鼠左侧MCAO模型,90 min后再灌注,治疗组Sch A的剂量分别为40、80和160μg·kg^(−1)·d^(−1)。造模7 d后进行神经功能损伤方面的评价(mNSS评分),并用TTC染色检测MCAO大鼠脑梗死体积。通过Western blot检测MCAO大鼠脑缺血半影区神经元自噬相关蛋白P62、LAMP1、cathepsin B和ubiquitin的表达水平,综合分析自噬流情况;使用免疫荧光双标法检测Sch A处理后MCAO大鼠脑缺血半影区神经元自噬水平诱导情况。结果:相比于MCAO组,Sch A处理后大鼠mNSS评分和脑梗死体积显著降低(P0.05)。免疫荧光结果显示,与MCAO组比较,Sch A处理提高了MCAO大鼠脑缺血半影区LC3-Ⅱ表达阳性的神经元比例,以Sch A高剂量组升高显著(P<0.01)。结论:Sch A可逆转MCAO大鼠脑缺血半影区cathepsin B、P62及ubiquitin表达水平而发挥抗脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与神经元自噬有关。

关键词：五味子醇甲脑缺血再灌注损伤自噬

五味子醇甲诱导缺血半影区神经元自噬提高脑卒中后神经保护

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第5期36卷 544-551页

作者：臧瑞杨继苹郭涛褚鑫张雪玉武煜明邓仪昊云南中医药大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学教研室昆明650500 昆明理工大学医学院解剖学教研室昆明650500

五味子醇甲(Schisandra A,Sch A)是五味子中具有生物活性的木脂素化合物,其神经保护作用已在多种神经系统疾病动物模型中得到验证。然而,五味子醇甲是否能通过影响大鼠脑缺血半影区神经元自噬活性对脑缺血再灌注大鼠模型产生神经保护作... 详细信息

五味子醇甲(Schisandra A,Sch A)是五味子中具有生物活性的木脂素化合物,其神经保护作用已在多种神经系统疾病动物模型中得到验证。然而,五味子醇甲是否能通过影响大鼠脑缺血半影区神经元自噬活性对脑缺血再灌注大鼠模型产生神经保护作用,尚缺乏系统研究。为探究Sch A对大鼠脑卒中后神经损伤及缺血半影区神经元自噬活性的影响,本研究将90只SD雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型组(MCAO)、Sch A低剂量组(40μg/kg)、Sch A中剂量组(80μg/kg)、Sch A高剂量组(160μg/kg),每组18只。线栓法制备大鼠大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,脑缺血持续90 min后进行再灌注,立即侧脑室给药,1/d,连续给药7 d。各组分别取6只大鼠进行神经功能评分后,取脑进行TTC染色检测脑梗死体积。另有6只大鼠取缺血半影区脑组织,通过Western印迹检测自噬相关蛋白质Beclin1、LC3-Ⅱ的表达水平。剩余6只大鼠脑组织用于免疫荧光双标,对Sch A改变的自噬活性进行细胞表达定位。研究结果显示,MCAO组大鼠脑梗死体积及神经功能损伤评分均显著高于Sham组(P<0.05),且Beclin1及LC3-Ⅱ的表达显著增加(P<0.05)。各Sch A治疗组大鼠脑梗死体积较未给药组显著减少(P<0.05),神经功能损伤得到明显改善(P<0.05)。同时,Sch A给药组Beclin1及LC3蛋白质表达水平明显升高(P<0.05),且免疫荧光双标显示该自噬活性改变主要呈现于神经元。以上结果表明,Sch A可显著减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,该神经保护作用与其提高缺血半影区神经元自噬活性密切相关。

关键词：五味子醇甲脑缺血再灌注自噬神经保护

五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导心肌肥大损伤的cT-I、cT-T、ET-1调控作用的影响

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中国兽医学报 2020年第8期40卷 1553-1559页

作者：杨敏姜兴粲冯海鹏王磊张康庞红红张景艳张凯李建喜王学智中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省中兽药工程技术研究中心甘肃兰州730050

培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10^-6mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,... 详细信息

培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10^-6mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,20 mg/L,作用48 h。通过观察HE染色细胞的形态变化,图像分析系统测定心肌细胞表面积,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色法检测心肌细胞的凋亡率,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot检测CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达。结果显示,五味子醇甲可降低心肌细胞凋亡率和提高心肌细胞存活率,对心肌细胞的形态具有改善作用,并下调了CT-1、CT-T、ET-1蛋白表达。结果表明,五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,可能通过下调CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达,降低炎性反应,减少对心肌细胞的损伤凋亡。

关键词：大鼠源H9C2心肌细胞五味子醇甲去甲肾上腺素心肌细胞肥大心肌肌钙蛋白I和T 内皮素-1

五味子醇甲对痴呆小鼠学习记忆能力的影响及机制研究

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中华神经医学杂志 2019年第4期18卷 325-330页

作者：朴钟源宋琳姚丽芬彭烨白晓蕾于水澜黑龙江省医院香坊院区神经内一科哈尔滨150036 黑龙江中医药大学基础医学院哈尔滨150040 哈尔滨医科大学附属第一医院神经内六科哈尔滨150001 黑龙江中医药大学研究生院哈尔滨150040 广东省惠州市第三人民医院神经内科

目的通过观察五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠学习记忆能力的影响及机制分析,探讨中药治疗阿尔茨海默病的效果。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠按随机数字表法分为模型组(n=17)和中药治疗组(n=18),另取10只雄性C57BL/6J... 详细信息

目的通过观察五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠学习记忆能力的影响及机制分析,探讨中药治疗阿尔茨海默病的效果。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠按随机数字表法分为模型组(n=17)和中药治疗组(n=18),另取10只雄性C57BL/6J小鼠为空白对照组。中药治疗组小鼠给予SCH悬浊液连续灌胃30 d[2.6 mg/(kg·d)],模型组和空白对照组小鼠同期灌胃等量蒸馏水。30 d后每组各取7只小鼠行Mirror水迷宫空间探索实验,随后处死小鼠通过Nissl染色观察脑组织神经元尼氏小体。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠脑组织晚期糖基化终产物受体(RAGE)mRNA含量;采用Western blotting检测小鼠脑组织RAGE、磷酸化P38(p-P38)蛋白的表达。结果(1)水迷宫空间探索实验结果显示,3组小鼠穿越平台区次数差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,中药治疗组穿越平台区次数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Nissl染色结果显示,与空白对照组比较,模型组小鼠海马CA1区及对应皮层区神经元内尼氏小体含量较空白对照组明显减少,染色浅,胞体萎缩;中药治疗组病变轻于模型组,有部分神经元胞体萎缩,海马CA1区神经元尼氏小体含量较丰富。(3)qPCR结果显示,3组小鼠海马及对应皮层区RAGE mRNA表达量差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药治疗组小鼠海马部位RAGE mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)Western blotting结果显示,与模型组比较,中药治疗组小鼠海马及对应皮层区RAGE、p-P38蛋白表达量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SCH可通过下调RAGE及其下游P38的表达改善APP/PS1双转基因痴呆小鼠海马和皮层神经元功能,进而改善小鼠空间探索记忆能力。

关键词：五味子醇甲阿尔茨海默病晚期糖基化终产物受体 P38

五味子醇甲纳米结构脂质载体的制备及体外评价

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时珍国医国药 2020年第1期31卷 93-97页

作者：牟倩倩杨滨易红李化李小芳中国中医科学院中药研究所北京100700 成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室四川省中药资源系统研究与开发利用重点实验室—省部共建国家重点实验室培育基地四川成都611137

目的制备五味子醇甲纳米结构脂质载体(SCH-NLC)并对其进行体外评价。方法采用熔融乳化-超声法制备SCH-NLC,基于单因素考察结果采用Box-Behnken效应面法优化制剂处方及制备工艺。采用高效液相色谱法,建立SCH-NLC中五味子醇甲的含量测定方... 详细信息

目的制备五味子醇甲纳米结构脂质载体(SCH-NLC)并对其进行体外评价。方法采用熔融乳化-超声法制备SCH-NLC,基于单因素考察结果采用Box-Behnken效应面法优化制剂处方及制备工艺。采用高效液相色谱法,建立SCH-NLC中五味子醇甲的含量测定方法,并通过测定SCH-NLC的形态、粒径、包封率、载药量、X-射线衍射、体外释放度等对其进行体外评价。结果最佳处方工艺为:中链甘油三酸酯/单硬脂酸甘油酯比7.65∶2.35,泊洛沙姆-188用量3.8%,脂质浓度4.0%,制得的纳米粒平均粒径为(94.11±4.09)nm,包封率为(89.13±0.38)%,载药量为(2.34±0.07)%,X-射线衍射分析表明药物以无定形状态分散于纳米粒中。体外释放实验结果表明,SCH-NLC具有缓释特性。结论该处方可用于SCH-NLC的制备,工艺操作简便,合理可行。

关键词：五味子醇甲纳米结构脂质载体熔融乳化-超声法 Box-Behnken效应面法

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五味子醇甲对小鼠抑郁样行为的影响

中国药理学与毒理学杂志 2017年第3期31卷 244-249页

作者：许方敏薛瑞叶洪涛苏瑞斌张有志广西医科大学药学院广西南宁530021 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850

目的研究中药五味子的木脂素类成分五味子醇甲(SCH)的抗抑郁作用及其机制。方法小鼠单次ig给予SCH 5,10和30 mg·kg^(-1)后1 h,采用小鼠悬尾实验和强迫游泳实验评价其抗抑郁活性;采用自发活动实验评价其对中枢兴奋性的影响;采用利血平... 详细信息

目的研究中药五味子的木脂素类成分五味子醇甲(SCH)的抗抑郁作用及其机制。方法小鼠单次ig给予SCH 5,10和30 mg·kg^(-1)后1 h,采用小鼠悬尾实验和强迫游泳实验评价其抗抑郁活性;采用自发活动实验评价其对中枢兴奋性的影响;采用利血平拮抗实验和育亨宾毒性实验评价其对中枢单胺神经功能的影响。结果在行为绝望模型中,与正常对照组相比,SCH 30 mg·kg^(-1)可显著缩短小鼠悬尾和强迫游泳的不动时间(P<0.05);自发活动实验结果显示,SCH在受试剂量范围内对中枢神经系统无兴奋或抑制作用;在利血平拮抗实验中,与模型组相比,SCH 30 mg·kg^(-1)可拮抗利血平(2.5 mg·kg^(-1),ip)引起的小鼠眼睑下垂和运动不能(P<0.05),对肛温下降无显著影响;在育亨宾毒性实验中,SCH各剂量对育亨宾阈致死剂量(30 mg·kg^(-1),sc)引起的小鼠死亡率无显著影响。结论 SCH具有潜在的抗抑郁药理活性。

关键词：抑郁五味子五味子醇甲

五味子醇甲对APP/PS1小鼠学习记忆和NF-κB p65的影响

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中华中医药学刊 2020年第2期38卷 180-183,I0037页

作者：宋琳朴钟源张丽梅姚丽芬陆一婵惠州学院广东惠州516007 惠州市第三人民医院广东惠州516002 哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150001 大连市妇幼保健院辽宁大连116000

目的研究五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和NF-κB p65的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型(APP/PS1)组、五味子醇甲(SCH+APP/PS1)组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白(WT)组。SCH+APP/... 详细信息

目的研究五味子醇甲(SCH)对APP/PS1双转基因痴呆小鼠行为学和NF-κB p65的影响。方法将35只APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型(APP/PS1)组、五味子醇甲(SCH+APP/PS1)组;另以同背景同月龄的C 57 BL/6 J阴性小鼠为空白(WT)组。SCH+APP/PS1组给予SCH悬浊液灌胃(2.6 mg·kg^-1·d^-1),模型组和空白组给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30 d进行Mirror水迷宫空间探索试验后取材。HE染色法观察皮层及海马CA1区神经细胞的形态结构。运用DCFH-DA法检测脑组织活性氧(ROS)含量。Western印迹检测法检验磷酸化核转录因子(NF-κB p65,pp65)的表达。结果与APP/PS 1组相比,APP/PS 1+SCH组有效区停留距离及时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);APP/PS 1+SCH组穿越有效区次数和平台区停留距离增加,均差异有统计学意义(P<0.01)。APP/PS 1+SCH组HE染色观察皮层有部分神经细胞萎缩、减少,较APP/PS1组明显好转,海马细胞排列整齐度尚可、较均匀。与APP/PS1组相比,APP/PS1+SCH组能降低ROS含量,差异有统计学意义(P<0.05)。APP/PS 1+SCH组皮层及海马pp65蛋白相对表达量下调(P<0.05,P<0.01)。结论SCH可能通过降低ROS含量和抑制pp65保护脑组织形态结构和提高APP/PS1鼠空间探索记忆能力。

关键词：五味子醇甲阿尔茨海默病 APP/PS1双转基因小鼠核转录因子p65 活性氧

肝肠首过效应对五味子醇甲在大鼠体内生物利用度的影响

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南京中医药大学学报 2022年第3期38卷 228-235页

作者：李宁沈璐牛丽君李卓邱志霞张德文中国药科大学药学院江苏南京211198 长白山科学研究院吉林长白山保护开发区管理委员会133613

目的以整体动物和肝肠首过代谢动物模型,考察五味子主要活性成分五味子醇甲在体内外的处置过程,探讨五味子醇甲低生物利用度的原因,为五味子的现代化开发提供必要的数据支撑。方法首先研究不同剂量的五味子醇甲在整体动物(大鼠)体内的... 详细信息

目的以整体动物和肝肠首过代谢动物模型,考察五味子主要活性成分五味子醇甲在体内外的处置过程,探讨五味子醇甲低生物利用度的原因,为五味子的现代化开发提供必要的数据支撑。方法首先研究不同剂量的五味子醇甲在整体动物(大鼠)体内的药动学过程;其后借助颈静脉和幽门静脉插管的首过代谢模型,研究肝脏、肠道在五味子醇甲体内转化过程中的作用以及对其生物利用度的影响。结果在清醒大鼠体内,分别灌胃(i.g)给予10、20、50 mg·kg^(-1)五味子醇甲后,五味子醇甲表现为吸收快(T_(max),0.37、0.44、0.33 h)、体内平均停留时间短(MRT_(last),1.74、1.65、1.27 h)、生物利用度较低(F,12.0%,11.0%,9.35%)的药动学特性;经i.g和十二指肠穿刺(i.d)给予20 mg·kg^(-1)五味子醇甲的血药浓度-时间曲线下面积相近(AUC0-4 h,467.98 h·ng·mL^(-1) vs 469.03 h·ng·mL^(-1)),说明胃部首过效应对其生物利用度影响较小[胃利用度(FG)接近100%];经i.d给予20 mg·kg^(-1)五味子醇甲后,幽门静脉血中五味子醇甲的暴露量显著高于颈静脉中的暴露量(1648.08 h·ng·mL^(-1) vs 469.03 h·ng·mL^(-1),P五味子醇甲的系统暴露量低于静脉注射(i.v)给药后经颈静脉采血的系统暴露量(1960.22 h·ng·mL^(-1) vs 2547.79 h·ng·mL^(-1)),以此估算五味子醇甲摄取入肝脏发生代谢的部分为23.06%;综合肝脏利用度(F_(h),76.94%=1-23.06%)、肠道利用度(F_(a)×F_(g),21.53%=1-78.47%),估算五味子醇甲的绝对生物利用度(F_(t))为16.57%,与i.g给药经颈静脉采血后计算的生物利用度(18.33%)接近;在体外肝、肠微粒体体系中,五味子醇甲发生明显的NADPH依赖的代谢。结论肝肠首过代谢在很大程度上影响五味子醇甲的生物利用度,而肠道代谢对五味子醇甲的首过代谢贡献程度更大,对其绝对生物利用度的影响更大。

关键词：五味子五味子醇甲肝肠首过效应生物利用度