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八肋游仆虫中心蛋白N端半分子Loop区首个氨基酸的作用

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无机化学学报 2011年第2期27卷 245-250页

作者：赵冰段炼刘文赵亚琴杨斌盛山西大学分子科学研究所太原030006

本文通过分子生物学方法将八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸,天冬氨酸Asp37和Asp73,分别突变为带相反电荷的赖氨酸。使用铽敏化荧光、TNS疏水探针研究了八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸的作用。结果表明:... 详细信息

本文通过分子生物学方法将八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸,天冬氨酸Asp37和Asp73,分别突变为带相反电荷的赖氨酸。使用铽敏化荧光、TNS疏水探针研究了八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸的作用。结果表明:当中心蛋白loopⅠ区37位的天冬氨酸突变为赖氨酸后,loopⅠ丧失了金属离子结合能力,进而影响了中心蛋白依赖于金属离子的构象变化;而loopⅡ区73位的天冬氨酸突变为赖氨酸后仍保持金属离子结合能力,依赖于金属离子的构象变化减小。中心蛋白发挥大部分生物功能都依赖于金属离子,这就表明loopⅠ区37位的天冬氨酸在中心蛋白发挥生物功能时起着重要作用,是不可缺少的。在10 mmol·L-1 Hepes、pH 7.4、20 mmol·L-1 KCl条件下,八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loopⅡ与金属离子Tb3+和Ca2+的结合常数分别为:KⅡ(Tb3+)=(8.31±0.18)×104 L·mol-1和KⅡ(Ca2+)=(0.94±0.12)×102 L·mol-1,中心蛋白N端半分子的两个金属结合部位结合能力顺序为:Ⅰ>Ⅱ。

关键词：中心蛋白 N端半分子 Tb3+ Ca2+ TNS

八肋游仆虫中心蛋白N-端半分子与Tb^(3+),Ca^(2+)的结合(英文)

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无机化学学报 2006年第1期22卷 87-90页

作者：任列香赵亚琴丰九英贺晓静梁爱华杨斌盛山西大学分子科学研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

用分子生物学方法表达、纯化了游仆虫中心蛋白及N-端半分子,用铽荧光探针法、离子竞争法研究了pH7.4,0.01mol·L-1Hepes条件下中心蛋白与铽、钙的结合性质。结果表明中心蛋白有4个铽结合部位,其中2个为高亲合结合部位、2个为低亲合结合... 详细信息

用分子生物学方法表达、纯化了游仆虫中心蛋白及N-端半分子,用铽荧光探针法、离子竞争法研究了pH7.4,0.01mol·L-1Hepes条件下中心蛋白与铽、钙的结合性质。结果表明中心蛋白有4个铽结合部位,其中2个为高亲合结合部位、2个为低亲合结合部位。具有2个低亲合结合部位的中心蛋白半分子与铽结合的条件常数是(2.13±0.10)×105L·mol-1,与钙结合的条件常数是(7.52±0.02)×102L·mol-1。

关键词：中心蛋白荧光铽离子钙离子

盐酸氯丙嗪对八肋游仆虫中心蛋白C端功能的抑制

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无机化学学报 2021年第1期37卷 23-32页

作者：董倩叶旭文杨静王文明赵亚琴杨斌盛山西大学分子科学研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

通过荧光光谱分析、等温滴定量热(ITC)、圆二色谱(CD)、电泳等技术研究了盐酸氯丙嗪(CPZ)和八肋游仆虫中心蛋白C端(apoC-EoCen)的结合以及CPZ对蛋白功能的影响。结果表明,在室温下10 mmol·L^-1 Hepes溶液(pH=7.4)中,CPZ与apoC-EoCen以... 详细信息

通过荧光光谱分析、等温滴定量热(ITC)、圆二色谱(CD)、电泳等技术研究了盐酸氯丙嗪(CPZ)和八肋游仆虫中心蛋白C端(apoC-EoCen)的结合以及CPZ对蛋白功能的影响。结果表明,在室温下10 mmol·L^-1 Hepes溶液(pH=7.4)中,CPZ与apoC-EoCen以物质的量之比为1∶1结合,条件结合常数约为104L·mol^-1。CPZ的结合导致蛋白质的二级结构发生改变,α螺旋含量减小;对金属离子诱导中心蛋白的聚集产生了抑制作用,Tb3+敏化荧光强度也降低;阻碍了中心蛋白与着色性病干皮病C组蛋白(XPC)的结合;且影响了apoC-EoCen类核酸酶活性,导致蛋白对pBR322 DNA的切割能力下降;抑制了蛋白质的磷酸化。综合实验结果表明盐酸氯丙嗪是中心蛋白的生物功能阻断剂,对中心蛋白的功能具有良好的调控作用。

关键词：八肋游仆虫中心蛋白功能盐酸氯丙嗪抑制

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中心蛋白研究进展

细胞生物学杂志 2002年第6期24卷 328-332页

作者：贺晓静梁爱华山西大学生物工程实验室太原030006

中心蛋白是一种约20kD的酸性钙结合蛋白,含4个EF手性结构。它在进化上极其保守,尤其是其EF手性结构区域。氨基端是变化最大的区域。目前还没有关于中心蛋白晶体结构的报道。中心蛋白是微管组织中心(MTOC)的主要成分,参与MTOC相关联的纤... 详细信息

中心蛋白是一种约20kD的酸性钙结合蛋白,含4个EF手性结构。它在进化上极其保守,尤其是其EF手性结构区域。氨基端是变化最大的区域。目前还没有关于中心蛋白晶体结构的报道。中心蛋白是微管组织中心(MTOC)的主要成分,参与MTOC相关联的纤维的收缩,并在MTOC的生物合成过程中起重要作用。

关键词：真核细胞微管组织中心中心蛋白研究进展

TNS探针检测中心蛋白与DNA结合后的构象变化

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分析试验室 2023年第2期42卷 209-216页

作者：张文龙胡颖媛薛美昭杨斌盛山西中医药大学中药与食品工程学院晋中030619 山西大学分子科学研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

中心蛋白(centrin)通过构象变化吸引多种修复因子到DNA损伤位点,参与核苷酸切除修复的识别过程,利用荧光探针可以研究蛋白质的构象变化。本研究以2-对甲苯胺基-6-萘磺酸(TNS)为探针,应用光谱法探究了八肋游仆虫中心蛋白N-端半分子(N-EoC... 详细信息

中心蛋白(centrin)通过构象变化吸引多种修复因子到DNA损伤位点,参与核苷酸切除修复的识别过程,利用荧光探针可以研究蛋白质的构象变化。本研究以2-对甲苯胺基-6-萘磺酸(TNS)为探针,应用光谱法探究了八肋游仆虫中心蛋白N-端半分子(N-EoCen)与小牛胸腺DNA(CT-DNA)作用后的构象变化。结果表明,N-EoCen可以与CT-DNA形成复合物,复合物的形成使得蛋白的构象发生变化,疏水腔暴露。Ca^(2+)与N-EoCen配位后,有利于N-EoCen与CT-DNA的结合,会进一步诱导蛋白中疏水性氨基酸残基的暴露。本文研究结果为今后研究中心蛋白在核苷酸切除修复的识别过程中的分子机制提供了理论基础,并且为TNS作为探针应用于检测蛋白质与其他生物大分子的作用提供了参考。

关键词：中心蛋白小牛胸腺DNA(CT-DNA) 探针构象

中心蛋白3定位于游仆虫细胞中形成棘毛的基体上(英文)

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山西大学学报(自然科学版) 2009年第4期32卷 605-613页

作者：柴宝峰杨睿李娜王景涛化学生物学与分子工程教育部重点实验室山西大学生物技术研究所

中心蛋白与中心体(或基体)有着密切关系,作为一种细胞骨架蛋白,形成原生动物巨大的细胞骨架网络;为了研究从八肋游仆虫细胞中克隆到的一种中心蛋白基因(EoCen3)的功能,我们构建了八肋游仆虫细胞大核人工染色体pBTub-Tel ,定位分析该基... 详细信息

中心蛋白与中心体(或基体)有着密切关系,作为一种细胞骨架蛋白,形成原生动物巨大的细胞骨架网络;为了研究从八肋游仆虫细胞中克隆到的一种中心蛋白基因(EoCen3)的功能,我们构建了八肋游仆虫细胞大核人工染色体pBTub-Tel ,定位分析该基因所表达的中心蛋白在细胞中的分布和行为.该人工染色体利用密码子优化的增强型绿色荧光蛋白基因作为标记,在八肋游仆虫细胞中实现高表达,避免用抗生素作为标记对该细胞的喂养产生影响.定位结果显示,该类中心蛋白特异定位于游仆虫形态发生过程中的基体上.在八肋游仆虫无性生殖细胞分裂的起始阶段基体开始发育,首先形成第一个基体,Eo-Cen3定位于新形成的基体中;随后基体开始复制,EoCen3定位于正在复制的基体中.在细胞发育过程中绿色荧光标记的基体成倍增加,说明EoCen3与参与棘毛形成的基体的复制有一定的关系.

关键词：纤毛虫大核人工染色体中心蛋白基体

长春碱与中心蛋白的结合及其对蛋白聚集性质的影响

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化学通报 2023年第3期86卷 363-369页

作者：张文龙胡颖媛裴科任蕾杨斌盛山西中医药大学中药与食品工程学院山西中医药大学中药炮制山西省重点实验室晋中030619 山西大学分子科学研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

通过光谱、等温滴定量热(ITC)以及分子对接等方法研究了八肋游仆虫中心蛋白N-端半分子(N-EoCen)与长春碱(Vin)之间的相互作用以及Vin对N-EoCen聚集性质的影响。结果表明,Vin可以与N-EoCen以摩尔比1∶1结合于N-EoCen的第一个EF-hand的F... 详细信息

通过光谱、等温滴定量热(ITC)以及分子对接等方法研究了八肋游仆虫中心蛋白N-端半分子(N-EoCen)与长春碱(Vin)之间的相互作用以及Vin对N-EoCen聚集性质的影响。结果表明,Vin可以与N-EoCen以摩尔比1∶1结合于N-EoCen的第一个EF-hand的F螺旋与第二个EF-hand的E、F螺旋之间,条件结合常数约为10^(4)L/mol。复合物的形成是放热的过程,主要依靠静电作用与疏水作用。N-EoCen与Vin结合后,构象发生变化,α螺旋含量减少,N-EoCen与Tb^(3+)结合能力减弱。最终使得N-EoCen的自聚集以及Tb^(3+)诱导的聚集减弱。研究结果为蛋白聚集抑制剂的筛选以及相关药物的研发提供了参考和依据。

关键词：中心蛋白长春碱复合物聚集抑制

游仆虫中心蛋白在大肠杆菌中的高效表达和多克隆抗体制备

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动物学报 2004年第3期50卷 447-451页

作者：贺晓静丰九英王伟柴宝峰杨斌盛梁爱华山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室太原030006

中心蛋白是一种在微管组织中心的复制和分离中起着重要作用的蛋白质。为了进一步进行中心蛋白结构和功能的研究 ,我们克隆了单细胞真核生物游仆虫中心蛋白基因并构建了重组表达质粒pGEX 6P EoCen ,其在大肠杆菌BL2 1中经IPTG诱导后获得... 详细信息

中心蛋白是一种在微管组织中心的复制和分离中起着重要作用的蛋白质。为了进一步进行中心蛋白结构和功能的研究 ,我们克隆了单细胞真核生物游仆虫中心蛋白基因并构建了重组表达质粒pGEX 6P EoCen ,其在大肠杆菌BL2 1中经IPTG诱导后获得了大量的可溶性表达 ,融合蛋白表达水平达到了细菌总蛋白的 32 6 %。GST抗体进行Westernblotting检测结果为阳性。经GST亲和层析和superdex 75凝胶层析后得到 90 %以上电泳纯的蛋白。用纯化后的蛋白免疫大鼠产生抗血清 ,经ELISA检测抗体效价达 1∶2 5 6

关键词：游仆虫中心蛋白 GST亲和纯化多克隆抗体大肠杆菌

八肋游仆虫中心蛋白与铕离子相互作用的电化学研究

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山西大学学报(自然科学版) 2015年第2期38卷 310-317页

作者：荣志江石恩娴杨斌盛山西大学分子科学研究所太原科技大学环境与安全学院山西医科大学药学院

使用电化学阻抗法(EIS)和循环伏安法(CV)研究了野生型八肋游仆虫中心蛋白(EoCen)在玻碳电极表面的吸附特性及EoCen与Eu3+的相互作用过程。研究发现EoCen在电极表面的吸附不受电极电势的影响;EoCen与N端中心蛋白(N-EoCen)的吸附性相比,... 详细信息

使用电化学阻抗法(EIS)和循环伏安法(CV)研究了野生型八肋游仆虫中心蛋白(EoCen)在玻碳电极表面的吸附特性及EoCen与Eu3+的相互作用过程。研究发现EoCen在电极表面的吸附不受电极电势的影响;EoCen与N端中心蛋白(N-EoCen)的吸附性相比,吸附速率相近,吸附自由能相近。CV和EIS滴定实验都证明Eu3+与EoCen形成了配位比为4∶1的配合物。并且滴定曲线能够区分EoCen上的四个金属离子结合位点,与使用光谱方法不能有效区分这四个位点相比,电化学方法更具优势。

关键词：中心蛋白 Eu Fe(CN) 循环伏安电化学阻抗