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三黄烧伤灵对金黄色葡萄球菌生物膜影响的实验研究

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三黄烧伤灵对金黄色葡萄球菌生物膜影响的实验研究

作者：李焕平内蒙古大学

学位级别：硕士

目的：选取成膜性较强的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sau)构建细菌体外生物膜模型,以敏感不成膜菌株做对照,探索三黄烧伤灵及黄芩提取物对其生物膜的破坏作用,并确定药物的最佳浓度,为临床用药提供实验依据。方法：全自动细... 详细信息

目的：选取成膜性较强的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sau)构建细菌体外生物膜模型,以敏感不成膜菌株做对照,探索三黄烧伤灵及黄芩提取物对其生物膜的破坏作用,并确定药物的最佳浓度,为临床用药提供实验依据。方法：全自动细菌分析仪鉴定为Sau;刚果红平板及阿利新蓝-刚果红染色定性Sau生物膜;建立Sau生物膜体外模型;扫描电镜观察生物膜形成情况,以结晶紫染色生物膜半定量培养1d,3d,5d并分析其形成生物膜的能力,于建模第3天(成熟生物膜)应用孔板微量稀释法测定三黄烧伤灵和黄芩提取物对临床Sau的MIC值。药物作用24小时后,采用扫描电镜观察三黄烧伤灵、黄芩提取物对成熟耐Sau生物膜的作用效果。结果：应用酶标仪结晶紫半定量,培养24h后,细菌量增多,培养48h后,实验菌株开始形成生物膜;三黄烧伤灵、黄芩提取物对成熟Sau生物膜具有破坏作用。结论：阿里新兰-刚果红染色具有快速、准确的定性生物膜的特性;三黄烧伤灵可有效破坏Sau生物膜,较之单味药材有较为明显的优势,不但可以更有效的破坏生物膜,并可较好的杀灭游离菌。

关键词：三黄烧伤灵黄芩金黄色葡萄球菌生物膜

三黄烧伤灵对休克期大鼠内脏功能保护作用的实验研究

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三黄烧伤灵对休克期大鼠内脏功能保护作用的实验研究

作者：胡国林内蒙古大学

学位级别：硕士

目的探索外用中药制剂对严重烫伤休克期大鼠内脏的保护作用及机制。方法通过血液检测、组织病理学观察、免疫组化、ELISA等方法在休克期的8h、24h、48h测定小肠粘膜HSP70;肺组织丙二醛含量、还原型谷胱甘肽含量、肺质量(湿)/肺质量(干)... 详细信息

目的探索外用中药制剂对严重烫伤休克期大鼠内脏的保护作用及机制。方法通过血液检测、组织病理学观察、免疫组化、ELISA等方法在休克期的8h、24h、48h测定小肠粘膜HSP70;肺组织丙二醛含量、还原型谷胱甘肽含量、肺质量(湿)/肺质量(干)比;肾功能测定(Bun、Cr)、肾组织髓过氧化物酶(MPO)测定;血清中的TNF-α、IL-6。结果三黄烧伤灵治疗组各时间点HPS70表达均较碘伏治疗组明显升高,烫伤早期Wistar大鼠小肠粘膜组织损伤明显,三黄烧伤灵Wistar治疗组大鼠小肠粘膜组织损伤较碘伏治疗组组明显减轻;三黄烧伤灵治疗组Wistar大鼠肺脏中丙二醛含量及还原型谷胱甘肽含量组显著高于碘伏治疗组,肺质量(湿)/肺质量(干)比显著低于碘伏治疗组;三黄烧伤灵治疗组血浆BUN和Cr与碘伏治疗组比较有明显下降,局部髓过氧化物酶活性降低;三黄烧伤灵治疗组Wistar大鼠伤后48hTNF-α、IL-6均明显低于碘伏治疗组。结论三黄烧伤灵、膏状,做为一种活血化瘀、清热解毒之中药,可有效的阻止细菌的侵入,可减轻创面疼痛,是因为其可以有效的阻碍空气对神经末梢的刺激;同时还可以改善创面微循环、并可促进创面生长。通过组织吸收后改变内毒素的结构,以灭活解毒或降低其毒素。通过减少内毒素的释放,促进内毒素的排泄,减弱或消除TNF-α、IL-6的作用,以达到保护内脏的目的。

关键词：三黄烧伤灵休克期 HSP70 TNF-α、IL-6

三黄烧伤灵对烧伤难愈创面铜绿假单胞菌生物膜干预的实验研究

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三黄烧伤灵对烧伤难愈创面铜绿假单胞菌生物膜干预的实验研究

作者：闫增强内蒙古大学

学位级别：硕士

目的建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugionsa, PA)生物膜体外模型,对比自制外用中药制剂三黄烧伤灵与黄芩作用于PA体外成熟生物膜的研究,为治疗PA引起的难愈创面感染提供治疗依据。方法(1)全自动细菌分析仪鉴定我院烧伤科送检微生物... 详细信息

目的建立铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerugionsa, PA)生物膜体外模型,对比自制外用中药制剂三黄烧伤灵与黄芩作用于PA体外成熟生物膜的研究,为治疗PA引起的难愈创面感染提供治疗依据。方法(1)全自动细菌分析仪鉴定我院烧伤科送检微生物标本为PA,应用阿利新蓝-刚果红染色定性PA生物膜,以聚氯乙烯薄片为载体,LB肉汤为培养基,96孔板培养建立PA生物膜体外模型,分别在培养1d,3d,5d,7d时结晶紫染色生物膜半定量,扫描电镜观察生物膜形态,确定生物膜成熟时间。(2)微量稀释法测定三黄烧伤灵萃取液、黄芩对临床PA的最低抑菌浓度(MIC)值。(3)根据所采用的药物不同,将实验组分为三组,分别为空白对照组(无药品)、对照组(黄芩组)、实验组(三黄烧伤灵组),根据药物MIC值配置不同浓度的药物,作用于PA成熟生物膜,扫描电镜(SEM)从形态学角度观察三黄烧伤灵萃取物、黄芩的作用效果,琼脂平板法生物膜内活菌计数,对比药物作用前后的效果。结果阿利新蓝-刚果红染色,结果表明临床分离的PA,76.67%能形成生物膜;于培养1d,3d,5d,7d时结晶紫染色测得OD值实验菌株分别为：0.41士1.23,0.97+1.44,1.94士1.27,1.86-4-1.15,对照菌株分别为：0.49±1.02,0.63+0.89,0.76-4-1.43,0.79+1.12;电镜扫描显示,培养5d是PA形成生物膜成熟;三黄烧伤灵萃取物对PAL生物膜的MIC为8192μg/ml和单味黄芩的对PA生物膜的MIC为2084gg/ml;对PA成熟生物膜的作用浓度,三黄烧伤灵在2MIC(32768μg/ml),黄芩在4MIC (4096μg/ml),培养液孔清亮,用药前后生物膜内细菌计数有统计学意义。结论(1)PA生物膜的形成在其耐药机制中占有重要作用,且在体外大多能形成生物膜;(2)阿里新蓝-刚果红染色重复性好,敏感性高,操作简便易行,能对细菌是否产生生物膜进行初筛,可以在临床微生物检测中应用：(3)三黄烧伤灵及黄芩对PA成熟生物膜有一定破坏作用,且在本实验中三黄烧伤灵作用效果较黄芩用量小,效果好,三黄烧伤灵可作为治疗烧伤难愈创面PA感染的有效药物。

关键词：三黄烧伤灵黄芩铜绿假单胞芮生物膜

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三黄烧伤灵两种制备方法黄芩苷含量测定

解放军药学学报 2017年第5期33卷 455-456页

作者：李素梅王红勤吴蓉瑛内蒙古医学院第三附属医院药学部内蒙古包头014010

目的研究三黄烧伤灵改变制备方法后黄芩苷的含量变化。方法采用纯水提取(旧方法)、乙醇回流和水提取混合提取(新方法)的方法制备三黄烧伤灵,通过HPLC法测定2种方法三黄烧伤灵中黄芩苷有效成分。结果现方法三黄烧伤灵中黄芩苷含量为22.66... 详细信息

目的研究三黄烧伤灵改变制备方法后黄芩苷的含量变化。方法采用纯水提取(旧方法)、乙醇回流和水提取混合提取(新方法)的方法制备三黄烧伤灵,通过HPLC法测定2种方法三黄烧伤灵中黄芩苷有效成分。结果现方法三黄烧伤灵中黄芩苷含量为22.661mg·g-1,明显高于原方法组(10.799mg·g-1)。结论改变制备方法后三黄烧伤灵中黄芩苷成分明显增加,为研究三黄烧伤灵最佳制备方法提供理论基础。

关键词：三黄烧伤灵 HPLC 黄芩苷

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改变制备工艺后三黄烧伤灵体外抑菌作用考察

中国药师 2016年第9期19卷 1686-1688页

作者：李素梅高柏青赵玉平内蒙古医学院第三附属医院药学部内蒙古包头014010

目的:研究改变制备工艺后三黄烧伤灵对几种常见细菌的体外抑菌效果。方法:采用乙醇回流提取、水提取的混合提取新工艺制备三黄烧伤灵。采用微量肉汤稀释法测定改变制备工艺后三黄烧伤灵对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及乙... 详细信息

目的:研究改变制备工艺后三黄烧伤灵对几种常见细菌的体外抑菌效果。方法:采用乙醇回流提取、水提取的混合提取新工艺制备三黄烧伤灵。采用微量肉汤稀释法测定改变制备工艺后三黄烧伤灵对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及乙型副伤寒沙门菌的最小抑菌浓度,对新、旧工艺制备三黄烧伤灵的抑菌效果进行比较,并采用纸片法检测抑菌圈。结果:新工艺制备的三黄烧伤灵对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌及乙型副伤寒沙门菌抗菌效果优于旧制备工艺,新工艺的最小抑菌浓度分别为16,16,8,16μg·ml^(-1),旧工艺的最小抑菌浓度分别为32,64,16,64μg·ml^(-1)。结论:改变制备工艺后制得的三黄烧伤灵抗菌效果明显,有一定的临床使用意义。

关键词：三黄烧伤灵制备工艺抗菌作用最小抑菌浓度

黄连素对烧伤创面铜绿假单胞菌生物膜干预试验及自制中药临床应用观察

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黄连素对烧伤创面铜绿假单胞菌生物膜干预试验及自制中药临床应用...

作者：贾子中内蒙古大学

学位级别：硕士

目的：通过建立铜绿假单胞菌体外生物模型,对比黄连素和对照组细菌生物膜形态和数量,研究黄连素对铜绿假单胞菌生物膜的影响,通过对自制中药三黄烧伤灵的动物及临床使用观察,研究三黄烧伤灵的临床使用效果。方法：(1)收集烧伤科2014年1-... 详细信息

目的：通过建立铜绿假单胞菌体外生物模型,对比黄连素和对照组细菌生物膜形态和数量,研究黄连素对铜绿假单胞菌生物膜的影响,通过对自制中药三黄烧伤灵的动物及临床使用观察,研究三黄烧伤灵的临床使用效果。方法：(1)收集烧伤科2014年1-6月微生物送检阳性标本,选取氧化酶试纸阳性菌株,经VITEK2快速细菌自动鉴定仪鉴定为铜绿假单胞菌,质控菌株ATCC27853。药敏试验采用K-B纸片扩散法,判断结果按照CLSI最新折点标准判定为耐药的作为研究菌株。(2)应用阿利新蓝-刚果红染色初筛铜绿假单胞菌定性细菌生物膜。(3)将传统的平板培养法改用聚氯乙烯薄片载体引导发培养,通过扫描电镜观察培养1天,3天,5天,7天的细胞生物膜形态,确定细胞生物膜的成熟时间。(4)利用结晶紫染色进行生物膜半定量监测,在L-B肉汤的96孔板(孔板中已加引导片)中培养,培养成熟后取出引导片,酶标仪490nm波长测定洗脱液的OD值。(5)用微量稀释法测定黄连素对临床铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)值,对比实验组和空白组扫描电镜的细菌生物膜形态,并用琼脂平板法生物膜内活菌计数。(6)通过运用三黄烧伤灵治疗大鼠深二度烧伤创面,观察该药对创面愈合情况的影响。(7)通过三黄烧伤灵临床实验观察对创面愈合情况,分析三黄烧伤灵作用于临床患者烧伤创面的效果。结果：(1)送检标本中阳性细菌耐药检出率为76.7%(115/150)。(2)阿利新蓝-刚果红染色初筛产生细菌生物膜阳性率为83.5%(96/115)。(3)电镜扫描1-3天细菌细胞生物膜形成,3天形成早期生物膜,5天形成速度变缓慢,7天形成成熟的细菌生物膜。(4)1d时,细菌量增多,OD值为0.45±0.53;持续培养3d时,细菌菌落数培养观察数量明显增多,OD值为1.21±0.49,BF逐步开始形成;持续培养5d时,电镜观察BF的形成数量成聚集模式增多,OD值2.07±0.47;持续培养到7d时,BF的形成数量电镜观察结果和第5d的量观察对比肉眼区分区别相差不大, OD值为2.12±0.35,而对照菌株在对应时间测得结果分别为：0.43±0.36,0.52±0.38,0.49±0.52,0.53±0.39,实验菌株OD值相对较高(5)黄连素对铜绿假单胞菌的生物膜的MIC为(8692ug/ml),2MIC (17384ug/ml)对细菌生物膜有抑制作用,黄连素与空白对照生物膜的细菌计数有统计学意义(P黄烧伤灵促进大鼠深二度创面的愈合。(7)通过三黄烧伤灵的临床使用观察,三黄烧伤灵对控制烧创面感染,提高创面肉芽融合率,加快创面愈合有显著功效。通过三黄烧伤灵的临床使用观察,三黄烧伤灵对控制烧创面感染,提高创面肉芽融合率,加快创面愈合有显著功效。结论：多重耐药性铜绿假单胞菌黏附于组织和生物材料表面,可以大量形成细菌生物膜并聚集,并逐步形成防渗透屏障,使铜绿假单胞菌的耐药程度加强。在细菌生物膜完全形成之前(7天),通过黄连素对铜绿假单胞菌生物膜抑制作用的研究,黄连素是一种有效的延缓细菌生物膜形成的生物碱。三黄烧伤灵作用于临床,可有效治疗烧伤创面反复感染,有显著的抑菌和杀菌,去腐生肌作用,在临床使用中值得推广。

关键词：黄连素铜绿假单胞菌细菌生物膜三黄烧伤灵临床试验