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三叶青黄酮对荷Lewis肺癌鼠免疫抑制相关细胞因子的干预作用

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中国临床药理学与治疗学 2014年第3期19卷 275-279页

作者：冯正权林晓阳郝皖蓉浙江省立同德医院肿瘤科中国中医科学院广安门医院北京100053 浙江中医药大学

目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠的瘤体及免疫抑制相关细胞因子表达的影响,初步探讨三叶青总黄酮逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制。方法:匀浆接种法建立C57BL/6小鼠Lewis细胞肺癌模型,连续给药14d后观察正常组、模型对照组、三叶... 详细信息

目的:研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠的瘤体及免疫抑制相关细胞因子表达的影响,初步探讨三叶青总黄酮逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制。方法:匀浆接种法建立C57BL/6小鼠Lewis细胞肺癌模型,连续给药14d后观察正常组、模型对照组、三叶青黄酮高、中、低剂量组瘤体增长情况及血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、前列腺素E2(PGE2)、环氧化酶-2(COX-2)表达含量。结果:瘤体:高剂量组、中剂量组与模型对照组相比较瘤体大小有统计学差异(P低剂量组>中剂量组>高剂量组。血清TGF-β1表达、PGE2和COX-2含量:各实验组均明显高于正常组(P三叶青黄酮高剂量组抑瘤效果较好,中剂量抑瘤效果次之,低剂量组抑瘤效果不明显。三叶青黄酮的抑瘤作用可能与降低外周血中TGF-β1的表达水平有关,可能通过影响PGE2、COX-2表达水平,从而达到逆转肿瘤逃逸,起到抗肿瘤作用。

关键词：三叶青黄酮转化生长因子β1 免疫逃逸环氧化酶-2 前列腺素E2

三叶青黄酮通过COX-2/PGE2通路干预荷Lewis肺癌小鼠M2型巨噬细胞及相关因子表达的研究

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三叶青黄酮通过COX-2/PGE2通路干预荷Lewis肺癌小鼠M2型巨噬细胞...

作者：孙倩倩浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的本实验通过从中药三叶青中提取三叶青黄酮成分,研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠的一般生存状况、瘤重、抑瘤率等方面影响,以及探究三叶青黄酮是否通过COX-2/PGE2通路,对M2型巨噬细胞及TGF-β1、IL-10免疫抑制细胞因子产生影响,从... 详细信息

目的本实验通过从中药三叶青中提取三叶青黄酮成分,研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠的一般生存状况、瘤重、抑瘤率等方面影响,以及探究三叶青黄酮是否通过COX-2/PGE2通路,对M2型巨噬细胞及TGF-β1、IL-10免疫抑制细胞因子产生影响,从而降低免疫抑制的可能机制。方法①药物制备,提取三叶青黄酮,制备成粉末,并将其配成100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml三种不同浓度,设为高、中、低剂量组。②建立小鼠肺癌模型,随机分为6个组,分别为三叶青黄酮高、中、低剂量组、塞来昔布组、生理盐水组及未造模组。③造模24小时后根据分组开始灌胃,灌胃周期14天,观察各组小鼠生存状态、体重、肿瘤生长情况;灌胃14天后处死小鼠,剥取瘤组织,计算抑瘤率;ELISA测定小鼠外周血中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1表达;流式细胞术检测小鼠脾细胞中M2型巨噬细胞的表达;Western blot检测肿瘤组织内COX-2、IL-10、TGF-β1的蛋白表达量。④数据统计。结果①一般生存状况:造模组相对于未造模组小鼠反应迟缓,进食减少,消瘦,瘤块皮肤有掉毛及破损等情况。②抑瘤率:三叶青黄酮高剂量组抑瘤率为46.6%,塞来昔布组抑瘤率为41.4%,三叶青黄酮中剂量组抑瘤率为22.0%,三叶青黄酮低剂量组抑瘤率为16.1%。③小鼠外周血中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1含量:由高到低依次为:生理盐水组、三叶青黄酮低剂量组、三叶青黄酮中剂量组、塞来昔布组、三叶青黄酮高剂量组、未造模组。其中,实验各组小鼠外周血中COX-2含量比较,只有生理盐水组与三叶青黄酮低剂量组间、塞来昔布组与三叶青黄酮中剂量组间无统计学差异（P＞0.05）,其余各组间均有统计学差异（P＜0.05）。实验各组小鼠外周血中PGE2含量比较,两两组间均有统计学意义（P＜0.05）。实验各组小鼠外周血中IL-10含量比较:未造模组与高剂量组、生理盐水组与低剂量组、塞来昔布与中剂量组无统计意义（P＞0.05）,其余均有统计学意义（P＜0.05）。实验各组小鼠外周血中TGF-β1含量比较:塞来昔布组与中剂量组无统计学意义（P＞0.05）,其余各组均有统计学差异（P＜0.05）。④肿瘤组织中COX-2、IL-10、TGF-β1蛋白表达:肿瘤组织中COX-2蛋白表达量比较:只有低剂量组与中剂量间无统计学意义（P＞0.05）,其余均有统计学意义（P＜0.05）。肿瘤组织中TGF-β1蛋白表达量比较:生理盐水组与三叶青黄酮低剂量组无统计学意义（P＞0.05）,塞来昔布组与三叶青黄酮高剂量组无统计学意义（P＞0.05）,三叶青黄酮低剂量组与中剂量组无统计学意义（P＞0.05）,与其余各组有统计学意义（P＜0.05）。肿瘤组织中IL-10蛋白表达量比较:生理盐水组与塞来昔布组及三叶青黄酮低剂量组均无统计学意义（P＞0.05）,塞来昔布组与三叶青黄酮各剂量组均无明显差异,无统计学意义（P＞0.05）,三叶青黄酮中剂量组与高剂量组无统计学意义（P＞0.05）,其余各组有统计学意义（P＜0.05）。⑤脾细胞中M2型巨噬细胞的表达:塞来昔布组与三叶青黄酮高剂量组间无明显差异,无统计学意义（P＞0.05）,其余各组均有统计学意义（P＜0.05）。结论①三叶青黄酮具有抑瘤作用,且高剂量组抑瘤效果最佳。②三叶青黄酮可降低荷瘤小鼠外周血及肿瘤组织中COX-2、PGE2、IL-10、TGF-β1含量。③三叶青黄酮具有通过COX-2/PGE2通路下调M2型巨噬细胞表达的作用,高剂量组与塞来昔布组作用相似。

关键词：三叶青黄酮 COX-2/PGE2 塞来昔布 IL-10 TGF-β1 M2型巨噬细胞免疫抑制

三叶青黄酮诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的实验研究

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中国临床药理学与治疗学 2006年第6期11卷 669-672页

作者：冯正权倪克锋何煜丁志山朱峰吴良村沈敏鹤浙江省中医院肿瘤科浙江中医药大学

目的:观察三叶青黄酮对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的诱导作用,初步探讨其可能的机制。方法:体外培养SGC-7901人胃癌细胞,并用MTT法检测三叶青黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,光镜和电镜观察细胞形态改变,酶谱分析基... 详细信息

目的:观察三叶青黄酮对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的诱导作用,初步探讨其可能的机制。方法:体外培养SGC-7901人胃癌细胞,并用MTT法检测三叶青黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,光镜和电镜观察细胞形态改变,酶谱分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达改变。结果:三叶青黄酮能显著地抑制SGC-7901细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能降低细胞上清液中MMP-2的含量。结论:三叶青黄酮具有抗肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用,有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。

关键词：三叶青黄酮肿瘤细胞凋亡基质金属蛋白酶2

三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境的影响及相关机制研究

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三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤微环境的影响及相关机制研究

作者：侯雪华浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的通过研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠的瘤体积、瘤重以及MDSCs(髓源抑制性细胞)、stat3(信号转导与转录因子3)、p-stat3、VEGF、bcl-2、bax、IL-6表达的影响,探讨三叶青黄酮对肿瘤微环境的免疫调控及其与IL-6/stat3信号通路的... 详细信息

目的通过研究三叶青黄酮对荷Lewis肺癌模型小鼠的瘤体积、瘤重以及MDSCs(髓源抑制性细胞)、stat3(信号转导与转录因子3)、p-stat3、VEGF、bcl-2、bax、IL-6表达的影响,探讨三叶青黄酮对肿瘤微环境的免疫调控及其与IL-6/stat3信号通路的关系,为三叶青的临床应用提供一定的理论基础。方法①皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,随机分为三叶青黄酮高剂量组、三叶青黄酮中剂量组、三叶青黄酮低剂量组、生理盐水组、正常组,每组各8只。接种24h后每天灌胃一次相应的试剂,连续14天,正常组不灌胃。②每天观察小鼠的一般情况,体重变化,给药第10天开始每天测瘤径,计算瘤体积,观察瘤体增长情况。第14天处死,取瘤称重,计算抑瘤率。③眼球取血,ELISA法测定IL-6。④取瘤组织,免疫组化检测stat3、p-stat3、bcl-2、bax、VEGF的表达。⑤取骨髓,流式细胞仪测MDSCs比例。⑥应用单因素方差分析、重复测量方差分析对样本进行统计学分析。结果①体重:生理盐水组体重高于其他各组小鼠体重,统计具有显著差异性(P低剂量组>中剂量组>高剂量组。③瘤重:给药组的瘤重均小于生理盐水组,但低剂量组与生理盐水组统计无明显差异性(P＞0.05);给药组组间相比,三叶青黄酮低剂量组>中剂量组>高剂量组,两两之间有统计学意义(P三叶青黄酮高剂量组58.64%,三叶青黄酮中剂量组35.49%,三叶青黄酮低剂量13.26%。⑤血清IL-6含量:由高到低依次为生理盐水组、三叶青低剂量组、三叶青中剂量组、三叶青高剂量组、正常组。其中,各造模组与正常组相比具有极显著差异(P三叶青高剂量组较中、低剂量差异更显著(P三叶青黄酮高剂量组三叶青黄酮对荷Lewis肺癌瘤鼠具有抑制作用,且随着剂量的增大其抑制作用增强。②三叶青黄酮能降低荷Lewis肺癌小鼠血清IL-6含量,且与剂量正相关,说明三叶青黄酮可抑制炎症因子的表达。③三叶青黄酮可抑制stat3、p-stat3的表达,下调bcl-2蛋白,上调bax蛋白,降低bcl-2/bax的比值而诱导肿瘤细胞的凋亡,降低VEGF的表达抑制血管生成。④三叶青黄酮可降低MDSCs的比例,逆转肿瘤免疫逃逸。

关键词：三叶青黄酮 IL-6 stat3 MDSCs 肿瘤微环境免疫抑制

Notch1下调对三叶青黄酮抑制食管癌EC9706细胞迁移和侵袭的影响

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中国实验方剂学杂志 2017年第5期23卷 162-167页

作者：张胜强张洪艳黄建伟刘贵廷高克峰齐宝林李扬牡丹江医学院红旗医院黑龙江牡丹江157011

目的:观察三叶青黄酮(Tetrastigma Hemsleyani Radix flavone,THRF)对食管癌(esophagus cancer,EC)EC9706细胞增殖、迁移、侵袭能力及Notch1的影响,探讨其抗食管癌的可能作用机制。方法:体外培养EC9706细胞,以不同终质量浓度(0.5~20 g·L^(-1))三叶青黄酮进行处理,未加三叶青黄酮为空白组,以MW 167处理为MW167组。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8),检测三叶青黄酮对EC9706细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50);采用细胞黏附实验,划痕修复实验,transwell小室体外侵袭实验观察EC9706细胞黏附力、迁移、侵袭能力,同时采用免疫细胞化学和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Notch1蛋白和mRNA表达的变化。结果:与空白组比较,三叶青黄酮可明显升高EC9706细胞抑制率(P三叶青黄酮可明显降低EC9706细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数,Notch1阳性细胞率和mRNA表达(P三叶青黄酮能明显抑制EC9706细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,与其下调Notch1有关,可能是其抗食管癌的机制之一。

关键词：三叶青黄酮食管癌迁移侵袭 Notch1

三叶青黄酮干预荷肺癌小鼠MDSCs生成及相关因子表达的研究

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临床医学进展 2023年第10期13卷 16633-16638页

作者：李天平贺灵芝轩贵平梁忠厚刘德勇湖南环境生物职业技术学院医药技术学院湖南衡阳

目的:研究三叶青黄酮对荷肿瘤小鼠MDSCs、PGE2和COX-2的影响,以及它们在调控肿瘤免疫和逆转肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为实验组、环磷酰胺组和三叶青黄酮高、中、低剂量组;每组8只小鼠(以下简称高,中,低)。结果... 详细信息

目的:研究三叶青黄酮对荷肿瘤小鼠MDSCs、PGE2和COX-2的影响,以及它们在调控肿瘤免疫和逆转肿瘤免疫逃逸中的作用。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为实验组、环磷酰胺组和三叶青黄酮高、中、低剂量组;每组8只小鼠(以下简称高,中,低)。结果:其它各组的肿瘤体积、肿瘤重量均明显低于模型组(P 三叶青黄酮对肿瘤细胞有一定的抑制作用,这种抑制作用可能是通过抑制肿瘤细胞的增殖和凋亡而实现的。

关键词：三叶青黄酮荷肺癌小鼠MDSCs 因子表达

基于miRNA调控的三叶青黄酮肝癌抑制作用分子机制研究

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基于miRNA调控的三叶青黄酮肝癌抑制作用分子机制研究

作者：陆艳飞浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的研究三叶青黄酮对肝癌细胞抑制效果并探讨其作用机理,为进一步深入研究三叶青黄酮(radix tetrastingma hemesleyani flavone,RTHF)抗肝癌活性的基因调控机制提供新的思路。方法以浙江产三叶青为研究材料提取纯化获得RTHF,并检测... 详细信息

目的研究三叶青黄酮对肝癌细胞抑制效果并探讨其作用机理,为进一步深入研究三叶青黄酮(radix tetrastingma hemesleyani flavone,RTHF)抗肝癌活性的基因调控机制提供新的思路。方法以浙江产三叶青为研究材料提取纯化获得RTHF,并检测其主要活性物质。以人肝癌细胞(human hepatoellular carcinomas 2,HepG2)为靶细胞,加入不同浓度 RTHF,CCK-8法检测细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况,Transwell小室观察细胞侵袭抑制率,专用试剂盒检测细胞内Ca浓度。采用miRNA-seq技术检测RTHF处理后HepG2细胞内发生差异表达的miRNA,使用TargetScan和miRanda两个靶基因预测软件对所获得的已知差异表达miRNA进行靶基因的在线预测,并对靶基因进行GO和KEGG分析,再采用qRT-PCR技术进一步验证候选差异表达miRNA的表达量。在此基础上,再选取差异表达较为显著的miR-4792作为下一步研究目标,将转染细胞分为四组进行处理,即 miRNANC(对照组,不做处理)、miR-4792 mimics(miR-4792 模拟组)、RTHF+miRNA NC(miR-4792 不做处理加入 RTHF)、RTHF+miR-4792 inhibitor(miR-4792 抑制后加入RTHF)。培养48 h后,采用对应方法检测不同处理组的细胞增殖抑制、细胞侵袭抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导、细胞内Ca浓度等情况。再运用miRanda、miRTarBase、miRDB三种目标靶基因预测分析工具,对miR-4792的潜在靶基因进行预测,并对预测靶基因进行GO和KEGG分析。最后通过Western blotting检测收集各组细胞样本蛋白质表达情况,探讨miR-4792参与抗肝癌的调控机制。结果采用加热回流乙醇法从三叶青中提取获得RTHF,再利用大孔树脂法对RTHF进行纯化,经HPLC-MS/MS分析,发现6种主要单体物质,包括:山奈酚、山奈酚-3-O-新橙皮苷、氯化锦葵色素-3-β-葡糖苷、杨梅素、淫羊藿苷Ⅰ、异夏佛塔苷。CCK-8法检测结果显示,RTHF浓度为4 μg/mL时,即对HepG2细胞的增殖过程有显著抑制作用,且呈现剂量与时间依赖性。流式细胞技术检测结果表明,RTHF浓度为2-3 μg/mL时,对HepG2细胞具有显著的诱导凋亡和侵袭抑制作用,同时细胞内的Ca浓度也有显著升高。利用miRNA-seq技术就HepG2细胞经过3 μg/mLRTHF处理48 h后的细胞内miRNA表达情况进行了测序,对于细胞miRNA表达谱变化进行了对比分析,共发现有184个miRNA发生了差异表达,其中已知的有103个,上调miRNA个数和下调miRNA个数分别为49和54。通过预测共获得了已知差异表达miRNA的5526个靶基因,显著富集于1371个GO条目和32条信号通路中。候选的miRNA表达水平的qRT-PCR检测结果与miRNA-seq检测结果具有类似的表达趋势,验证了数据的可靠性。经过检测发现,与对照组相比,miR-4792 mimics组和RTHF+miRNANC组的细胞增殖能力、细胞侵袭能力均被显著降低,G1期比例、细胞凋亡水平以及细胞内Ca浓度均显著升高;与RTHF+miRNA NC组相比,RTHF+miR-4792 inhibitor组的细胞增殖能力、细胞侵袭能力均显著升高,G1期比例、细胞凋亡水平以及细胞内Ca浓度均显著降低。3种工具共获得92个有共同交集的可信miR-4792靶基因,显著富集于655个GO条目和31条信号通路中。Western blotting检测结果显示,miR-4792 mimics组和RTHF+miRNA-NC组FOXC1 和MAPK途径关键蛋白的表达均下调,明显低于miRNA-NC和RTHF+miR-4792 inhibitor组。结论失调的miRNA可能是通过调节肝癌细胞相关基因的表达,在HepG2细胞的增殖抑制、周期阻滞、侵袭抑制及凋亡诱导中起着重要的作用。miR-4792作为HepG2细胞肿瘤中的抑制因子,靶向FOXC1和一些凋亡相关蛋白,可能是RTHF抑制HepG2的细胞增殖、侵袭、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡的重要分子机制之一。

关键词：三叶青黄酮 miRNA 肝癌抑制机制

三叶青黄酮干预荷肺癌小鼠MDSCs生成及相关因子表达的研究

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新中医 2021年第8期53卷 118-121页

作者：胡桃钟良瑞冯正权浙江省立同德医院浙江杭州310012 浙江中医药大学浙江杭州310053

目的:探讨三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓系来源的抑制细胞(MDSCs)、前列腺素2(PGE2)、环氧合酶-2(COX-2)的作用及其调节荷瘤鼠免疫功能、逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制。方法:将40只C57BL/6小鼠分为模型组、塞来昔布组及三叶青黄酮高、... 详细信息

目的:探讨三叶青黄酮对荷Lewis肺癌小鼠髓系来源的抑制细胞(MDSCs)、前列腺素2(PGE2)、环氧合酶-2(COX-2)的作用及其调节荷瘤鼠免疫功能、逆转肿瘤免疫逃逸的可能机制。方法:将40只C57BL/6小鼠分为模型组、塞来昔布组及三叶青黄酮高、中、低剂量组(以下简称高、中、低剂量组),每组8只。建立荷Lewis肺癌小鼠模型,模型制备成功24 h后,高、中、低剂量组分别灌胃浓度为100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL的三叶青黄酮溶液,塞来昔布组灌胃浓度为100 mg/mL的塞来昔布溶液,模型组灌胃0.9%生理盐水。14 d后处死各组小鼠计算抑瘤率,流式细胞仪检测各组小鼠脾单个核细胞MDSCs的含量,酶联免疫吸附法测定外周血中COX-2、PGE2含量。结果:与模型组比较,其余各组肿瘤体积、瘤重均较小(P三叶青黄酮具有抑瘤作用,且该作用与其下调MDSCs、COX-2、PGE2有关。

关键词：肺癌三叶青黄酮 MDSCs 免疫抑制动物实验小鼠

三叶青黄酮对食管鳞状细胞癌细胞迁移、侵袭及自噬的影响

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福建中医药 2023年第4期54卷 17-20,32页

作者：殷晓庆涂铭书庄婉珍夏雨张毅黄毅福建中医药大学中西医结合学院福建福州350122 福建省立医院福建福州350001

目的探讨三叶青黄酮对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法取对数生长期的人ESCC细胞株KYSE150细胞(以下简称KYSE150细胞)分为0μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组、75μg/mL组,采用CCK-8法检测三叶青黄酮溶液干预0... 详细信息

目的探讨三叶青黄酮对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法取对数生长期的人ESCC细胞株KYSE150细胞(以下简称KYSE150细胞)分为0μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组、75μg/mL组,采用CCK-8法检测三叶青黄酮溶液干预0、24、48 h后各组细胞活力并计算干预48 h的半抑制浓度(IC_(50)),筛选出三叶青黄酮溶液最佳干预浓度为50μg/mL。取对数生长期的KYSE150细胞分为0μg/mL组、50μg/mL组,采用Transwell小室法检测三叶青黄酮溶液干预48 h后2组细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白N-cadherin、Snail、Slug蛋白表达量。取对数生长期的KYSE150细胞分为空白组、氯喹组、三叶青黄酮组、三叶青黄酮+氯喹组,空白组不使用药物干预,氯喹组加入10μmol/L氯喹,三叶青黄酮组加入50μg/mL三叶青黄酮溶液,三叶青黄酮+氯喹组加入10μmol/L氯喹与50μg/mL三叶青黄酮溶液干预,均干预48 h后采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量。结果与0μg/mL组比较,各药物组随着三叶青黄酮溶液浓度的增加,KYSE150细胞活力均逐渐下降(P均三叶青黄酮组及三叶青黄酮+氯喹组KYSE150细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量均显著增高(P均三叶青黄酮+氯喹组KYSE150细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62蛋白表达量增高更显著(P三叶青黄酮可下调N-cadherin、Snail、Slug蛋白表达量以抑制ESCC细胞的迁移和侵袭能力,上调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与p62的表达诱导自噬体的产生,从而抑制细胞自噬流,发挥对ESCC细胞活力的抑制作用。

关键词：三叶青黄酮自噬细胞迁移侵袭 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ p62

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