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首届中国食品感官科学学术研讨会暨《食品感官科学》课程建设研讨会

作者： GEN-HUA ZHANG~(1,2) SHAO-PING DENG~(1*) HONG-TAO LI~1 LEI-LEI LI~1 1 Sensory Science Lab,Zhejiang Gongshang University,Hangzhou 310035,China 2 Department of Developmental Biology,Changshu Institute of Technology,changshu 215500,China

In the present study,we delineated the development and frequency distribution of the taste buds as well as the immunohistochemical expression of ct-gustducin in the circumvallate papilla from the birth day till the age of week 9. Few taste buds were observed at the birth day,then the number of taste buds increased rapidly,and resulting in 68% of circumvallate papilla taste buds containing taste pores at week *** age the total counts of pored taste buds continuously increased and their morphological features became quite *** analysis of α-gustducin expression at different postnatal ages revealed a significant increase in the number of immunolabeled taste buds and α-gustducin-positive cells in single taste buds from week 1 to week 9,By week 3,the number reached the value found in *** results indicated that taste buds within circumvallate papilla play an important role in the detection of nutrients in the postnatal mouse.

关键词： taste buds development α-gustducin circumvallate papilla mouse Abbreviation:circumvallate:CV Postnatal day PD

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Distribution of different taste buds and expression of α-gustducin in the barbells of yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco)

Distribution of different taste buds and expression of α-gu...

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首届中国食品感官科学学术研讨会暨《食品感官科学》课程建设研讨会

作者： Genhua Zhang~(1,2) Shaoping Deng~(1*) Hongtao Li~1 Leilei Li~1 1 Sensory Science Lab,College of Biology,Zhejiang Gongshang University,Hangzhou China 2 Taste Biophysics Lab,Department of Biology,Changshu Institute of Technology,Changshu China

In order to explore the distribution of different taste buds in the barbells of yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco) collected from the Yangtze River,the quantity,morphology and distribution of different taste buds in the barbells was studied by bright-field optical microscope and scanning electron *** taste buds in the barbell were predominantly localized at the middle two thirds regions of the barbells,and could be categorized into three major types based on their morphological and histological *** 1 and 11 TB were distributed on the elevated layer of the surrounding epithelium,while Type III TB ended apically at the level with the *** quantitative differences (p0.05) were found between MB and MIB (p=0.05293),MB and MOB (p=0.05994) and MIB and MOB (p=0.08320).The number,distribution and morphological variability of TBs could be a consequence of adaptation to the environment,α-gustducin immunofluoresence signals were detected in cells of all types of *** strong expression of α-gustducin on the barbells of catfish suggests that the taste-induced signal transduction in taste cells was common to all vertebrates.

关键词： Distribution Taste bud α-gustducin Yellow catfish

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长期甜味暴露对小鼠肠道G蛋白α-gustducin表达及血糖水平影响研究

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畜牧与饲料科学 2010年第2期31卷 113-115页

作者：丁寅翼高玉来朱小明秦玉梅邓少平浙江工商大学浙江杭州310000

以8周龄ICR小鼠为试验对象,采用不同浓度蔗糖溶液对小鼠进行长期甜味暴露,然后氮气致死解剖小鼠获取十二指肠,固定、包埋、切片。应用HE染色、免疫组织化学染色技术研究长期甜味暴露对十二指肠绒毛形态及G蛋白α-gustducin表达水平的影... 详细信息

以8周龄ICR小鼠为试验对象,采用不同浓度蔗糖溶液对小鼠进行长期甜味暴露,然后氮气致死解剖小鼠获取十二指肠,固定、包埋、切片。应用HE染色、免疫组织化学染色技术研究长期甜味暴露对十二指肠绒毛形态及G蛋白α-gustducin表达水平的影响,同时定期测定小鼠灌胃前后血糖变化。结果表明,小鼠经过长期蔗糖暴露,十二指肠绒腺比会随着糖浓度的增加而上升;肠道中G蛋白α-gustducin表达量无明显变化;血糖跟踪结果表明,随着刺激时间的延长,小鼠血糖耐受能力增强。

关键词：十二指肠 α-gustducin 免疫组化 ICR小鼠

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小鼠味蕾细胞分离及体外培养方法

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细胞生物学杂志 2009年第1期31卷 119-122页

作者：秦玉梅张根华石锦芹王腾浩邓少平浙江工商大学食品与生物工程学院杭州310035 常熟理工学院生物工程系常熟215500

以ICR小鼠的味觉上皮为材料,优化味觉上皮及味蕾细胞分离方法,将分离的味细胞置于Ⅰ型鼠尾胶原包被的含有IMDM培养基的培养板上培养,相差显微镜下观察味蕾细胞形态变化。免疫组织化染色和荧光染色用于鉴定味蕾细胞。结果显示味蕾细胞离... 详细信息

以ICR小鼠的味觉上皮为材料,优化味觉上皮及味蕾细胞分离方法,将分离的味细胞置于Ⅰ型鼠尾胶原包被的含有IMDM培养基的培养板上培养,相差显微镜下观察味蕾细胞形态变化。免疫组织化染色和荧光染色用于鉴定味蕾细胞。结果显示味蕾细胞离体培养一段时间后形态异于体内,但仍具味蕾细胞特有的与细胞骨架和细胞内信号相关的分子标记如:α-gustducin、细胞角蛋白8。由此证明这是一种有效的小鼠的味蕾细胞分离及体外培养方法,为离体研究味蕾细胞生理生化特性提供了更好的途径。

关键词：味蕾细胞原代培养味乳头 α-gustducin 细胞角蛋白8

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人及小鼠味蕾细胞的培养研究

人及小鼠味蕾细胞的培养研究

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作者：高化圣福建医科大学

学位级别：硕士

背景:味觉是由外部刺激作用口腔内的味蕾所引起的感觉，是人及动物感知外界刺激的一种重要方式之一。味觉在维持体内能量平衡和内稳态平衡中起重要作用。在临床上有一些疾病（如舌癌）及疾病治疗方案（如头颈部肿瘤放疗）可引起患者出... 详细信息

背景:味觉是由外部刺激作用口腔内的味蕾所引起的感觉，是人及动物感知外界刺激的一种重要方式之一。味觉在维持体内能量平衡和内稳态平衡中起重要作用。在临床上有一些疾病（如舌癌）及疾病治疗方案（如头颈部肿瘤放疗）可引起患者出现味觉障碍，甚至味觉丧失。目前味觉的研究相比于视觉、听觉和嗅觉的研究严重滞后，对于临床中存在的味觉异常无法及时干预和治疗。如果能够从体外培养的味蕾细胞进行探索，将会极大地加速味觉的研究。目前很少有成功培养出味蕾细胞的报道，因此，建立人及ICR小鼠的味蕾细胞体外培养方法是非常必要的。目的:建立一种稳定良好的人及ICR小鼠味蕾细胞培养方法。方法： 1.利用HE染色和免疫组织化学方法确定舌背粘膜上味蕾的存在部位。 2.取临床舌肿物手术扩大切除的正常味觉乳头及ICR小鼠味觉乳头组织，利用组织块培养法和酶消化获得味蕾细胞法进行味蕾细胞的培养。 3.以味蕾细胞特异性蛋白对培养出的细胞进行免疫学鉴定。结果： 1.舌背粘膜HE染色发现，菌状乳头、叶状乳头、轮廓乳头含有味蕾，丝状乳头不含味蕾。 2.舌背粘膜α-gustducin免疫组织化学和免疫荧光显示味蕾中约有20%～30%的细胞胞质被标记;在CK8免疫组化和免疫荧光显示味蕾中的细胞胞质均被标记。 3.组织块培养法和酶消化法均能从舌背味觉乳头中获得味蕾细胞，并能在体外培养味蕾细胞15d-18d。 4.体外培养的味蕾细胞在失去神经支配后能够存活18d，并仍能够表达一些特异性蛋白（α-gustducin、CK8）。结论： 1.通过酶消化法对人和ICR小鼠味觉乳头消化处理，建立了一种短期的味蕾细胞体外培养方法，体外培养的味蕾细胞短期内仍能够表达一些特异性蛋白。 2.建立了一种轮廓乳头组织块培养味蕾细胞的方法。

关键词：味蕾细胞组织块培养免疫荧光 α-gustducin CK8

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哺乳期甜味暴露对小鼠叶状味蕾发育模式的影响

哺乳期甜味暴露对小鼠叶状味蕾发育模式的影响

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作者：李蕾蕾浙江工商大学

学位级别：硕士

味觉感受是构成食品口感的主要因素，是食品感官评定的重要指标，在食品的开发、品控及销售过程中均发挥着不可忽视的作用。哺乳动物的味觉感受器是味蕾，在舌上，它们主要存在于轮廓乳头、叶状乳头和菌状乳头中。研究发现，断奶前这段... 详细信息

味觉感受是构成食品口感的主要因素，是食品感官评定的重要指标，在食品的开发、品控及销售过程中均发挥着不可忽视的作用。哺乳动物的味觉感受器是味蕾，在舌上，它们主要存在于轮廓乳头、叶状乳头和菌状乳头中。研究发现，断奶前这段时间是味蕾发育的关键时期。在哺乳动物生后早期发育的过程中，环境因素(如饮食、味觉暴露)会影响味觉系统的发育。我们实验室前期的实验结果也证实，小鼠生后早期的甜味暴露能促进轮廓味蕾和菌状味蕾的发育。叶状乳头位于舌背的后外侧边缘，在舌两侧呈对称分布，其与轮廓乳头存在诸多相似之处，因而一直未受到人们的重视。但叶状乳头作为一种独立的味觉器官，有其独特之处：它主要受舌咽神经支配，而其舌面稍前部分受鼓索神经支配;它既表达甜味受体，又表达鲜味受体;还有一个值得注意的有趣现象，轮廓乳头发育良好的动物，往往叶状乳头发育相对较弱。为完善以小鼠为动物模型的味觉方面的研究，为味觉行为与饮食偏好性方面的研究提供较为完整的生物学依据，本实验以叶状乳头为研究对象，在对哺乳期小鼠进行适当的甜味暴露后，通过连续石蜡切片苏木精伊红染色及亲和素-生物素-过氧化物酶复合物免疫组化法研究了正常组和暴露组小鼠叶状乳头的分布模式(数量、形态)及其α-gustducin表达模式(α-gustducin阳性味蕾的数量和单个味蕾中α-gustducin阳性味细胞的数量)。实验动物分为两组：①正常组，取材年龄为出生后第0天、第1周、第2周、第3周、第5周、第7周和第9周;②暴露组，从生后第4天开始每天定时段(9：00和16：00)用甜味剂溶液(10g╱L)对小鼠实施口腔甜味暴露，取材年龄为第2周、第3周、第5周、第7周和第9周;所用的甜味暴露物为无能量人工甜味剂安赛蜜。实验结果如下：(1)哺乳期是正常小鼠叶状味蕾数量增长、形态发育以及α-gustducin表达的关键时期。(2)哺乳期安赛蜜甜味暴露显著抑制了小鼠叶状味蕾数量的发育，加速了味蕾的成熟。(3)哺乳期安赛蜜甜味暴露对小鼠叶状味蕾的α-gustducin表达没有显著影响。

关键词：小鼠叶状乳头味蕾 α-gustducin 甜味暴露安赛蜜

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小鼠味蕾细胞分离纯化技术建立及应用研究

小鼠味蕾细胞分离纯化技术建立及应用研究

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作者：秦玉梅浙江工商大学

学位级别：硕士

味觉是人和动物最基本、最原始也是至关重要的感觉功能,人和动物利用味觉来识别食物的性质、调节食欲和控制摄食量,而细胞界面原初味觉感受的产生是整个味觉产生的基础,但味蕾细胞分离技术的相对落后却制约着细胞层面味觉感受研究的进... 详细信息

味觉是人和动物最基本、最原始也是至关重要的感觉功能,人和动物利用味觉来识别食物的性质、调节食欲和控制摄食量,而细胞界面原初味觉感受的产生是整个味觉产生的基础,但味蕾细胞分离技术的相对落后却制约着细胞层面味觉感受研究的进步。所以建立一种获取得率高、活性好、纯度高味蕾细胞的有效技术和味蕾细胞培养方法是现在亟待解决的问题。本研究以ICR小鼠为实验动物,采用两步酶解法和操作简单的Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠味蕾细胞,通过亲和素-生物素-过氧化物酶复合物免疫组化方法、电镜技术、荧光免疫技术、激光共聚焦显微技术相结合检测分离及纯化结果,从而建立了一套有效的小鼠味蕾细胞分离纯化技术。而后以建立的味蕾细胞分离纯化技术为平台,通过对纯化的味蕾细胞与直接法分离的味蕾细胞培养的比较,建立了一种味蕾细胞短期培养方法。最后对纯化的味蕾细胞进行等温量热滴定,检测不同甜味剂与味蕾细胞相互作用时的热量变化,初步探讨了细胞层面上味蕾细胞甜味识别热动力学研究的可行性。实验结果如下: (1)小鼠味蕾细胞分离纯化技术研究,确定了分离纯化小鼠味蕾细胞各个环节的实验条件:两步酶消化法获取味蕾细胞悬液,胶原酶Ⅱ(1.5mg/mL)与中性蛋白酶Ⅱ(1.5mg/mL)1:1混合酶液用于剥离味觉上皮,分离条件室温下孵育6-8min(6-8周ICR小鼠);0.25%胰蛋白酶+0.02mmol/L EDTA37℃培养箱孵育味觉上皮10-20min制备混合细胞悬液。将混合细胞悬液铺于Percoll分离液中静置30min后,25℃1200rpm离心6min纯化味蕾细胞,纯化前后味蕾细胞的纯度显著提高,从少于10%到高于65%,电镜和免疫组化结果证明此方法的可行性与时效性。 (2)小鼠味蕾细胞体外培养方法的建立,通过实验得出以IMDM(含有1:5 MCDB153;10%FBS;20ng/mL insulin;100U/mL/100mg/mLpenicillin/streptomycin)作为培养液,以Ⅰ型鼠尾胶原作为贴壁因子,5%CO培养箱37℃培养,酶法分离的味蕾细胞培养效果优于直接法分离的味蕾细胞。而且增殖实验及免疫组化结果表明虽然味蕾细胞在培养两周后仍然具有与味觉感受相关的关键分子α-gustducin等,但味蕾细胞在体外的增殖能力较弱,只适合短期培养。 (3)同种浓度的不同甜味剂与味蕾细胞相互作用的等温量热结果表明,不同甜味剂与味蕾细胞的相互作用的热量变化与其甜度具有一定相关性,甜度越高其热效应结果的绝对值越高。初步证明利用等温量热技术从细胞层面上研究味觉感受的可行性,为后续研究奠定技术基础。

关键词： ICR小鼠菌状乳头味蕾 α-gustducin Percoll 等温量热滴定扫描电子显微镜

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