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大口黑鲈G6pc和Gck的原核表达、抗体制备及饲料淀粉水平对其表达的影响

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水生生物学报 2024年第11期48卷 1835-1844页

作者：夏如孙皓王康伟莫丁瑞黄正何远法林仕梅陈拥军西南大学水产学院水产科学重庆市市级重点实验室淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室北碚400715

为深入研究营养因子调控大口黑鲈(Micropterus salmoides)葡萄糖稳态的分子机制,研究成功克隆并构建了大口黑鲈葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6pc)和葡萄糖激酶(Gck)截短序列的重组质粒载体,转化至Escherichia coli Rosetta感受态细胞并以1 ... 详细信息

为深入研究营养因子调控大口黑鲈(Micropterus salmoides)葡萄糖稳态的分子机制,研究成功克隆并构建了大口黑鲈葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6pc)和葡萄糖激酶(Gck)截短序列的重组质粒载体,转化至Escherichia coli Rosetta感受态细胞并以1 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)、16℃诱导表达过夜,在细胞破碎后的上清中得到了大量表达。通过GST-tag亲和层析的方法纯化得到高纯度的G6pc和Gck截短重组蛋白后,将其分别与弗氏佐剂乳化成免疫原,免疫KM小鼠5次,成功制备具有高特异性和高效价的多克隆抗体(G6pc和Gck抗体的效价分别大于1﹕3000和1﹕10000)。Westen blot检测发现大口黑鲈G6pc和Gck蛋白主要分布在肝脏中,免疫荧光染色显示G6pc的阳性信号定位于细胞核周围,而Gck的阳性信号散布整个细胞。在8周养殖实验结束后,随饲料淀粉水平以6%的梯度从8%增加到20%,大口黑鲈肝脏中糖酵解和糖原合成关键酶编码基因的表达及Gck水平逐渐升高,但糖异生和糖原分解关键酶编码基因的表达及G6pc水平仅在14%淀粉水平时被抑制,意味着在高淀粉水平(20%)下大口黑鲈肝脏中葡萄糖-G6P间的相互转化发生了无效循环。综上所述,研究成功制备了大口黑鲈G6pc和Gck特异性识别的多克隆抗体,探明了饲料淀粉水平对其表达的影响,为深入研究G6pc和Gck在大口黑鲈葡萄糖稳态维持过程中的重要作用奠定了基础。

关键词：葡萄糖-6-磷酸酶葡萄糖激酶原核表达多克隆抗体大口黑鲈

饲料中谷氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸钠对鳜摄食、生长、胃肠及肝功能的影响

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水生生物学报 2024年第4期48卷 592-599页

作者：方揽月许耀升刘天骥李洪琴刘匆李虹翟旭亮薛洋沈子伟陈拥军罗莉西南大学水产学院西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室重庆400716 四川新希望六和科技创新有限公司成都610000 重庆市水产技术推广总站重庆400400 中国水产科学研究院长江水产研究所西南渔业研究中心重庆400400

为研究谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)和谷氨酸钠(MSG)对鳜(Siniperca chuatsi)摄食、生长及胃肠功能的影响,以鳜基础饲料为对照组(CON),分别添加0.2%和0.4%的Glu、Gln和MSG,命名为Glu-0.2、Glu-0.4、Gln-0.2、Gln-0.4、MSG-0.2和MSG-0.4六个处理组,饲喂初始体质量为(17.60±0.53)g的鳜56d。同CON相比,结果显示:(1)三种添加剂均显著提高摄食量,其中MSG组最明显;(2)Glu-0.2和Gln-0.2的增重率、饲料转化率显著提高;(3)各添加组的胃蛋白酶活力和Glu-0.2、Glu-0.4、Gln-0.2的胃H+-K+-ATPase活力显著增强;(4)肠道中的胰蛋白酶活力在Glu-0.2显著提高,Na+-K+-ATPase活力在Gln-0.4无促进作用,其他组均显著增强;(5)Glu组、MSG组血浆中D-乳酸、内毒素含量和二胺氧化酶活性均显著降低;(6)Gln组血浆AST和ALT显著升高,且肝细胞肿胀、空泡化明显增多;(7)Glu组和MSG组血浆抗氧化能力显著升高,Gln组显著降低;(8)肠道微生物组成Glu-0.2的门水平软壁菌门(Tenericutes)、属水平索氏鲸杆菌属(Cetobacterium)丰度显著高于CON组。综上,Glu具有促进鳜胃酸分泌和胃肠消化吸收能力,增强肠道物理屏障,改善肠道菌群,促进生长;Gln能提升鳜胃肠功能,而机体抗氧化力、肝功能下降;MSG促进摄食和生长效果最佳,但对饲料转化无改善。

关键词：谷氨酸谷氨酰胺谷氨酸钠胃肠肝鳜

左旋肉碱对鳜生长、抗氧化能力及肠道和肝脏功能的改善作用研究

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1834-1845页

作者：侯静宜许耀升方揽月陈雨霜刘天骥李虹翟旭亮薛洋沈子伟李纪中陈拥军向枭李洪琴罗莉西南大学水产学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室重庆400716 四川新希望六和科技创新有限公司成都610000 重庆市水产技术推广总站重庆400400 中国水产科学研究院长江水产研究所西南渔业研究中心重庆400400 重庆市农业广播电视学校大足区分校重庆402360

为探讨饲料中添加左旋肉碱对鳜的生长、抗氧化能力及肠道和肝脏组织结构和功能的影响,在鳜基础饲料中分别添加有效含量为0、50、100、150、200和250 mg/kg的左旋肉碱(分别命名为D0、D50、D100、D150、D200和D250),将初始体质量为(53.98... 详细信息

为探讨饲料中添加左旋肉碱对鳜的生长、抗氧化能力及肠道和肝脏组织结构和功能的影响,在鳜基础饲料中分别添加有效含量为0、50、100、150、200和250 mg/kg的左旋肉碱(分别命名为D0、D50、D100、D150、D200和D250),将初始体质量为(53.98±1.32)g的270尾鳜分为6个组,每组3个重复,每个重复15尾,分别饲喂上述饲料进行56 d生长试验。结果显示:1)与D0组相比,D100组增重率显著升高(P0.05)。4)与D0组相比,D100组胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和Na^(+)⁃K^(+)⁃ATP酶活性显著升高(P0.05);D100组和D250组肌纤维直径显著降低(P<0.05),肌纤维密度显著升高(P<0.05),肝脏油红切片脂滴占比较D0组显著减少(P<0.05)。综上所述,左旋肉碱可促进鳜肠道发育,增强消化吸收能力,提高生长速度,同时具有提高免疫力、减少肝脏脂肪沉积、改善肌肉品质的作用。以增重率与饲料系数为效应指标进行拟合可得,鳜饲料中左旋肉碱的适宜添加水平为79.27~80.61 mg/kg。

关键词：鳜左旋肉碱生长消化抗氧化

稻田养殖模式下克氏原螯虾幼虾的蛋白质需求量

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水产学报 2024年第10期48卷 149-162页

作者：金鸿浩肖川波孙倩容李雨孙文波柯真林赵绳富凌乐妍高源林勇翟旭亮罗莉叶华罗辉郑轲王大鹏吕光俊西南大学水产学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室广西壮族自治区水产科学研究院重庆市水产科技创新联盟重庆市水产技术推广总站江西天之佳生物科技有限公司

为研究在稻田养殖模式下克氏原螯虾幼虾对蛋白质的需求量，实验设计蛋白水平分别为28%、31%、34%、37%、40%和43%的6组等能等脂的实验饲料(分别记为Diet28～Diet 43组)，投喂360尾初始体重为(8.59±0.05) g的克氏原螯虾幼虾，每个处理3... 详细信息

为研究在稻田养殖模式下克氏原螯虾幼虾对蛋白质的需求量，实验设计蛋白水平分别为28%、31%、34%、37%、40%和43%的6组等能等脂的实验饲料(分别记为Diet28～Diet 43组)，投喂360尾初始体重为(8.59±0.05) g的克氏原螯虾幼虾，每个处理3个重复。饲养56 d后，测定并分析生长性能、肌肉成分、血淋巴生化指标、肠道消化酶活性以及抗氧化能力。结果显示，(1)随着饲料蛋白水平的升高，终末体重(FBW)、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)先上升，在蛋白水平达到40%后呈下降趋势；出肉率(MY)随着蛋白水平升高而升高。(2)饲料蛋白质水平对肌肉水分、粗脂肪和灰分含量无显著影响；但随着蛋白水平的升高，肌肉粗蛋白含量有上升的趋势。(3)饲料蛋白质水平与血淋巴谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性呈正相关，且在Diet 43组达到最大。饲料蛋白质水平对血淋巴总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)和总胆固醇(TCHO)含量均无显著影响。但TP和GLB含量出现随着饲料蛋白质水平升高而上升的趋势。(4)饲料蛋白质水平对肠道蛋白酶(TPS)和脂肪酶(LPS)活性有显著影响，对α-淀粉酶(α-AL)活性无显著影响。(5)在一定范围内提高蛋白水平可显著提高克氏原螯虾肝胰腺总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性以及总抗氧化能力(T-SOD)，并且显著降低丙二醛(MDA)的含量。(6)蜕壳基因(ecr、chitinase)和免疫相关基因(hsp70、tlrs、lzm)表达量随饲料蛋白水平先升高后下降，但是饲料蛋白水平并未对蛋白质代谢相关基因(eif4e、s6k1、4e-bp1)造成显著影响。研究表明，利用增重率与饲料蛋白质水平进行折线回归分析，在稻田养殖模式下，克氏原螯虾幼虾获得最佳增重率时对饲料的蛋白质需要量为40.35%，建议稻田养殖模式下克氏原螯虾幼虾人工配合饲料中蛋白质含量以40.35%为宜。本研究为克氏原螯虾稻田养殖专用饲料开发提供了理论依据。

关键词：克氏原螯虾幼虾蛋白质需求稻田养虾

超声辅助酶法制备冷榨油菜籽饼肽及其结构性能表征

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中国油脂 2024年

作者：黎茂英黄桃翠刘文海石慧韩梅陈泳玲钟耕重庆红蜻蜓油脂有限责任公司西南大学农学与生物科技学院川渝共建特色食品重庆市重点实验室重庆市农业科学院西南大学食品科学学院

为了提高冷榨油菜籽饼的附加值和应用价值，本文首先通过单因素实验利用超声预处理分别辅助木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解冷榨油菜籽饼，直接从冷榨油菜籽饼中制备提取菜籽肽，比较得率，结果表明碱性蛋白酶得率最高。再以碱性蛋白酶和超... 详细信息

为了提高冷榨油菜籽饼的附加值和应用价值，本文首先通过单因素实验利用超声预处理分别辅助木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解冷榨油菜籽饼，直接从冷榨油菜籽饼中制备提取菜籽肽，比较得率，结果表明碱性蛋白酶得率最高。再以碱性蛋白酶和超声为固定因素进行响应面试验，优化了制备提取条件，即碱性蛋白酶加酶量12289.79 U/g，超声时间21.82 min，超声功率306.56 W，菜籽肽的得率为55.19%，纯度为48.32%。蛋白肽的分子量范围为88.02 Da～1290.00 Da。其中菜籽肽的氨基酸组成和含量相对合理。菜籽肽的粒径小，Zeta电位绝对值大。在二级结构中α-螺旋和β-折叠减少，β-转角增加。与常规方法相比，这种方法不仅提高了提取率，而且在较大程度上减少了对菜籽肽结构和成分的破坏，为高效直接提取优质冷榨菜籽饼肽和菜籽蛋白新型食品开发提供了参考。

关键词：菜籽肽冷榨油菜籽饼超声酶优化

超声辅助酶法制备菜籽肽及其组成、物理特性及结构分析

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中国油脂 2024年第9期49卷 36-42页

作者：黎茂英黄桃翠刘文海石慧韩梅陈泳玲钟耕西南大学食品科学学院重庆400715 重庆市农业科学院重庆400060 重庆红蜻蜓油脂有限责任公司 400010 西南大学农学与生物科技学院重庆400716 川渝共建特色食品重庆市重点实验室重庆400716

为提高低温压榨菜籽饼的附加值和应用价值,采用石油醚对低温压榨菜籽饼进行脱脂,然后利用超声预处理分别辅助木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶直接酶解制备菜籽肽,通过单因素试验探究超声功率、超声时间及酶添加量对菜籽肽得率的影响,通过响应面... 详细信息

为提高低温压榨菜籽饼的附加值和应用价值,采用石油醚对低温压榨菜籽饼进行脱脂,然后利用超声预处理分别辅助木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶直接酶解制备菜籽肽,通过单因素试验探究超声功率、超声时间及酶添加量对菜籽肽得率的影响,通过响应面法优化超声辅助酶解工艺条件,并对所得菜籽肽的组成、物理特性以及结构进行分析。结果表明:碱性蛋白酶酶解的菜籽肽得率高于木瓜蛋白酶的;最佳超声辅助碱性蛋白酶酶解工艺条件为酶添加量12 289.79 U/g、超声时间21.82 min、超声功率306.56 W,该条件下菜籽肽得率为55.19%;最佳条件下所得菜籽肽的分子质量范围为88.02~1 290.00 Da,其中98.40%的菜籽肽分子质量小于500 Da,相较于未超声辅助酶解,所制备的菜籽肽氨基酸含量增加,粒径变小,Zeta电位绝对值变大,二级结构中α-螺旋和β-折叠含量增加,β-转角含量减少,二级结构更有序、稳定。综上,超声辅助酶法不使用有机溶剂,环境友好,且产品品质较好,可以用于高效提取菜籽肽。

关键词：菜籽肽超声辅助酶解品质

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鳜鱼营养需求及其饲料研究进展

水产科技情报 2024年第4期51卷 258-263,268页

作者：张皓迪马卉佳重庆市忠县农业农村委员会重庆404300 重庆市水产科学研究所重庆400020

鳜鱼是我国水产养殖业近十年来发展迅速、具有良好发展前景的淡水养殖品种之一。随着市场对高品质水产品需求的增加和活饵料鱼生产问题的解决,鳜鱼养殖产业进入蓬勃发展时期,养殖规模不断扩大,产业发展呈现出区域化、规模化、专业化、... 详细信息

鳜鱼是我国水产养殖业近十年来发展迅速、具有良好发展前景的淡水养殖品种之一。随着市场对高品质水产品需求的增加和活饵料鱼生产问题的解决,鳜鱼养殖产业进入蓬勃发展时期,养殖规模不断扩大,产业发展呈现出区域化、规模化、专业化、标准化、品牌化的特点。自2016年以来,我国鳜鱼养殖年产量均在30万t以上,产值超过200亿元。但由于鳜鱼驯化和饲料养殖技术还不够成熟,目前采用配合饲料养殖的比例不高。文章综述了鳜鱼对蛋白质和脂肪的需求、碳水化合物和益生菌的适宜添加量及其饲料的研究进展,可为鳜鱼配合饲料的开发和优化提供参考。

关键词：鳜鱼营养需求蛋白质脂肪碳水化合物配合饲料

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越冬期鳜生长、消化代谢、抗氧化及免疫能力的动态变化

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水产学报 2024年

作者：于俊琦卢桦陈琪琪王文洁陈雨霜周达李勇罗浩翟旭亮薛洋罗金强陈拥军赵敏罗莉西南大学水产学院西部(重庆)科学城种质创制大科学中心淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室新希望六和股份有限公司重庆市水产技术推广总站重庆市潼南区农业科技推广中心

为探究越冬期鳜生长、消化代谢、抗氧化和免疫能力的生理动态变化，选取体重为（107.63±0.48）g的鳜240尾，分为生长组和取样组，每组4个重复，每个重复30尾鱼，2天1次表观饱食投喂饲料养殖112 d。期间水温经历了14.5～7.5℃的降温期（... 详细信息

为探究越冬期鳜生长、消化代谢、抗氧化和免疫能力的生理动态变化，选取体重为（107.63±0.48）g的鳜240尾，分为生长组和取样组，每组4个重复，每个重复30尾鱼，2天1次表观饱食投喂饲料养殖112 d。期间水温经历了14.5～7.5℃的降温期（0～6W）和7.5～14.5℃的升温期（6～16W），设置0、2周（2W）、4周（4W）、6周（6W）、8周（8W）、12周（12W）、16周（16W）共7个取样时间点。结果显示，鳜增重率、特定生长率和摄食率逐渐下降并在6W降至最低后逐渐上升，其中增重率和摄食率16W较6W分别提高983.2％和265.22％，饲料系数6W显著上升后下降；肥满度、脏体比、肝体比均在6W显著下降后上升。胃质子泵(H+-K+-ATP酶)、肠胰蛋白酶、淀粉酶活性6W显著下降后上升。肝脏总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性在6W显著下降，丙二醛含量显著增加。血浆酸性磷酸酶活性、免疫球蛋白含量，脾脏免疫球蛋白含量显著下降后上升。肝脏结构在8W时开始出现部分细胞核偏移和空泡变性，16W时鳜肝细胞形态不规则，细胞间界限模糊，空泡增多，细胞核消失甚至溶解；肠道结构在8W时较0W肠绒毛低、稀疏且呈不规则，16W肠道绒毛发育情况优于0W和8W。研究表明，越冬前期鳜消化、抗氧化及免疫能力减弱，越冬后期鱼体质量增加明显，而肝脏结构功能受损较严重。本研究可为越冬期鳜投喂养殖管理提供理论依据，促进鳜鱼养殖产业高质量发展。

关键词：鳜低水温越冬期抗氧化免疫能力消化代谢生理变化

茶树CsMCC1和CsMCC2基因的克隆及表达特征性分析

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作物学报 2024年第3期50卷 656-668页

作者：代洪苇刘洁强张丽童华荣袁连玉西南大学食品科学学院/川渝共建特色食品重庆市重点实验室重庆400715

组蛋白乙酰化修饰由组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferases,HATs)和脱乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)共同催化完成,是重要的表观遗传调控方式之一,在植物生长发育、逆境胁迫响应和激素响应的调控过程中均具有重要意义,但对茶... 详细信息

组蛋白乙酰化修饰由组蛋白乙酰化酶(histone acetyltransferases,HATs)和脱乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)共同催化完成,是重要的表观遗传调控方式之一,在植物生长发育、逆境胁迫响应和激素响应的调控过程中均具有重要意义,但对茶树(Camellia sinensis)组蛋白乙酰化修饰的研究还比较少。本研究从‘福鼎大白茶’茶树中克隆获得了2个HATs家族的MCC(MEIOTIC CONTROL OF CROSSOVERS)基因:CsMCC1和CsMCC2,通过生物信息学分析、实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)和亚细胞定位试验对其功能进行解析。结果显示,CsMCC1和CsMCC2基因分别位于茶树1号和7号染色体,分别编码257 aa和269 aa,均属于碱性不稳定亲水性蛋白,与拟南芥AtMCC1具有高度相似的基因结构和蛋白空间结构。系统进化树和保守结构域分析表明,CsMCC蛋白与葡萄、番茄的同源蛋白有较近的亲缘关系,MCC蛋白序列高度保守,均含有GNAT保守结构,属于HAT蛋白的GNAT(GCN5-related N-terminal acetyltransferases)亚家族。拟南芥原生质体亚细胞定位结果显示,CsMCC1和CsMCC2蛋白均定位于细胞质膜。启动子分析显示,在CsMCC1和CsMCC2基因启动子中包含多个与胁迫、光和植物激素调节响应相关的元件。转录组数据和表达分析发现,CsMCC1基因在叶、花和根发育早期的表达量明显高于后期;CsMCC2基因在茶树根部有最高表达,并在根部发育的较长阶段均有较高水平的表达量;2个CsMCC基因均能够被多种非生物胁迫(干旱、盐和冷)和外源激素(MeJA、GA3和IAA)诱导表达。蛋白相互作用预测分析显示,CsMCC蛋白与多个乙酰化转移酶相关蛋白具有关联性。综上所述,CsMCC1和CsMCC2基因具有通过组蛋白乙酰化修饰作用广泛参与茶树的生长发育和环境响应过程的潜能,可为进一步研究CsMCC基因在茶树中的功能提供理论参考。

关键词：茶树组蛋白乙酰化 CsMCC基因表达分析

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