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基于ORF3蛋白抗体的鹅圆环病毒间接ELISA检测方法的建立

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农业生物技术学报 2024年第3期32卷 730-738页

作者：付环茹赵敏江锦秀陈翠腾张靖鹏李兆龙万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建农林大学生命科学学院福建省禽病防治重点实验室/福建省畜禽遗传育种重点实验室/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

鹅圆环病毒(Goose circovirus, GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原，主要感染宿主淋巴细胞，导致免疫功能下降，易造成其他病原继发感染，给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害。为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法... 详细信息

鹅圆环病毒(Goose circovirus, GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原，主要感染宿主淋巴细胞，导致免疫功能下降，易造成其他病原继发感染，给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害。为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法，本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体p ET-32a(+)，构建重组质粒pET-32a-ORF3，经表达条件优化，以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白，SDS-PAGE和Western blot分析表明，获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性。以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原，通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法。优化后的间接ELISA检测条件为：重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4 000 (羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8 000 (羊抗鸭HRP-IgG)。采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus, ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus, AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus, GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测，结果显示，仅GoCV阳性血清为阳性结果，其他病原阳性血清检测结果均为阴性，特异性较强；重复性较好，批内和批间变异系数均小于5%。流行病学调查结果显示，福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染。本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好，可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究。

关键词：鹅圆环病毒(GoCV) ORF3蛋白原核表达间接ELISA 流行病调查

鸽微RNA病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 860-866页

作者：张靖鹏陈翠腾林琳付环茹李兆龙江斌黄瑜万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省禽病防治重点实验室/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013

旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进... 详细信息

旨在建立鸽微RNA病毒(pigeon megrivirus,PiMeV)实时荧光定量RT-PCR检测方法。本研究根据GenBank中PiMeVs序列特征设计特异性检测引物,从信鸽粪便中检测到PiMeV阳性(命名为PiMeV-CHN001株),并对其3 C基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其基因特征后,设计特异性实时荧光定量RT-PCR检测(RT-qPCR)引物组,建立检测PiMeV的RT-qPCR方法。结果显示:PiMeV-CHN001株3 C基因全长为591 bp,编码197个氨基酸,和其他2株野鸽源PiMeV(MeV-B1株和MeV-B2株)核苷酸相似性分别为89.5%和92.0%。建立的检测PiMeV的RT-qPCR方法的标准曲线Y轴截距为37.93,斜率为-3.335,相关系数为1.00,扩增效率为99.4%。特异性强,仅PiMeV出现特异性扩增信号和特异性峰值[Tm值为(81.69±0.22)℃],对鸽源禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)、鸽源禽I型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type I,PPMV-1)、鸽输血传播病毒(pigeon torque teno virus,PTTV)、鸽腺病毒(pigeon adenovirus,PiAd)及鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)检测均未见特异性扩增信号;敏感性优,最低检测限为54.0拷贝·μL^(-1);重复性好,批内和批间变异系数均低于1.5%。用建立的检测方法对42份信鸽粪便样品进行检测,发现2份阳性样品(阳性率为4.76%)。本研究首次证实我国大陆地区信鸽中存在PiMeV,丰富了PiMeV宿主谱信息;建立的RT-qPCR方法为后续开展PiMeV流行病学研究提供支撑。

关键词：信鸽鸽微RNA病毒 3 C基因序列分析实时荧光定量RT-PCR方法

不同紫云英品种根瘤内生细菌的类群和多样性分析

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福建农业学报 2024年第6期39卷 730-737页

作者：方宇刘彩玲林陈强陈济琛贾宪波福建省农业科学院资源环境与土壤肥料研究所福建福州350003

【目的】阐释紫云英根瘤内生菌的群落结构,为研发根瘤菌菌剂及了解固氮机制提供依据。【方法】以福建省种植的不同紫云英品种的根瘤为材料,借助Illumina Miseq PE300测序平台,以16S rRNA基因为靶标,研究不同紫云英品种的根瘤内生细菌的... 详细信息

【目的】阐释紫云英根瘤内生菌的群落结构,为研发根瘤菌菌剂及了解固氮机制提供依据。【方法】以福建省种植的不同紫云英品种的根瘤为材料,借助Illumina Miseq PE300测序平台,以16S rRNA基因为靶标,研究不同紫云英品种的根瘤内生细菌的多样性。【结果】不同品种会影响紫云英根瘤内生细菌的类群和多样性。浙紫5号(ZZ5)的优势属为假单胞菌属(Pseudomonas),其余品种根瘤内生细菌的优势属均为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)。闽紫8号(MZ8)、信阳(XY)和浙紫5号的根瘤内生细菌的多样性指数(Shannon)较高,除了共生固氮的中慢生根瘤菌外,还包括丰富的非根瘤菌,如假单胞菌属、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、杜擀氏菌属(Duganella)、泛菌属(Pantoea)、欧文氏菌属(Erwinia)等。闽紫8号、信阳和浙紫5号这3个品种根瘤中含有较高丰度的致病菌大黄欧文氏菌(Erwinia rhapontici)和菠萝泛菌PA13(Pantoea ananatis PA13)。【结论】紫云英品种对根瘤内生细菌的群落结构有一定影响,浙紫5号的根瘤内生细菌主要为具促生作用的非根瘤菌假单胞菌,而其余品种为具固氮能力的根瘤菌,在生产实际中可以采用紫云英混种的方式达到固氮促生的双重功效。

关键词：紫云英品种根瘤内生细菌多样性

低共熔溶剂提取荔枝壳中的原花青素及其抗氧化活性

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现代食品科技 2024年第2期40卷 246-256页

作者：郑德瑜张瑞芬黄菲董丽红张名位郭朝万贾栩超广东海洋大学食品科技学院广东湛江524088 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室广东广州510610 广东丸美生物技术股份有限公司广东广州510530

该研究通过建立低共熔溶剂(DES)最佳提取工艺为荔枝壳原花青素的绿色高效制备提供技术支撑。通过比较了4种低共熔溶剂与70%(V/V)乙醇提取对荔枝壳原花青素提取效率、化学构成及ORAC抗氧化活性的影响,确定氯化胆碱-1,3-丁二醇为最佳提取... 详细信息

该研究通过建立低共熔溶剂(DES)最佳提取工艺为荔枝壳原花青素的绿色高效制备提供技术支撑。通过比较了4种低共熔溶剂与70%(V/V)乙醇提取对荔枝壳原花青素提取效率、化学构成及ORAC抗氧化活性的影响,确定氯化胆碱-1,3-丁二醇为最佳提取溶剂。HPLC分析表明4种低共熔溶剂与70%(V/V)乙醇提取的荔枝壳原花青素主要成分均为原花青素A2、芦丁、表儿茶素、原花青素B1及山奈酚-3-O-芸香糖苷。进一步通过单因素试验结合正交优化确定了氯化胆碱-1,3-丁二醇提取最佳工艺条件:料液比1:20(g/mL),溶剂摩尔比1:4,溶剂含水量50%(V/V),提取温度60℃,提取时间90 min,在该条件下提取液中的荔枝壳原花青素含量高达5.07 mg PE/mL,是70%(V/V)乙醇提取的1.4倍,其ORAC值及DPPH和ABTS^(+)自由基的IC_(50)值分别为5496.25μmol TE/mL、27.35μg PE/mL和23.82μg PE/mL,均优于70%(V/V)乙醇提取的原花青素(3370.17μmol TE/mL、36.41μg PE/mL和31.56μg PE/mL)(P<0.05),研究结果表明低共熔溶剂在荔枝壳原花青素提取方面具有显著优势。

关键词：荔枝壳原花青素低共熔溶剂抗氧化

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氮钙互作对花生氮素利用及钙素积累的影响

中国油料作物学报 2024年第4期46卷 904-912页

作者：尤召阳王建国刘颖闫振辉张佳蕾万书波青岛农业大学农学院山东青岛266109 山东省农业科学院山东济南250100 湖南农业大学农学院湖南长沙410125

为探讨氮钙配施对花生氮素利用及钙素积累的影响,本研究以花育25号为试验材料,在济阳和饮马泉试验基地进行试验,分别设置0和600 kg·hm^(-2)(Ca0、Ca600)2个钙肥水平,以及0、75、150、225、300 kg·hm^(-2)(N0、N75、N150、N225、N300)... 详细信息

为探讨氮钙配施对花生氮素利用及钙素积累的影响,本研究以花育25号为试验材料,在济阳和饮马泉试验基地进行试验,分别设置0和600 kg·hm^(-2)(Ca0、Ca600)2个钙肥水平,以及0、75、150、225、300 kg·hm^(-2)(N0、N75、N150、N225、N300)5个氮肥水平,研究氮钙互作对花生氮代谢酶和氮素利用及钙素积累的影响。结果表明,氮钙互作显著提高花生生育前期叶绿素含量,饱果期Ca0条件下施氮花生SPAD值比不施氮提高3.8%~14.8%,Ca600条件下提高3.9%~15.2%;氮肥可提高花生氮代谢酶活性,成熟期Ca0处理在N300条件下谷氨酰胺合成酶(GS)活性较N0条件提高了57.8%,Ca600处理提高了87.3%;随着施氮量的增加氮素利用效率逐渐降低,而施用钙肥可提高花生氮素利用效率,在相同施氮条件下,Ca600较Ca0的氮肥偏生产力、氮肥农学利用效率和氮素利用效率分别增加10.1%~24.6%、7.1%~48.7%和2.1%~16.6%;氮钙互作提高了成熟期荚果中的钙素分配率,相同施氮条件下,Ca600处理较Ca0处理荚果中钙素分配率增加2.5~15.0个百分点,且在N225处理荚果中钙素分配率最大。综上,氮钙互作有利于提高花生生育前期叶绿素含量,增加氮代谢酶活性,提高氮素利用效率,促进钙素向荚果的分配,且Ca600N150和Ca600N225处理的综合表现最优。

关键词：花生氮肥钙肥氮代谢酶氮素利用钙素积累

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一株自絮凝细菌Massilia sp.W12的多相分类鉴定及全基因组分析

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水生生物学报 2024年

作者：高娜陈诚赵秀侠方婷崔凯卢文轩安徽省农业科学院水产研究所安徽省水产增养殖重点实验室

生物絮团的功能主体是高度复杂的微生物聚集体,设计和优化复杂的微生物群落结构和活性对生物絮团性能的提升具有重要意义。研究以筛选自絮凝菌作为生物絮团系统外源强化菌株为目的,从中华草龟养殖池塘中分离纯化出一株自絮凝菌株,对其... 详细信息

生物絮团的功能主体是高度复杂的微生物聚集体,设计和优化复杂的微生物群落结构和活性对生物絮团性能的提升具有重要意义。研究以筛选自絮凝菌作为生物絮团系统外源强化菌株为目的,从中华草龟养殖池塘中分离纯化出一株自絮凝菌株,对其进行多相分类学鉴定确定W12菌株的分类地位,基因注释分析探讨其作为强化菌株的可行性。W12菌株与Massilia arenosa MC02T相似性最高,为96.21%, W12菌株与其亲缘关系较近的几株模式菌株的ANI值在71.61%—72.23%, dDDH值在19.6%—22.9%,远低于判别细菌新种的阈值,进一步表明W12为一株马赛菌属新种。此外,全基因组分析发现W12的自絮凝机制可能与喜树脂动胶菌相似,由胞外多糖和PEP-CTERM蛋白质共同介导,推测菌株W12通过PHB合成途径Ⅰ涉及PhaA、PhaB和PhaC三种酶来合成PHB。本研究从中华草龟养殖池塘分离到的自絮凝菌株W12是一株马赛菌属新种, W12菌株可以合成PHB,由胞外多糖和PEP-CTERM蛋白质共同介导其自絮凝,这些性能与生物絮团的形成息息相关。基因组分析对菌株的潜在应用价值进行挖掘,以期为生物絮团系统的功能强化提供候选菌株。

关键词：多相分类自絮凝胞外多糖 PEP-CTERM蛋白质马赛菌

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诏安县青梅省力化栽培技术

福建热作科技 2024年第1期49卷 47-49页

作者：林国容张少平福建省农业科学院亚热带农业研究所福建漳州363005

针对诏安县青梅生产现状,总结了诏安青梅树形矮化、改变种植模式、实行机械化管理等省力化栽培模式。

关键词：青梅诏安栽培省力化

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设施栽培番茄新品种闽农科1号的选育

中国瓜菜 2024年第9期37卷 170-173页

作者：张前荣林珲裘波音叶新如刘建汀李永平李大忠温庆放朱海生福建省蔬菜遗传育种重点实验室·福建省农业科学院作物研究所·福建省蔬菜工程技术研究中心福州350013

闽农科1号是以自交系SH5-3-1-1-1-1-1为母本、SH2-1-1-1-1-1-1为父本选育而成的杂交1代高抗设施型番茄新品种。该品种为无限生长类型,植株长势强,单式花序为主,始花节位7~11节,坐果能力强。单果质量170~210 g,果实近圆形,完熟果大红色,... 详细信息

闽农科1号是以自交系SH5-3-1-1-1-1-1为母本、SH2-1-1-1-1-1-1为父本选育而成的杂交1代高抗设施型番茄新品种。该品种为无限生长类型,植株长势强,单式花序为主,始花节位7~11节,坐果能力强。单果质量170~210 g,果实近圆形,完熟果大红色,无绿肩,有鲜艳色泽,畸裂果率低,硬度高。果实可溶性固形物含量(w,后同)4.4%、番茄红素含量3.70 mg·100 g^(-1)、维生素C含量10.60 mg·100 g^(-1)、总糖含量2.6 g·100 g^(-1)、总酸含量6.11 g·100 g^(-1)、蛋白质含量2.53 g·100 g^(-1)。667 m2产量5000 kg以上,高抗番茄黄化曲叶病毒病(TYLCV)、枯萎病和根结线虫病等病害,适宜于福建省秋冬季设施栽培。2020年9月通过农业农村部非主要农作物品种登记。

关键词：番茄新品种闽农科1号杂交1代

授粉期高温胁迫对夏玉米植株形态、叶片光合及产量的影响

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中国生态农业学报（中英文） 2024年第1期32卷 106-118页

作者：穆心愿马智艳卢良涛吕姗姗刘天学胡秀丽李树岩蒋寒涛范艳萍赵霞唐保军夏来坤中国气象局·河南省农业气象保障与应用技术重点实验室郑州450003 河南省农业科学院粮食作物研究所/河南省玉米绿色精准生产国际联合实验室郑州450002 河南农业大学郑州450046 河南滑丰种业科技有限公司滑县456400

针对黄淮海地区花期高温影响夏玉米安全生产的问题,本研究以热敏感型品种‘先玉335’为试验材料,以大田常温为对照(CK),设置授粉期高温处理(HT),研究授粉期高温胁迫对夏玉米植株形态、叶片光合特性、干物质积累与分配及产量形成的影响... 详细信息

针对黄淮海地区花期高温影响夏玉米安全生产的问题,本研究以热敏感型品种‘先玉335’为试验材料,以大田常温为对照(CK),设置授粉期高温处理(HT),研究授粉期高温胁迫对夏玉米植株形态、叶片光合特性、干物质积累与分配及产量形成的影响。结果表明:2021年和2022年,HT处理的冠层最高温度超过40℃的天数分别为7 d和8 d,高温处理期间冠层最高温度分别较CK高1.7~6.8℃和1.5~4.6℃。HT处理显著提高了夏玉米株高和穗位高,对茎粗和叶面积无显著影响,但延缓了生育后期叶片衰老,2021年和2022年成熟期的叶面积较CK分别显著提高34.69%和163.72%。高温处理期间,HT处理的玉米叶片气孔导度、蒸腾速率和胞间CO_(2)浓度显著升高(P40℃时)则显著降低(P<0.05),反之则显著升高(P<0.05)或无显著变化,叶片整体光合性能下降。高温胁迫解除后,HT处理的叶片光合性能相关参数逐渐与CK趋于一致。经授粉期高温胁迫处理后,玉米茎秆、叶片、苞叶、穗轴和单株干重降低,其中穗轴干重降幅最大,而雄穗和花丝干重增加,使得干物质向茎秆、叶片、雄穗、花丝等部位的分配比例增加,而向穗轴的分配比例显著减少(P<0.05)。至成熟期,HT处理造成玉米籽粒和单株干重显著减少48.32%和16.71%(P<0.05),而玉米茎秆和叶片干重显著增加35.01%和9.48%(P<0.05)。HT处理的结实率和穗粒数分别显著下降54.43%和53.19%(P<0.05),百粒重显著提高10.13%(P<0.05),但籽粒产量显著降低46.82%(P<0.05)。综上,授粉期高温胁迫增强了玉米叶片气孔蒸腾,增加了胞间CO_(2)浓度,降低了叶片羧化效率和水分利用效率,导致植株整体光合性能下降,制约了光合同化物积累及向穗部的转移分配,导致结实率显著下降,穗粒数显著减少,制约了花后光合同化物从“源”(茎秆和叶片)向“库”(籽粒)的转运,最终导致籽粒产量大幅下降。

关键词：夏玉米授粉期高温胁迫光合性能干物质积累与分配产量

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