基于ORF3蛋白抗体的鹅圆环病毒间接ELISA检测方法的建立

作     者：付环茹 赵敏 江锦秀 陈翠腾 张靖鹏 李兆龙 万春和 FU Huan-Ru;ZHAO Min;JIANG Jin-Xiu;CHEN Cui-Teng;ZHANG Jing-Peng;LI Zhao-Long;WAN Chun-He

作者机构：福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福建农林大学生命科学学院 福建省禽病防治重点实验室/福建省畜禽遗传育种重点实验室/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2024年第32卷第3期

页      面：730-738页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系(水禽)(CARS-42-18) 福建省科技计划(2020J06029 2020R1026009 2021R1026001 2021R1026006 2023R1076 2023R1077) 福建省农业科学院科技计划(CXPT202108 CXTD2021005-1) 

主　　题：鹅圆环病毒(GoCV) ORF3蛋白 原核表达 间接ELISA 流行病调查 

摘      要：鹅圆环病毒(Goose circovirus, GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原，主要感染宿主淋巴细胞，导致免疫功能下降，易造成其他病原继发感染，给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害。为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法，本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体p ET-32a(+)，构建重组质粒pET-32a-ORF3，经表达条件优化，以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白，SDS-PAGE和Western blot分析表明，获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性。以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原，通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法。优化后的间接ELISA检测条件为：重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4 000 (羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8 000 (羊抗鸭HRP-IgG)。采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus, ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus, AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus, GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测，结果显示，仅GoCV阳性血清为阳性结果，其他病原阳性血清检测结果均为阴性，特异性较强；重复性较好，批内和批间变异系数均小于5%。流行病学调查结果显示，福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染。本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好，可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究。