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猪丹毒丝菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 337-343页

作者：陈超高春阳刘刚姜志康柳宇张雪莲袁生韩先杰青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 华中农业大学动物科学技术学院、动物医学院湖北武汉430070 佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225

为建立一种快速、敏感的猪丹毒丝菌检测方法, 本试验将猪丹毒丝菌的 grol 基因与载体TA/ Blunt- Zero 相结合构建重组质粒,以该重组质粒 DNA 为模板,筛选最佳反应条件,建立 SYBR Green Ⅰ荧光定量 PCR 检测方法,并对该方法进行灵敏度... 详细信息

为建立一种快速、敏感的猪丹毒丝菌检测方法, 本试验将猪丹毒丝菌的 grol 基因与载体TA/ Blunt- Zero 相结合构建重组质粒,以该重组质粒 DNA 为模板,筛选最佳反应条件,建立 SYBR Green Ⅰ荧光定量 PCR 检测方法,并对该方法进行灵敏度、特异性和重复性测定。结果表明,本研究建立的检测方法对在 2×10^(2)~2×10^(9)copies/ μL 浓度范围内的质粒标准品有良好的线性关系, 线性相关系数 R^(2)=0.999 5,标准曲线为 y=-3.231x+41.834,未见非特异性扩增。该方法对质粒标准品最低检测浓度为 20 copies/ μL,敏感度比普通 PCR 提高了 1 000 倍。用该方法检测猪支气管败血波氏杆菌(Bb)、猪链球菌 3 型(Ss3)、猪链球菌 2型(Ss2)、大肠杆菌(***)、沙门菌(Salmonella)和多杀性巴氏杆菌(Pm)时,检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。重复试验结果显示,组内和组间的变异系数均小于 2%,表明该方法具有良好的重复性。运用本试验建立的方法对 20 株疑似猪丹毒丝菌临床样品进行检测,阳性检出率为 60%,高于普通 PCR 检出率(50%)。综上,本试验建立的检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,适合临床上快速诊断丹毒丝菌。

关键词：猪丹毒丝菌 grol基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 检测方法

糙小米不同加工阶段多酚组分和抗氧化活性变化研究

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中国粮油学报 2024年第8期39卷 89-96页

作者：苏情陈利容孙琳琳杨延兵郭玉秋王兴亚刘开昌龚魁杰山东省农业科学院作物研究所济南250100 山东省农业科学院济南250100

为了研究糙小米(BM)经过发芽(GM)、挤压膨化(EM)和超微粉碎(UM)连续加工过程中游离多酚组分和抗氧化活性的变化,采用高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS)分析了糙小米多酚组分,并进行了体外抗氧化实验和秀丽隐杆线虫体内实验分析糙小米游... 详细信息

为了研究糙小米(BM)经过发芽(GM)、挤压膨化(EM)和超微粉碎(UM)连续加工过程中游离多酚组分和抗氧化活性的变化,采用高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS)分析了糙小米多酚组分,并进行了体外抗氧化实验和秀丽隐杆线虫体内实验分析糙小米游离多酚抗氧化活性的变化。结果表明:各加工阶段产品的游离多酚含量均显著高于BM(P<0.05),GM比BM增加了84.16%,EM和UM的游离多酚含量持续增加,UM含量最高为(26.37±0.40)mg/g DW。糙小米中共检测到18种游离态多酚,其中BM仅检测到8种,GM中检测到11种多酚组分,对比BM变化了7种。EM和UM对比GM处理变化较小,可溶性结合酚类组分增加,但是肉桂酸和阿魏酸衍生物减少。GM的羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力(FRAP)以及秀丽隐杆线虫超氧化物歧化酶(SOD)活力[(2.74±0.23)U/mL]、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力[(30.30±0.96)nmol/min/mL]、丙二醛(MDA)降低水平和12 d存活率都显著(P<0.05)高于其他组。EM和UM之间抗氧化活性差异不大,但均显著(P<0.05)高于BM。发芽处理可以显著增加游离多酚的含量和组成,挤压和超微加工进一步促进游离多酚的释放,各个加工阶段产品中游离多酚的抗氧化活性均高于对照,多酚组分对抗氧化活性的影响大于含量。

关键词：糙小米游离态多酚组分分析抗氧化活性

白藜芦醇通过SIRT1/PGC-1α影响牛肌管细胞线粒体生物发生和肌纤维类型转化

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食品科学 2024年第4期45卷 1-9页

作者：张静月董鹏程左惠心梁荣蓉毛衍伟张一敏杨啸吟罗欣朱立贤山东农业大学食品科学与工程学院国家牛肉加工技术研发专业中心山东泰安271018

以牛肌管细胞为研究对象,通过添加白藜芦醇探究其对牛肌管细胞肌纤维类型转化的影响及其作用机制。通过噻唑蓝法和比色法对细胞活力和相关代谢酶活力进行测定,对成肌调节因子、肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)以及线粒体生物... 详细信息

以牛肌管细胞为研究对象,通过添加白藜芦醇探究其对牛肌管细胞肌纤维类型转化的影响及其作用机制。通过噻唑蓝法和比色法对细胞活力和相关代谢酶活力进行测定,对成肌调节因子、肌球蛋白重链(myosin heavy chains,MyHCs)以及线粒体生物发生相关分子的基因和蛋白表达量进行测定。结果表明,白藜芦醇处理显著提高了Myf5、Myf6、MyoG和MyoD的基因表达水平(P<0.05),促进了牛肌管细胞分化。白藜芦醇处理显著提高了慢肌纤维蛋白(slow MyHC)的表达,降低了快肌纤维蛋白(fast MyHC)表达,同时上调了MyHC I和MyHC IIa基因表达水平,下调了MyHC IIx和MyHC IIb基因表达水平(P<0.05)。白藜芦醇还能显著提高牛肌管细胞中的琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性,降低乳酸脱氢酶活性(P<0.05),此外,白藜芦醇显著提高了沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-gamma coactivator-1α,PGC-1α)、核呼吸因子(nucleus respiratory factors,NRF)-1、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。添加SIRT1抑制剂6-氯-2,3,4,9-四氢-1H-咔唑-1-甲酰胺(1H-carbazole-1-carboxam,EX527)后,显著削弱了白藜芦醇诱导的肌纤维类型转化(P<0.05),白藜芦醇对SIRT1、PGC-1α、NRF-1和TFAM的基因和蛋白表达的促进作用被EX527显著削弱(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路促进线粒体生物发生,进而促进牛肌管肌纤维类型的转化。

关键词：白藜芦醇牛肌管细胞沉默信息调节因子1/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α 肌纤维类型转化线粒体生物发生

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牛肉宰后成熟过程中细胞自噬的变化分析

食品科学 2024年第15期45卷 214-221页

作者：李叶鲁文洁王海蓉杨啸吟刘昀阁梁荣蓉毛衍伟张一敏朱立贤山东农业大学食品科学与工程学院国家牛肉加工技术研发专业中心山东泰安271018

本研究分析宰后牛肉成熟14 d过程中细胞自噬的变化规律及其与牛肉品质间的关系。牛肉宰后成熟过程中,肉色方面,L*值随成熟时间延长而升高,a*值、b*值均呈现先升高后降低的趋势;嫩度随成熟时间延长不断提高,剪切力与肌间线蛋白(Desmin)... 详细信息

本研究分析宰后牛肉成熟14 d过程中细胞自噬的变化规律及其与牛肉品质间的关系。牛肉宰后成熟过程中,肉色方面,L*值随成熟时间延长而升高,a*值、b*值均呈现先升高后降低的趋势;嫩度随成熟时间延长不断提高,剪切力与肌间线蛋白(Desmin)表达量均呈现下降趋势(P<0.05);保水性随成熟时间的延长而下降,贮藏损失率和蒸煮损失率上升(P<0.05)。进一步对自噬相关蛋白进行研究,牛肉宰后成熟过程中,Beclin-1与微管相关蛋白1轻链3作为细胞自噬发生的标志性蛋白,其表达量均呈先升高后降低的趋势,并在12 h达到最大。调控自噬的AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)-酵母Atg1同源蛋白激酶(UNC-51 like kinase 1,ULK1)通路作为一条重要的能量代谢通路,在缺血缺氧环境下能够诱导细胞自噬的发生。本研究结果表明,牛肉宰后成熟过程中AMPK、p-AMPKThr172、ULK1的蛋白表达量均呈先升高后降低的趋势,并在12 h达到最大,mTOR表达量则持续下降(P<0.05),说明细胞自噬在宰后0~12 h增强。相关性分析结果显示,宰后自噬相关蛋白表达水平与牛肉的肉色呈负相关,与蒸煮损失、剪切力、Desmin蛋白相对表达量呈正相关(P<0.05)。综上所述,宰后牛肉成熟336h过程中可能通过AMPK-mTOR-ULK1通路激活细胞自噬进而对牛肉品质起到一定的调控作用。

关键词：牛肉宰后成熟细胞自噬品质

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细菌主导的红肉腐败机制研究进展

肉类研究 2024年第8期38卷 63-71页

作者：孙歌武桐煊毛衍伟李俊玲朱立贤仝林张新军成海建谷月张一敏山东农业大学食品科学与工程学院山东省畜产品质量安全中心国家肉牛牦牛产业技术体系通辽综合试验站国家肉牛牦牛产业技术体系中卫综合试验站国家肉牛牦牛产业技术体系济南综合试验站国家肉牛牦牛产业技术体系白城综合试验站

由细菌主导的红肉腐败是一个涉及多种菌相互竞争、相互作用的复杂动态过程，深入了解细菌引起的红肉腐败机制对于抑制肉类腐败进程、开发红肉及其制品防腐措施、延长肉品货架期有重要意义。本文讨论3种红肉（牛肉、猪肉和羊肉）屠宰分... 详细信息

由细菌主导的红肉腐败是一个涉及多种菌相互竞争、相互作用的复杂动态过程，深入了解细菌引起的红肉腐败机制对于抑制肉类腐败进程、开发红肉及其制品防腐措施、延长肉品货架期有重要意义。本文讨论3种红肉（牛肉、猪肉和羊肉）屠宰分割过程中腐败微生物的主要污染来源和干预措施，总结不同包装条件下肉类优势腐败菌，重点讨论细菌引起的红肉腐败机制，发现动物皮毛和分割间的接触面是红肉表面微生物污染的主要来源，在各个环节采取2种或多种抗菌技术能更好地降低细菌初始污染水平；不同红肉中优势菌在相同包装条件下存在一定差异，但大致相同；微生物通过丙酮酸代谢使肉产生异味，同时产生信号分子，调节蛋白酶和脂肪酶分泌，引起肉蛋白降解和脂肪分解，导致肉类产生黏液、软化等腐败现象。本文旨在为控制红肉中的细菌腐败提供理论基础。

关键词：腐败牛肉猪肉羊肉细菌优势菌机制

不同钙与有效磷水平对高产深县猪繁殖性能、血清标志物及OPG-RANKL-RANK信号系统的影响

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 176-183页

作者：宋佳纯曹洪战李尚桂若虹刘吉祥刘松瓒芦春莲河北农业大学动物科技学院河北保定071000

旨在研究不同钙与有效磷水平对高产深县猪繁殖性能、血清标志物及OPG-RANKL-RANK信号系统的影响。试验选择以杜洛克公猪精液人工授精、总产仔数11头及以上的健康深县母猪45头,随机分为5组,每组设9个重复,每个重复1头猪。低水平组钙含量0... 详细信息

旨在研究不同钙与有效磷水平对高产深县猪繁殖性能、血清标志物及OPG-RANKL-RANK信号系统的影响。试验选择以杜洛克公猪精液人工授精、总产仔数11头及以上的健康深县母猪45头,随机分为5组,每组设9个重复,每个重复1头猪。低水平组钙含量0.55%,有效磷含量0.27%;推荐组钙含量0.63%,有效磷含量0.31%;高水平组Ⅰ钙含量0.71%,有效磷含量0.35%;高水平组Ⅱ钙含量0.79%,有效磷含量0.39%;高水平组Ⅲ钙含量0.87%,有效磷含量0.43%。本试验共进行35 d。结果显示,与推荐组相比,高水平组Ⅲ的钙与有效磷水平显著降低了体质量损失和背膘损失(P<0.05),高水平组Ⅰ的仔猪哺乳期成活率显著升高(P<0.05)。与推荐组相比,高水平组Ⅲ的免疫球蛋白G含量显著下降(P<0.05);与低水平组相比,高水平组Ⅱ的IgM含量显著升高(P<0.05);与推荐组相比,高水平组Ⅱ的甲状旁腺素含量显著下降(P<0.05);低水平组的降钙素含量显著下降(P<0.05),高水平组Ⅱ和Ⅲ的成纤维细胞生长因子23含量显著上升(P<0.05);低水平组的雌激素含量显著上升(P<0.05)。与推荐组相比,高水平组Ⅲ的骨特异性碱性磷酸酶和碱性磷酸酶活性显著下降(P<0.05),低水平组的核因子κB配体受体激活剂含量显著上升(P<0.05)。由此可见,高钙磷水平可以提高哺乳母猪的繁殖性能、免疫球蛋白含量和骨形成水平,其中以钙含量为0.79%,有效磷含量为0.39%时最好。

关键词：钙有效磷深县猪生长性能钙磷代谢骨代谢

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日光温室薄膜全自动清洗机研制与试验

农业工程学报 2024年第1期40卷 238-246页

作者：李天华董广胜施国英魏珉王聪武玉洋山东农业大学机械与电子工程学院泰安271018 山东省农业装备智能化工程实验室泰安271018 山东农业大学园艺科学与工程学院泰安271018

针对日光温室薄膜人工清洗劳动强度大、自动化清洗设备缺乏的现状,该研究设计了一种日光温室薄膜全自动清洗机。为减小整机质量并降低成本,采用双蜗轮蜗杆电机分别驱动清洗主机的毛刷与爬升轴;设计地面移位换行装置,用以承载清洗主机沿... 详细信息

针对日光温室薄膜人工清洗劳动强度大、自动化清洗设备缺乏的现状,该研究设计了一种日光温室薄膜全自动清洗机。为减小整机质量并降低成本,采用双蜗轮蜗杆电机分别驱动清洗主机的毛刷与爬升轴;设计地面移位换行装置,用以承载清洗主机沿温室长度方向移动;为实现自动换行清洗,设计棚顶移位换行装置,调整棚顶吊绳安装高度,避免吊绳在换行作业时与棚面产生干涉而影响换行质量或损伤薄膜。基于多传感器融合与数据校验技术,保证清洗主机、棚顶与地面移位装置间的协作实时性、一致性及可靠性。为验证设计方案的合理性与可行性,以参照日光温室跨度、脊高、肩高参数10:1制作模型温室,按外形尺寸5:1加工清洗样机,并进行对齐、倾斜偏移及清洗效果验证试验。结果表明,清洗主机升降时的水平偏移量在±3°以内,左右偏移量在±7 mm以内(换行操作时各偏移量无累积);地面与棚顶移位换行装置的单次换行误差与多次换行累计误差均在1 mm左右;毛刷材料选型与关键参数设计合理,可对薄膜表面灰尘进行有效清洗,洗净率为95.4%,清洗效果明显。该清洗机在丰富国内日光温室清洗装备类型的同时,有效解决了团队前期研发清洗机质量大、易伤膜、自动化水平低等问题,为温室大棚薄膜相关清洗设备的设计研发提供了参考。

关键词：日光温室薄膜清洗机试验自动换行机机协作

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连栋温室分段变距喷雾机器人设计与试验

农业机械学报 2024年第2期55卷 170-179页

作者：李天华董广胜姚玉康张观山王德伦施国英山东农业大学机械与电子工程学院泰安271018 山东省农业装备智能化工程实验室泰安271018 泰安市质量技术检验检测研究院泰安271000

针对国内连栋温室缺乏植保喷雾机、机械走直定位与换轨转向精度低等问题,设计了一种连栋温室分段变距喷雾机器人,在实现无人化喷药的同时提高作业精度。为满足连栋温室机械作业路轨结合、精准切换的要求,提出一种通用型移动底盘,并确定... 详细信息

针对国内连栋温室缺乏植保喷雾机、机械走直定位与换轨转向精度低等问题,设计了一种连栋温室分段变距喷雾机器人,在实现无人化喷药的同时提高作业精度。为满足连栋温室机械作业路轨结合、精准切换的要求,提出一种通用型移动底盘,并确定其关键设计参数;为减少底盘上下轨时的偏移量,设计轨上矫正装置,通过分析计算及试验验证,确定其安装余量为4 mm;针对底盘对轨误差大的问题,提出一种二维码融合陀螺仪及光电传感器双向垂直寻迹的路面关键点定位与转向控制方法。设计分段变距喷雾装置,提出一种丝杆滑台驱动的喷杆变距方案,分析校验其驱动参数以满足工作要求;基于滚针轴承设计喷杆辅助防抖装置,减小因喷杆剧烈抖动带来的滑台与喷杆损伤。开发底盘运动及分段变距喷雾控制系统,实现喷雾机器人在连栋温室内的全程自动化作业。最后,对样机进行底盘性能与喷雾效果试验。底盘作业时直线行走与对轨误差平均值分别为4.8、5.8 mm,满足控制精度要求;避障距离为34 cm,满足安全性要求;防抖装置的安装使喷杆行进方向的抖动量从-1°~1.3°降低到±0.4°内,喷头方向的抖动量从±0.5°降低到±0.3°内,防抖效果显著;分段变距喷雾作业后,盛果期番茄叶片正面雾滴沉积量为1.76μL/cm^(2),反面沉积量为0.2μL/cm^(2),雾滴体积中径在100~180μm之间,满足作业要求。

关键词：连栋温室喷雾机器人扫码定位分段喷雾变距喷雾

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苹果颗粒离散元接触参数标定与仿真试验

农业工程学报 2024年第12期40卷 66-76页

作者：张宏建韩欣杨化伟陈修波赵光泽孙经伟孙林林王金星山东农业大学机械与电子工程学院泰安271018 山东省农业机械科学研究院济南252100 山东省园艺机械与装备重点实验室泰安271018

为精准确定红富士、花牛和黄元帅苹果的接触参数,该研究基于离散元法对3种苹果颗粒的仿真模型进行接触参数标定试验。首先,创建3种苹果的离散元填充模型,并通过电子秤、万能试验机等试验设备,确定其本征参数。其次,通过碰撞弹跳试验、... 详细信息

为精准确定红富士、花牛和黄元帅苹果的接触参数,该研究基于离散元法对3种苹果颗粒的仿真模型进行接触参数标定试验。首先,创建3种苹果的离散元填充模型,并通过电子秤、万能试验机等试验设备,确定其本征参数。其次,通过碰撞弹跳试验、斜面滑移试验和斜面滚动试验,得到红富士、花牛和黄元帅苹果与亚克力板的碰撞恢复系数分别为0.473、0.432和0.466;与亚克力板的静摩擦系数分别为0.435、0.536和0.519;与亚克力板的滚动摩擦系数分别为0.007 7、0.013 8和0.008 8。最后,通过堆积角试验、最陡爬坡试验确定二次回归正交旋转组合试验,得到红富士、花牛和黄元帅同种苹果间的碰撞恢复系数分别为0.487、0.348和0.469;静摩擦系数分别为0.584、0.869和0.644;滚动摩擦系数分别为0.084、0.096和0.093。试验结果表明,红富士、花牛和黄元帅苹果仿真试验与物理试验的休止角相对误差分别为5.95%、6.55%、8.67%。研究结果可为苹果物理特性和低损采收技术研究提供理论依据和模型支撑。

关键词：离散元模型苹果接触参数标定与试验堆积角