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大樱桃病毒潜在过渡寄主和昆虫介体的检测

植物保护学报 2020年第1期47卷 161-168页

作者：张雅雯窦宝存陈珍珍曹欣然原雪峰山东农业大学植物保护学院泰安271000 青岛农业大学植物医学院山东青岛266109

为分析大樱桃病毒潜在的过渡寄主和昆虫介体,利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)对采集自大樱桃园内的杂草、昆虫及园区周边的常绿植物进行大樱桃8种病毒的检测,通过蛋白质印迹法(Western blot)对RT-PCR检测结果进行验证... 详细信息

为分析大樱桃病毒潜在的过渡寄主和昆虫介体,利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)对采集自大樱桃园内的杂草、昆虫及园区周边的常绿植物进行大樱桃8种病毒的检测,通过蛋白质印迹法(Western blot)对RT-PCR检测结果进行验证,并经过BLAST比对和系统发育树构建分析大樱桃病毒分离株的亲缘关系。结果显示,分别从大樱桃园内4种杂草商陆Phytolacca aci‐nosa、鸭趾草Commelina communis、马齿苋Portulaca oleracea和一年蓬Erigeron annuus,园区周边3种植物山枣Ziziphus montana、石楠Photinia serrulata和板栗Castanea mollissima,2种害虫绿盲蝽Apolygus lucorum和赤须盲蝽Trigonotylus ruficornis中检测到黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic vi‐rus,CMV);而未检测到其它7种大樱桃病毒;且Western blot验证结果显示RT-PCR检测结果可靠。4种杂草、3种周边植物和2种昆虫的CMV RNA3序列均与大樱桃CMV分离株YT-CH(登录号KY646104)的RNA3序列相似度较高,为97.08%~99.54%;系统发育树显示,商陆CMV-PA分离株与大樱桃分离株YT-CH的亲缘性较高,赤须盲蝽分离株CMV-CX与马齿苋分离株CMV-PO、山枣分离株CMV-ZM及石楠分离株CMV-PS的亲缘性较高。表明上述7种植物和2种盲蝽是大樱桃病毒的潜在过渡寄主和昆虫介体,在大樱桃病毒病防治中应给予一定的关注。

关键词：大樱桃病毒昆虫介体过渡寄主黄瓜花叶病毒(CMV)

两种类型黄瓜花叶病毒卫星RNA的序列、结构以及对辅助病毒的致病性调控分析

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植物病理学报 2018年第3期48卷 365-372页

作者：刘珊珊于成明曹欣然耿国伟李向东师科荣原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理系山东省农业微生物重点实验室泰安271018 烟台市农业技术推广中心烟台264001 山东农业大学动物科技学院泰安271018

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)卫星RNA(satellite RNA,satRNA)通常影响CMV的致病性。本研究设计了检测satCMV的简并引物,通过RT-PCR从山东省泰安市3种自然发病寄主中检测到satCMV,发现了两类长度有明显差异的satCMV:白菜与... 详细信息

黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)卫星RNA(satellite RNA,satRNA)通常影响CMV的致病性。本研究设计了检测satCMV的简并引物,通过RT-PCR从山东省泰安市3种自然发病寄主中检测到satCMV,发现了两类长度有明显差异的satCMV:白菜与萝卜中克隆的satCMV为339个核苷酸,二者的核苷酸一致率为99.41%;烟草中克隆的satCMV为383个核苷酸,与白菜和萝卜中satCMV的核苷酸序列一致率均为71.06%。系统进化分析表明这两类长度有明显差异的satCMV亲缘关系较远。两种类型的satCMV与CMV-Fny混合接种对CMV致病症状的调控存在明显差异。利用m Fold软件分析了两类不同长度的CMV卫星RNA基因组及其互补链的RNA结构特征,表明两类sat CMV与CMV互作的活跃度以及核心结构域存在差异。两类satCMV全基因组的克隆以及结构分析为研究不同类型satCMV与CMV的互作及其对CMV致病性的影响奠定了基础。

关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA 系统进化 RNA结构

国际病毒分类委员会(ICTV)2017分类系统与第九次分类报告的比较及数据分析

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植物病理学报 2019年第2期49卷 145-150页

作者：原雪峰于成明山东农业大学植物保护学院植物病理系山东省农业微生物重点实验室泰安271018 山东农业大学生命科学学院泰安271018

本文结合国际病毒分类委员会(ICTV)第九次报告和ICTV官方网站公布的2017版分类系统,比较了二者的差异;同时就2017版分类系统的数据进行了全面分析,包括不同核酸类型病毒的种类和比例,植物病毒的种类和比例,以及2017版分类系统中几个值... 详细信息

本文结合国际病毒分类委员会(ICTV)第九次报告和ICTV官方网站公布的2017版分类系统,比较了二者的差异;同时就2017版分类系统的数据进行了全面分析,包括不同核酸类型病毒的种类和比例,植物病毒的种类和比例,以及2017版分类系统中几个值得关注的问题。

关键词：国际病毒分类委员会 2017分类系统第九次分类报告

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)S3和S10基因组非编码区对翻译的调控作用

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植物病理学报 2019年第3期49卷 355-361页

作者：袁婷王增辉于成明耿国伟苏陈禹原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室泰安271018 山东农业大学生科学院泰安271018 山东农业大学植物保护学院农药系泰安271018

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)基因组含有5’帽子,无3’poly(A)尾巴,且不同基因组片段的5’和3’末端序列均十分保守。本研究以RBSDV S3和S10为对象,分析其非编码区对翻译的调控作用。研究发现S3和S10的5’... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)基因组含有5’帽子,无3’poly(A)尾巴,且不同基因组片段的5’和3’末端序列均十分保守。本研究以RBSDV S3和S10为对象,分析其非编码区对翻译的调控作用。研究发现S3和S10的5’UTR在有无帽子时均可以正向调控报告基因Fluc的翻译,具备核糖体内部进入位点(IRES)活性,且5’末端的基因组保守序列及邻近序列与IRES活性密切相关;而对应的3’UTR则抑制5’UTR对翻译的正调控效应,其分子基础是5’UTR和3’UTR之间的RNA-RNA互作,且该互作也抑制帽子依赖型翻译的效率。这是首次关于有帽子植物RNA病毒中IRES元件的报道,研究结果对了解植物双链RNA病毒基因组非编码区对翻译的调控作用具有重要科学意义。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 5’帽子不依赖帽子翻译核糖体内部进入位点 RNA-RNA互作

小麦黄花叶病毒Nib蛋白介导的体外转录体系的创建

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植物病理学报 2019年第2期49卷 212-218页

作者：耿国伟于成明李向东原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理学系山东省农业微生物重点实验室泰安271018

本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L^(-1)I... 详细信息

本研究是利用异源表达的小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)复制酶Nib蛋白创建了病毒核酸的体外复制系统。将WYMV的Nib编码序列扩增并插入到大肠杆菌表达载体p MAL-C2X中以构建原核表达质粒p MAL-WYNib。0.4 mmol·L^(-1)IPTG诱导可特异性表达分子量约为100 k Da的M BP-Nib融合蛋白。根据温度梯度测定,20℃下诱导M BP-Nib的可溶性比例较高,约为30%,可满足M BP标签的亲和层析。通过与WYM V的其他蛋白和烟草丛顶病毒的RdRp进行比较,纯化的M BP-Nib融合蛋白可以特异性识别WYM V RNA1和RNA2的3'末端区域并体外合成其互补链,此体外转录体系可用于WYMV复制调控的研究。

关键词：小麦黄花叶病毒体外转录 Nib蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶

RNA病毒表达调控研究中的RNA结构分析技术

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病毒学报 2018年第4期34卷 579-585页

作者：王德亚于成明丁诚实原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理系泰安271018 枣庄学院生命科学学院枣庄277160

RNA病毒的多个生命过程如基因组复制、蛋白翻译等均需要特定RNA元件的调控,RNA结构是其发挥调控作用的分子基础,研究这些RNA元件结构及其在调控过程中的动态变化,将有助于深度解析相应过程的调控机制。RNA结构分析技术可以解析RNA元件... 详细信息

RNA病毒的多个生命过程如基因组复制、蛋白翻译等均需要特定RNA元件的调控,RNA结构是其发挥调控作用的分子基础,研究这些RNA元件结构及其在调控过程中的动态变化,将有助于深度解析相应过程的调控机制。RNA结构分析技术可以解析RNA元件的结构（二级结构和三级结构）。目前,RNA结构体分析技术主要有以下几种：Rnase酶法、In-line probing技术、SHAPE技术（Selective 2’-hydroxyl acylation analyzed by primer extension）、核磁共振技术、RNA结晶以及体内分析技术。本文将对RNA结构分析技术的发展历程、具体技术原理和操作细节、未来发展进行叙述,为相关科研工作提供技术参考。

关键词： RNA病毒表达调控 RNA结构

植物RNA病毒不依赖帽子翻译机制的研究进展

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病毒学报 2017年第4期33卷 652-660页

作者：王德亚原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理系山东省农业微生物重点实验室泰安271018

真核生物系统中,mRNA 5′末端帽子结构通过结合翻译起始因子eIF4E进而招募40S核糖体亚基,对蛋白翻译的起始调控至关重要,而3′末端poly(A)尾则通过介导mRNA环化提高翻译效率。然而,许多植物RNA病毒的基因组缺乏5′帽子结构,甚至3′末端... 详细信息

真核生物系统中,mRNA 5′末端帽子结构通过结合翻译起始因子eIF4E进而招募40S核糖体亚基,对蛋白翻译的起始调控至关重要,而3′末端poly(A)尾则通过介导mRNA环化提高翻译效率。然而,许多植物RNA病毒的基因组缺乏5′帽子结构,甚至3′末端也不带poly(A)尾,这些病毒进化产生了位于基因组RNA5′末端或3′末端的不依赖帽子翻译元件。本文将重点讨论位于植物病毒基因组RNA 3′末端的不依赖帽子翻译元件(Cap-independent Translation Element,3′CITE),就其结构特征、调控翻译起始和RNA环化等方面的研究进展进行了综述。

关键词：植物RNA病毒帽子不依赖帽子翻译元件 RNA环化

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我国部分烟区烟草病毒病的病原分析

我国部分烟区烟草病毒病的病原分析

烟草丛顶病毒RdRp蛋白-1位移码的调控机制

中国植物病理学会2017年学术年会

作者：刘珊珊原雪峰山东农业大学植物保护学院植物病理系山东省农业微生物重点实验室

烟草病毒病是目前烟草生产上分布最广、发生最为普遍的一类病害,对我国部分烟区造成严重损失。世界各烟区为害烟草的病毒病已报道有20多种,我国已发现的烟草病毒病有17种。为给烟草病毒病防治提供参考,对来自山东省、云南省、贵州省3个... 详细信息

烟草病毒病是目前烟草生产上分布最广、发生最为普遍的一类病害,对我国部分烟区造成严重损失。世界各烟区为害烟草的病毒病已报道有20多种,我国已发现的烟草病毒病有17种。为给烟草病毒病防治提供参考,对来自山东省、云南省、贵州省3个省份6个地区的64份烟草样品进行了20种烟草候选病毒的检测并对发病严重的烟草病毒病进行研究分析。64份烟草样品中共检测出7种烟草病毒,其中黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）检出率较高,分别为34.38%、15.62%和9.38%;两种及两种以上的病毒复合侵染检出率达18.75%。另外,不同烟区的病毒种类组成有差异。通过对三省份不同地区烟草病毒病检测,基本掌握了现阶段我国常见及多发性的烟草病毒病种类,为烟草病毒病的防治提供了数据支持。

关键词：烟草病毒病黄瓜花叶病毒烟草普通花叶病毒马铃薯Y病毒

来源： cnki会议评论

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烟草丛顶病毒RdRp蛋白-1位移码的调控机制