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血必净注射液对烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1表达和急性肝损伤的影响

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中华烧伤杂志 2009年第3期25卷 171-175页

作者：王彦博姚咏明王强王文江第四军医大学西京医院皮肤科西安710032 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

目的了解血必净注射液对烫伤大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肝损伤的影响。方法制作大鼠30％TBSAm度烫伤模型，将78只大鼠按随机数字表法分为假伤组（18只）、烫伤组（30只）和血必净治疗组（30只），分别于伤后8、24、... 详细信息

目的了解血必净注射液对烫伤大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肝损伤的影响。方法制作大鼠30％TBSAm度烫伤模型，将78只大鼠按随机数字表法分为假伤组（18只）、烫伤组（30只）和血必净治疗组（30只），分别于伤后8、24、72h处死取材。观察肝组织病理学变化；测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平；RT—PCR法检测肝组织HMGB1 mRNA表达，蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测肝组织HMGB1蛋白相对表达量，结果分别以积分吸光度比值、吸光度值表示。结果光学显微镜下可见烫伤组大鼠肝组织有大量炎性细胞浸润，以伤后24h较多；治疗组则明显减少。与假伤组比较，烫伤组大鼠血清ALT、AST水平显著增高（P〈0．05或P〈0．01），肝组织HMGB1基因和蛋白表达于伤后8～72h显著增强（P〈0．05或P〈0．01）。与烫伤组比较，治疗组大鼠血清ALT、AST水平有不同程度下降（P〈0．05或P〈0．01）；伤后24、72h肝组织HMGB1 mRNA表达分别为0．60±0．15、0．55±0．07，蛋白水平分别为163±13、160±16，显著低于烫伤组的0．75±0．12、0．78±0．11和200±13、175±14（P〈0．05或P〈0．01）。结论HMGB1作为晚期炎性因子，参与了严重烫伤大鼠肝组织炎性反应的病理过程。血必净治疗可明显下调HMGB1表达，有助于减轻延迟复苏导致的急性肝损伤。

关键词：烧伤高迁移率族蛋白类肝血必净注射液

高迁移率族蛋白B1对人T淋巴细胞白细胞介素-2及其受体表达的影响

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中华急诊医学杂志 2009年第11期18卷 1194-1197页

作者：姚凤华姚咏明黄立锋孟海东董宁解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对健康人T淋巴细胞白细胞介素-2（IL-2），IL-2受体（IL2R）蛋白与基因表达的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法志愿参加医学实验的健康成人10人，近期未服用任何药物，无急慢性疾病及脏器功能... 详细信息

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对健康人T淋巴细胞白细胞介素-2（IL-2），IL-2受体（IL2R）蛋白与基因表达的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法志愿参加医学实验的健康成人10人，近期未服用任何药物，无急慢性疾病及脏器功能障碍，分离其外周血T淋巴细胞（2×10^6／mL），以植物血凝素（PHA）诱导细胞体外增殖反应。给予不同剂量重组人HMGB1（rhHMGB1，0～1000ng／mL）刺激12，48h后收集细胞与培养液上清，采用逆转录聚合酶链反应测定IL-2，IL-2Ra mRNA表达水平，并应用酶联免疫吸附试验检测上清IL-2、可溶性IL-2R（sIL-2R）蛋白含量。结果与T淋巴细胞共培养12h，10、100、1000ng／mLrhHMGB1刺激后IL-2蛋白分泌水平分别为（0．064±0．017）μg/L，（0．076±0．033）ug/L，（0．061±0．02）μg／L，均显著高于对照组[（0．045±0．011）μg/L，P〈0．05或P〈0．01]，IL-2mRNA表达亦明显增强（P〈0．01）。但rhHMGB1刺激48h后随着其作用剂量增加IL-2释放和IL广2mRNA表达呈下降趋势，1000ng／mLrhHMGB1刺激组IL-2／sIL-2R比值较10ng／mL组显著降低[（0．036±0．015）vs．（0．055±0．017），P〈0．05]，同时IL-2RamRNA表达亦明显下调（P〈0．01）。结论HMGB1能显著影响T淋巴细胞IL-2及其受体的表达水平，HMGB1浓度蓄积和作用时间持续可导致T淋巴细胞免疫应答反应由高至低的转化。

关键词：高迁移率族蛋白B1 T淋巴细胞白细胞介素2 自细胞介素2受体免疫反应

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凝溶胶蛋白结构和功能研究新进展

中国病理生理杂志 2010年第7期26卷 1433-1439页

作者：陈琦姚咏明解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

业已明确，细胞骨架重排发生在多种细胞生命活动中，使细胞质在凝胶态和溶胶态之间转换。这一可逆性过程涉及多种蛋白质，其中凝溶胶蛋白（gelsolin）超家族通过切断肌动蛋白丝、脱离肌丝终端、促进肌动蛋白聚集成核等方式控制肌动蛋白... 详细信息

业已明确，细胞骨架重排发生在多种细胞生命活动中，使细胞质在凝胶态和溶胶态之间转换。这一可逆性过程涉及多种蛋白质，其中凝溶胶蛋白（gelsolin）超家族通过切断肌动蛋白丝、脱离肌丝终端、促进肌动蛋白聚集成核等方式控制肌动蛋白的构建，使肌动蛋白在单体和聚合体两种形式问通过聚合解聚作用维持动态平衡…。凝溶胶蛋白作为凝溶胶蛋白家族的成员之一，能够与肌动蛋白结合并且调节肌动蛋白的聚合解聚作用，是一种重要的肌动蛋白结合蛋白，也是目前研究较为详尽和透彻的重要蛋白分子。其主要功能包括调节肌动蛋白活性、细胞运动、细胞凋亡、吞噬功能以及血小板的形成和活化等。许多研究表明，

关键词：凝溶胶蛋白肌动蛋白炎症创伤和损伤

高迁移率族蛋白B1对小鼠巨噬细胞细胞因子和黏附分子表达的影响

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中华急诊医学杂志 2008年第2期17卷 119-122页

作者：刘峰姚咏明董宁于燕盛志勇解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所基础部北京100037

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-10及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞，经不同质量浓度（0、1、10、100、1000ng／m1）HMGB1的刺激，... 详细信息

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-10及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞，经不同质量浓度（0、1、10、100、1000ng／m1）HMGB1的刺激，于不同时间点（0、6、12、24、48、72h）采用实时荧光定量PCR方法测定细胞TNF-α、IL-10及ICAM-1mRNA表达的变化，同时应用酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-10以及sICAM-1蛋白水平的变化。数据采用单因素方差分析。结果1～1000ng／ml的HMGB1作用24h，可使巨噬细胞的TNF-α、ICAM-1基因表达增加，与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01），其中1000ng／ml HMGB1的作用最强，呈剂量一效应关系。而IL-10仅在1000ng／ml HMGB1作用时表达有所增加。以100ng／ml的 HMGB1作用不同时问后，培养上清液TNF-α与sICAM-1的浓度48h达高峰（P〈0．01），呈时间一效应关系，HMGB1对巨噬细胞TNF-α的分泌呈“双峰”特征，而IL-10水平无明显变化。结论一定浓度的HMGB1可诱导巨噬细胞合成、释放促炎细胞因子与黏附分子，具有显著的促炎特性。

关键词：高迁移率族蛋白B1 释放促炎细胞因子小鼠巨噬细胞黏附分子表达小鼠腹腔巨噬细胞 sICAM-1 ICAM-1基因表达细胞培养上清液

活化T细胞核因子-2可介导高迁移率族蛋白B1促进白细胞介素-2转录表达

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中华实验外科杂志 2010年第10期27卷 1425-1428页

作者：刘辉姚咏明丁丽华叶棋浓宋青盛志勇解放军总医院外科重症医学科北京100853 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所军事医学科学院生物工程研究所

目的观察活化T细胞核因子-2（NFAT2）在高迁移率族蛋白B1（HMGB1）促进白细胞介素-2（IL-2）转录表达中的介导作用.方法将构建好的HMGB1和NFAT2质粒单独或共同转染人胚胎肾细胞株293T,同时转染IL-2报告基因,并在此基础上应用小分子干... 详细信息

目的观察活化T细胞核因子-2（NFAT2）在高迁移率族蛋白B1（HMGB1）促进白细胞介素-2（IL-2）转录表达中的介导作用.方法将构建好的HMGB1和NFAT2质粒单独或共同转染人胚胎肾细胞株293T,同时转染IL-2报告基因,并在此基础上应用小分子干扰RNA（siRNA）质粒对内源性及外源性NFAT2表达进行特异性抑制,观察对IL-2报告基因活性的影响.结果在293T细胞中,内源性转染实验促使IL-2报告基因活性增加到17.81±1.49,但随着siRNA质粒转染剂量从0 μg/孔逐渐增加到4.8μg/孔,IL-2报告基因活性在内源性抑制实验中降低最小到1.42±0.17,在外源性抑制实验中活性最高为54.16±5.49,受抑制后降低最小到2.97±0.34.结论 NFAT2介导HMGB1促进IL-2报告基因转录表达.

关键词：高迁移率族蛋白B1 活化T细胞核因子白细胞介素-2 小RNA干扰

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关注调节性T细胞在脓毒症中的免疫学意义

中华急诊医学杂志 2009年第2期18卷 117-119页

作者：姚咏明解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所、急危重症救治中心北京100037

严重创伤、休克及外科大手术应激后常并发脓毒症，是临床危重患者的主要死亡原因之一，已成为现代危重病急救医学面临的世界性难题。临床上对于严重脓毒症的治疗迄今尚缺乏有效的方法，因此进一步了解脓毒症的确切发病机制和关键作用环... 详细信息

严重创伤、休克及外科大手术应激后常并发脓毒症，是临床危重患者的主要死亡原因之一，已成为现代危重病急救医学面临的世界性难题。临床上对于严重脓毒症的治疗迄今尚缺乏有效的方法，因此进一步了解脓毒症的确切发病机制和关键作用环节、寻求新的防治途径无疑具有极其重要的意义。研究提示，免疫功能紊乱参与了脓毒症的病理过程，宿主的免疫功能状态在很大程度上决定着感染诱发炎症反应的结局。

关键词：严重脓毒症调节性T细胞免疫学主要死亡原因免疫功能紊乱免疫功能状态严重创伤手术应激

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞表达T淋巴细胞毒性相关抗原-4水平的影响及受体机制

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中华实验外科杂志 2009年第3期26卷 312-314页

作者：许长涛姚咏明李为民邹一平解放军总医院第二附属医院肝胆外科北京100091 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对小鼠调节性T细胞（Treg）表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA）-4水平的影响及其受体机制。方法免疫磁珠法分离正常C3H／HeN[（Toll样受体4（TLR4）野生型）]小鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg，接种于细... 详细信息

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对小鼠调节性T细胞（Treg）表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA）-4水平的影响及其受体机制。方法免疫磁珠法分离正常C3H／HeN[（Toll样受体4（TLR4）野生型）]小鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg，接种于细胞培养板，各细胞培养孔均加入可溶性抗CD3和可溶性抗CD28作为辅助活化剂。应用／不应用抗TLR4抗体预封闭CD4＋CD25＋Treg表面TLR4，观察HMGB1刺激CD4＋CD25＋Treg表达CTLA-4的时间．效应关系和剂量-效应关系。结果HMGB1（0．1mg／L）刺激CIM＋CD25＋Treg，cTLA-4在24、48、72h表达水平（47．56±5．49、35．83±4．96和31．94±4．65）较正常对照组水平（79．42±2．79）均显著下降（P〈0．01），以48、72h组下降尤为明显；不同剂量HMGB1刺激CD4＋CD25＋Treg48h其CTLA-4表达水平显著下调（P〈0．01），其中以0．1mg／L和1mg／L组表达水平（分别为33．34±4．00和29．90±4．30）降低幅度尤为明显。经封闭TLR4预处理后，给予HMGB1（0．1mg／L）刺激24、48和72hCD4＋CD25＋Treg表达CTLA-4的水平（90．39±8．80、93．13±4．80和80．29±4．31）均较对正常照组（71．03±4．34）显著增强（P〈0．05或P〈0．01）；而不同剂量HMGB1刺激CD4＋CD25＋Treg48h，仅以0．1mg／L组能显著上调CTLA-4的表达水平（P〈0．01）。结论HMGB1通过TLR4负向调节CD4＋CD25＋Treg表达CTLA-4水平，从而影响Treg的免疫活性。

关键词：高迁移率族蛋白B1 Toll样受体4 调节性T细胞

半胱天冬蛋白酶-3在高迁移率族蛋白B1诱导小鼠巨噬细胞凋亡中的作用

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中华实验外科杂志 2008年第10期25卷 1248-1250页

作者：姚咏明刘峰董宁于燕盛志勇解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100037

目的观察半胱天冬蛋白酶（Caspase）-3与核转录因子（NF）．KB在高迁移率族蛋白B1（HMGBl）诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中的作用。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，随机分为对照组、HMGB1组与抑制剂组（HMGB1作用前1h加入Caspase-3抑制剂Z... 详细信息

目的观察半胱天冬蛋白酶（Caspase）-3与核转录因子（NF）．KB在高迁移率族蛋白B1（HMGBl）诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中的作用。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，随机分为对照组、HMGB1组与抑制剂组（HMGB1作用前1h加入Caspase-3抑制剂Z，DEVD-FMK）。采用Hoechst33342染色观察凋亡的形态学变化、流式细胞术检测巨噬细胞凋亡百分率的变化；应用原位荧光染色及流式细胞术检测Caspase-3活性的变化；同时应用酶联免疫吸附试验检测NF—KBp65蛋白的变化。结果HMGBl组巨噬细胞凋亡率为（38．21±4．85）％、抑制剂组为（16．47±3．91）％，均显著高于对照组（4．21±1．64）％（P〈0．01）。经Hoechst33342染色，荧光显微镜观察HMGBl组凋亡细胞明显增多；原位荧光染色观察到HMGB1组Caspase．3荧光强度明显增强，Caspase-3阳性细胞百分率（29．74±4．55）％显著高于抑制剂组（3．02±1．91）％与对照组（7．19±2．46）％（P〈0．01）。同时，HMGB1组、抑制剂组细胞核***活性较对照组显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论Caspase-3和NF-KB是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的重要途径，caspase-3抑制剂可部分阻断HMGB1诱导的巨噬细胞凋亡。

关键词：高迁移率族蛋白B1 脱噬作用巨噬细胞半胱天冬蛋白酶-3 核因子kB

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9活性改变及其与凋亡的关系

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中国中西医结合急救杂志 2009年第3期16卷 171-174页

作者：戴新贵黄显金艾宇航姚咏明张丽娜中南大学湘雅医院ICU 湖南长沙410008 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所北京100048

目的探讨脓毒症时CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9（caspase-3／9）活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系。方法体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg，随机分为对照组、抗CD3／CD28... 详细信息

目的探讨脓毒症时CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9（caspase-3／9）活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系。方法体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg，随机分为对照组、抗CD3／CD28组、抗CD3／CD28＋脂多糖（LPS）组，培养3d后采用流式细胞术检测Treg凋亡率，荧光比色法检测caspase-3／9活性。同时采用盲肠结穿孔术（CLP）复制大鼠脓毒症模型，将动物随机分为正常对照组、假手术组、CLP组，于第3日分离Treg后检测Treg凋亡率和caspase-3／9活性。结果体外实验显示，抗CD3／CD28组和抗CD3／CD28＋LPS组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率均显著高于对照组（P均〈0．01），而抗CD3／CD28＋LPS组Treg凋亡率明显低于抗CD3／CD28组（P〈0．05）。抗CD3／CD28组caspase-3／9活性均显著高于对照组（P均〈0．01）；抗CD3／CD28＋LPS组caspase-3／9活性则明显低于抗CD3／CD28组（P均〈0．01）。体内实验显示，CLP组CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率和caspase-3活性均显著低于正常对照组和假手术组（P均〈0．01），但caspase-9活性改变不明显（P均〉0．05）。结论脓毒症病理过程中CD4^＋CD25^＋Treg凋亡率明显下降，caspase-3激活是诱发Treg凋亡的重要途径之一。

关键词：脓毒症脂多糖调节性T细胞细胞凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶