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基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1800-1809页

作者：马春玲任善会杨雪蔺玉刚李积雲王相伟殷相平孙跃峰万学瑞陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州730046 甘肃农业大学兰州730070 塔里木大学阿拉尔843300 青海省科学技术研究院信息研究所西宁810003

基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验... 详细信息

基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终,筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物;利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒,获得标准曲线y=-3.287 5x+47.87,线性相关系数R^(2)=0.998 6,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性、重复性和灵敏性试验结果表明,该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度高等优点;该引物的最低检测限为6.71拷贝·μL^(-1),各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。以上结果表明,作者建立特异性LSDV的荧光定量PCR检测方法,为LSD预防和控制提供有效的检测手段。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 ORF61 MGB探针荧光定量PCR

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牛结节性皮肤病病毒ORF123基因缺失重组病毒的构建及增殖能力分析

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畜牧兽医学报 2024年第10期 4530-4541页

作者：王芳萍任善会郜晓虹杨雪李积雲王相伟殷相平孙跃峰陈豪泰万学瑞甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所青海省科学技术信息研究所

旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP... 详细信息

旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP基因表达框，克隆至pUC-19T载体，构建基因缺失转移载体pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒。然后将pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，利用蚀斑、梯度稀释和挑取绿色荧光单克隆细胞筛选纯化重组毒株，并鉴定其遗传稳定性和增殖能力。结果显示，利用EGFP筛选标记，通过多次挑斑筛选纯化获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP。该重组病毒至少在8代细胞传代中能稳定表达绿色荧光蛋白，接种MDBK细胞后绘制一步增殖曲线表明该重组病毒滴度略低于亲本毒株。本研究成功获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP,为LSDV ORF123蛋白生物学功能研究以及减毒活疫苗的研制奠定基础。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 ORF123基因增殖能力同源重组重组病毒

Al0.3CoCrFeNi高熵合金与YG15硬质合金钎焊接头组织及力学性能研究

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机械工程学报 2024年

作者：王鹏程李锦政刘维瀚陈海燕李文亚西北工业大学材料学院西北工业大学凝固技术国家重点实验室

AlxCoCrFeNi系高熵合金具有优异的韧性和耐腐蚀性，是深空探测、地质钻探等苛刻服役工况下的理想材料。但其硬度低、摩擦磨损性能差的缺点限制了进一步应用。硬质合金的突出特点是具有超高硬度和良好耐磨性。为使AlxCoCrFeNi系高熵合金... 详细信息

AlxCoCrFeNi系高熵合金具有优异的韧性和耐腐蚀性，是深空探测、地质钻探等苛刻服役工况下的理想材料。但其硬度低、摩擦磨损性能差的缺点限制了进一步应用。硬质合金的突出特点是具有超高硬度和良好耐磨性。为使AlxCoCrFeNi系高熵合金适应摩擦磨损等恶劣服役环境，获得兼具高韧性与高硬度的复合构件。本研究采用BNi2钎料钎焊连接YG15硬质合金与Al0.3CoCrFeNi高熵合金，阐明了钎焊温度对YG15/Al0.3CoCrFeNi钎焊接头的微观组织形貌及其力学性能影响。结果表明：焊缝中心组织以Ni（s,s）为主，高熵合金侧扩散区由BNi2与基体在钎焊过程中互扩散形成，硬质合金侧形成了W（s,s）相。典型接头微观组织结构为YG15/W（s,s）/Ni（s,s）+Cr0.8Ni0.2/HEA+Cr5B3/Al0.3CoCrFeNi。当保温时间一定时，随着钎焊温度的升高，接头的剪切强度先增大后减小，接头的失效发生在焊缝靠近硬质合金母材处。在1080℃/10min的工艺参数下，接头的剪切强度最高可以达到354MPa。研究实现了高熵合金与硬质合金的钎焊连接，获得了YG15/Al0.3CoCrFeNi复合构件，为极端复杂服役环境下的高熵合金/硬质合金复合构件的制备提供了新的视野。

关键词：钎焊硬质合金高熵合金界面组织力学性能

应用Cre-LoxP系统构建牛结节性皮肤病病毒缺失TK基因毒株

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畜牧兽医学报 2024年第10期 4517-4529页

作者：张玉哲任善会姚威龚真莉张红强柳民意尤婷王相伟李积雲殷相平孙跃峰陈豪泰万学瑞甘肃农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所重庆市万州区畜牧产业发展中心青海省科学技术信息研究所

利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台，构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)缺失TK基因毒株，为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因，利用Cre-LoxP系统平台，红色荧光蛋白(RFP)为... 详细信息

利用同源重组技术及Cre-LoxP系统平台，构建牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)缺失TK基因毒株，为研制出安全、高效的LSDV基因工程疫苗提供备选毒株。以TK基因为靶基因，利用Cre-LoxP系统平台，红色荧光蛋白(RFP)为筛选标记，采用重叠PCR方法扩增左、右同源臂以及RFP基因表达框并进行融合，将其克隆至pUC19T载体，构建基因缺失转移载体pUC19T-LSDV-ΔTK-RFP。将转移载体重组质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，构建LSDV-ΔTK-RFP重组病毒。采取蚀斑法、有限稀释法纯化LSDV-ΔTK-RFP。然后，利用Cre-LoxP系统，在MDBK-Cre细胞中从病毒基因组中切除RFP标签，采取蚀斑法和有限稀释法筛选并纯化LSDV-ΔTK毒株。利用PCR及测序方法对重组毒株进行鉴定，并测定其一步生长曲线。结果表明成功构建缺失TK基因的重组毒株(LSDV-ΔTK),重组毒株复制力略低于野生毒株。应用Cre-LoxP系统构建的缺失TK基因LSDV毒株，具有良好的遗传稳定性和复制生长特性，为后续LSDV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株，同时拓展了Cre-LoxP系统的应用范围。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 TK基因 Cre/LoxP系统重组毒株

基于代谢组学探究表观遗传调控对老鼠簕内生真菌抗卵巢癌代谢物的影响

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色谱 2024年第11期42卷 1015-1023页

作者：麻晓琳蔡来燕刘妍颖幸尚平康亮韦霞朱丹广西医科大学药学院广西医科大学第二附属医院药学部广西生物活性分子研究与评价重点实验室

本研究旨在探究表观遗传修饰策略对老鼠簕内生真菌Diaporthe goulteri产生抗卵巢癌代谢物的影响。研究以抗卵巢癌活性为指标，采用CCK-8(cell counting kit-8)方法筛选粗提物的活性，控制发酵时间、修饰剂种类和浓度等变量，进而采用超... 详细信息

本研究旨在探究表观遗传修饰策略对老鼠簕内生真菌Diaporthe goulteri产生抗卵巢癌代谢物的影响。研究以抗卵巢癌活性为指标，采用CCK-8(cell counting kit-8)方法筛选粗提物的活性，控制发酵时间、修饰剂种类和浓度等变量，进而采用超高效液相色谱-质谱联用方法进行非靶向代谢组学分析，通过主成分分析和正交偏最小二乘判别分析，构建了多变量统计分析模型，结合模型和变量重要性投影(VIP),使用Massbank数据库进行定性，筛选并鉴定出15种在控制组与修饰组之间具有显著性差异的代谢物(VIP≥1,P研究结合了抗卵巢癌活性筛选与代谢组学分析，旨在发现潜在的活性代谢物，为红树植物老鼠簕资源的深入开发和活性化合物的靶向分离提供了科学依据。

关键词：液相色谱-质谱内生真菌抗卵巢癌活性表观遗传修饰代谢组学

负膨胀材料在复合材料制备和钎焊中的研究进展

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机械工程学报 2024年

作者：顾磊王鹏程闫耀天陈海燕李文亚西北工业大学凝固技术国家重点实验室哈尔滨工业大学先进焊接与连接国家重点实验室

负热膨胀(Negativethermalexpansion,NTE)材料因其具有热缩冷胀的性质，故在调控材料热膨胀系数(Coefficientof thermalexpansion,CTE)方面表现出独特的优势，在复合材料和钎焊领域展现出巨大的潜力。目前NTE材料已在航天、生物医学以... 详细信息

负热膨胀(Negativethermalexpansion,NTE)材料因其具有热缩冷胀的性质，故在调控材料热膨胀系数(Coefficientof thermalexpansion,CTE)方面表现出独特的优势，在复合材料和钎焊领域展现出巨大的潜力。目前NTE材料已在航天、生物医学以及电子信息等领域得到了广泛的应用。在制备复合材料时，将NTE材料作为增强相与正热膨胀材料结合，可以有效调节复合材料的热膨胀系数，将其控制在极低或接近零的水平。在金属基复合材料的制备过程中通过添加NTE增强相，以降低金属基复合材料的热膨胀系数，有效地减少了因热膨胀引起的内部应力，从而延长材料的使用寿命。在钎焊领域中，由于异种母材进行钎焊时热膨胀系数差异较大，接头中会产生较大的残余应力，从而严重影响钎焊接头的性能。在复合钎料中引入NTE材料降低其热膨胀系数，进而减小母材与钎缝之间的热失配，从而有效地降低了接头处的残余应力，以达到提高接头力学性能的目的。

关键词：负膨胀材料钎焊金属基复合材料残余应力热膨胀系数

羊口疮病毒ORF112基因缺失毒株的构建及增殖能力分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：尤婷任善会王萌张红强高小龙姚威王卉杨雪马春玲柳民意张玉哲王金龙孙跃峰陈豪泰王桂荣甘肃农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所青海大学动物科技学院重庆市万州区畜牧产业发展中心

利用同源重组技术构建羊口疮病毒（orf virus， ORFV）ORF112基因缺失毒株，为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因，通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达框，进行... 详细信息

利用同源重组技术构建羊口疮病毒（orf virus， ORFV）ORF112基因缺失毒株，为后续研制出高效、安全的ORFV基因工程疫苗提供候选毒株。以ORF112基因为靶基因，通过重叠PCR的方法将左、右同源臂及绿色荧光蛋白（EGFP）基因表达框，进行融合后与pUC19T载体连接，构建出pUC19T-ORFV-ΔORF112-EGFP基因转移载体。将转移载体重组质粒转染到Vero细胞与WT-ORFV基因组进行同源重组。采取有限稀释法和挑取单细胞克隆法，筛选并纯化出纯合的ORFV-ΔORF112-EGFP毒株，并对该基因缺失毒株遗传稳定性和增殖特性等进行研究。结果显示：利用有限稀释和挑取单细胞克隆方法，进行阳性重组病毒纯化，通过PCR验证和测序，成功的获得ORFV-ΔORF112-EGFP重组毒株。该重组毒株在系列传代过程中EGFP稳定表达且无减弱现象。该重组ORFV-ΔORF112-EGFP毒株与野生毒株的复制生长特性基本一致。成功构建并筛选得到纯化的ORFV-ΔORF112-EGFP基因缺失毒株，该毒株具有良好的遗传稳定性和复制能力，为后续ORFV基因工程疫苗的研制提供了候选毒株。

关键词：羊口疮病毒 112基因同源重组基因缺失

卤代烷烃脱卤素酶标签α1A-肾上腺素受体色谱方法的建立与评价

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色谱 2024年第10期42卷 935-942页

作者：袁心怡李良喜赵勤张晓英李倩赵新锋冀旭西藏民族大学西藏藏医药研究中心藏药活性成分及药理机制研究联合实验室陕西咸阳712082 西藏民族大学藏药检测技术教育部工程研究中心陕西咸阳712082 西北大学生命科学学院陕西西安710069

受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性... 详细信息

受体色谱技术是将色谱技术的高分离能力和药物-受体间的高特异性识别能力结合起来的一种分析技术,能够对中药等复杂体系中靶向活性成分进行高效筛选与准确辨识。该技术的关键在于发展高效、温和、简便的固定化方法,使得固定化受体活性得以保持。传统的以生物交联剂为核心的随意共价固定化技术存在反应特异性较差、需要纯化蛋白质等不足。针对该问题,本研究将卤代烷烃脱卤素酶(Halo)与6-氯己酸的特异性生物正交反应引入至α_(1A)-肾上腺素受体(α_(1A)-AR)的固定化过程,将Halo标签α_(1A)-AR一步固定至6-氯己酸修饰的氨丙基硅胶表面,无需对α_(1A)-AR进行纯化。采用扫描电子显微镜和色谱法对Halo-α_(1A)-AR色谱固定相进行形貌及活性表征,证明受体已成功固定且具有特异性识别配体的能力,30天内稳定性良好。非线性色谱法研究结果显示:盐酸哌唑嗪、盐酸特拉唑嗪和乌拉地尔通过一类结合位点与Halo-α_(1A)-AR色谱固定相作用,结合常数分别为3.85×10^(5)、5.00×10^(5)和5.90×10^(5)L/mol;甲磺酸酚妥拉明和盐酸坦索罗辛在Halo-α_(1A)-AR色谱固定相上则存在两类位点,前者与受体亲和力分别为3.12×10^(6) L/mol和6.01×10^(5)L/mol,后者则为9.98×10^(5)L/mol和2.11×10^(4) L/mol。与传统物理吸附法或N,N′-羰基二咪唑法制备的α_(1A)-AR色谱柱相比,本文所用固定化方法无需纯化受体,在一定程度上避免了受体活性损失,实现了蛋白质一步固定化方法,亲和力测定值更接近于溶液中受体-药物的真值,为复杂体系靶向活性成分高效筛选与准确测定奠定了基础。

关键词： α1A-肾上腺素受体卤代烷烃脱卤素酶一步固定化非线性色谱法

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提高薄储层测井曲线纵向分辨率方法研究进展综述

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地球物理学进展 2024年第1期39卷 291-304页

作者：张文艺张冲孙康杨旺旺赵腾腾油气资源与勘探技术教育部重点实验室(长江大学) 武汉430100 长江大学地球物理与石油资源学院武汉430100 中国石油塔里木油田分公司安全环保与工程监督中心库尔勒841000 中国石油新疆油田分公司勘探开发研究院克拉玛依834000

测井曲线受围岩影响分辨率降低,使得其测井响应值与地层真实值存在一定的差距,影响着薄储层的识别和挖潜.为了解提高测井曲线分辨率方法的研究现状,本文通过文献调研,将方法归纳为三大类:(1)基于测井原理的方法,此方法是目前提高测井曲... 详细信息

测井曲线受围岩影响分辨率降低,使得其测井响应值与地层真实值存在一定的差距,影响着薄储层的识别和挖潜.为了解提高测井曲线分辨率方法的研究现状,本文通过文献调研,将方法归纳为三大类:(1)基于测井原理的方法,此方法是目前提高测井曲线分辨率的主流方法,有地球物理意义,且理论成熟,易操作实现,但一般适用于处理线性响应曲线及感应电阻率曲线;(2)数学函数及公式方法,此方法有数学理论作为支撑,处理资料速度快,可以与其他方法结合对测井曲线进行处理,但还需要更多理论的探索及研究;(3)时频分析及机器学习方法,此类方法种类多样,是未来发展的趋势,但在测井曲线分辨率提高上应用的不多,且需要多次实验才能确定最优分辨率.最后比较了三种方法的优缺点并给出了选择建议,该研究对提高测井曲线分辨率方法的优选具有一定的参考意义.

关键词：薄层测井曲线校正反褶积法纵向响应离散法机器学习综述

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