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生物型人工肝支持系统种子细胞的来源与应用

临床肝胆病杂志 2024年第2期40卷 246-251页

作者：朱雪晶黄伟健鄢和新上海赛立维生物科技有限公司上海201210 上海交通大学医学院附属仁济医院麻醉科上海200127

迄今为止,重症肝炎、肝衰竭尚无特效治疗方法,病死率高达70%,是国内外危重症中的治疗难点。肝移植术是目前终末期肝病最有效的治疗方法,然而仅有1%~2%的患者能够获得器官移植机会。生物型人工肝支持系统通过体外机械、理化以及生物装置... 详细信息

迄今为止,重症肝炎、肝衰竭尚无特效治疗方法,病死率高达70%,是国内外危重症中的治疗难点。肝移植术是目前终末期肝病最有效的治疗方法,然而仅有1%~2%的患者能够获得器官移植机会。生物型人工肝支持系统通过体外机械、理化以及生物装置,清除患者体内蓄积的各种有害物质,代偿肝脏代谢功能,补充必需物质,改善内环境,帮助患者恢复肝功能,度过危险期,亦为患者肝移植争取宝贵时间,因此被认为是治疗终末期肝病的重要方法之一。生物型人工肝的核心要素是肝细胞,本综述总结了当前生物型人工肝主要的肝种子细胞来源、3D培养方法以及相应的生物反应器培养系统,期望逐步实现肝细胞体外规模化制备,从而获得足够数量和质量的肝细胞这一临床应用亟待解决的核心问题。

关键词：肝,人工种子细胞培养技术

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基于叠加效应的全身振动联合蹲起同步训练对脑卒中患者步行功能的影响

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中国康复医学杂志 2024年第2期39卷 178-184页

作者：徐冬艳王卫宁梁思捷刘加鹏潘力刘罡吴毅朱玉连复旦大学附属华山医院康复医学科上海市200040

目的:探讨基于叠加效应的全身振动联合蹲起同步训练对脑卒中患者步行功能的影响。方法:选取复旦大学附属华山医院康复医学科(浦东院区)40例监护或者辅助具下,可以独立步行的脑卒中患者,随机分为全身振动训练组(WBVT组)和对照组,两组均... 详细信息

目的:探讨基于叠加效应的全身振动联合蹲起同步训练对脑卒中患者步行功能的影响。方法:选取复旦大学附属华山医院康复医学科(浦东院区)40例监护或者辅助具下,可以独立步行的脑卒中患者,随机分为全身振动训练组(WBVT组)和对照组,两组均采用常规康复治疗,每天40min。WBVT组在常规康复治疗的基础上增加全身振动联合蹲起同步训练,20min/次/天。对照组在常规康复治疗的基础上增加在全身振动平台上无振动站立,20min/次/天。分别在入组时和干预4周后,采用穿戴式三维步态评估仪对患者步行能力进行评估,使用表面肌电图仪采集患者步行过程中的股直肌和股二头肌长头的肌电信号,并对干预前后的数据进行统计学分析。结果:经过4周干预,两组的步速和步幅均比治疗前有提高(P度较治疗前有提高(P支撑相(SS),WBVT组双侧股直肌和股二头肌协同收缩率干预前后均有差异(P度、步幅和下肢肌肉协同收缩率,改善患者步行功能。

关键词：全身振动蹲起训练脑卒中协同收缩率步行功能

基于AMPK信号通路探讨芪术方改善非酒精性脂肪性肝炎的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第8期30卷 49-56页

作者：张秋怡周振华上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学附属曙光医院安徽医院合肥230011

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨芪术方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏脂质代谢及氧化应激的改善与作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组10只,造模组50只。造模组采用高脂高胆固醇饲料喂养16周造成N... 详细信息

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨芪术方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏脂质代谢及氧化应激的改善与作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组10只,造模组50只。造模组采用高脂高胆固醇饲料喂养16周造成NASH小鼠模型后,随机分为模型组、芪术方低、中、高剂量组、易善复组各10只。芪术方各组按4.75、9.50、19.00 g·kg^(-1)剂量、易善复组按228 mg·kg^(-1)剂量行每日1次灌胃,正常组和模型组予等体积纯水,连续给药8周。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、葡萄糖(GLU)水平;苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、游离脂肪酸(FFA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)、线粒体解偶联蛋白2(UCP2)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织AMPK、p-AMPK、ACC、CPT1A、UCP2蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏脂肪变性明显,可见多处炎症聚集灶,胞内出现大量脂质沉积,血清AST、ALT活力,IL-6、IL-1β、TNF-α、FFA、MDA水平显著升高,CAT、SOD活力显著降低,ACC mRNA及蛋白表达显著升高,CPT1A、UCP2 mRNA及蛋白表达显著降低,p-AMPK蛋白表达显著降低(P度减轻,血清AST、ALT活力,IL-6、IL-1β、TNF-α、FFA、MDA水平显著降低,CAT、SOD活力显著升高(P<0.01),芪术方中、高剂量组小鼠肝组织ACC mRNA及蛋白表达显著降低,CPT1A、UCP2 mRNA及蛋白,p-AMPK蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:芪术方可通过激活AMPK信号通路,改善NASH小鼠肝脏脂质代谢,减少氧化应激,促进肝细胞修复。

关键词：芪术方非酒精性脂肪性肝炎腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路脂质代谢氧化应激

酸性预适应激活钠-氢交换体1调控细胞内pH稳态减轻肾缺血再灌注损伤的研究

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中国全科医学 2024年

作者：陈安南颜芷昕张健沈波丁小强宋娜娜复旦大学附属中山医院肾内科上海市肾脏疾病与血液净化重点实验室上海市复旦大学张江研究所

背景适宜的细胞内pH(pHi)是细胞发挥功能的基础。酸性预处理有利于诱导细胞内液酸适应，增强细胞应对损伤性应激的能力，被称为酸性预适应（AP）。钠-氢交换体1(NHE1)在肾小管上皮细胞广泛表达，也是细胞排H+的主要通道之一。然而，NHE... 详细信息

背景适宜的细胞内pH(pHi)是细胞发挥功能的基础。酸性预处理有利于诱导细胞内液酸适应，增强细胞应对损伤性应激的能力，被称为酸性预适应（AP）。钠-氢交换体1(NHE1)在肾小管上皮细胞广泛表达，也是细胞排H+的主要通道之一。然而，NHE1在肾脏酸性预适应中的作用及其机制仍不明确。目的本研究首先在人肾小管上皮细胞系（HK2）中建立可有效减轻缺氧/复氧（H/R）损伤的AP模型，围绕NHE1阐明AP调控细胞内pH稳态的作用机制，并在小鼠IPC模型中加以验证。方法实验于2023年6—12月在复旦大学附属中山医院肾内科实验室完成。在体外实验，采用缺氧24 h后复氧1 h建立HK2细胞的H/R模型。应用pH 6.6酸性培养基处理细胞，构建AP模型。根据不同实施方案分为3部分，（1）AP模型的建立：将AP过程分为pH 6.6酸性培养基处理阶段（A）和pH 7.4正常培养基恢复阶段（R）,HK2细胞先后经过不同时间的A和R处理后再进行H/R，探索最佳AP模型及其对NHE1和pHi的调控作用；（2）使用NHE1的小干扰RNA(siNHE1)敲低NHE1，观察AP保护效应的改变；（3）应用低氯离子培养基抑制pHi的波动，观察AP对NHE1调控作用和保护效应的改变。在体内实验，选取24只SPF级雄性野生型C57BL/6小鼠，分组为假手术组（Sham）、肾缺血再灌注组（I/R组）、肾缺血预适应组（IPC组）、肾缺血预适应+肾缺血再灌注组（IPC+I/R组），每组各6只。I/R模型采用夹闭双侧肾动静脉35 min后复灌流24 h。IPC模型采用夹闭双侧肾动静脉15 min后复灌流4 d。IPC+I/R组则是在IPC后进行I/R处理。使用CellTiterLumi II发光法检测细胞活力。使用Western Blotting法检测NHE1、cleaved caspase 3、KIM1和cleaved caspase 9表达水平；使用流式细胞仪和Tunel染色评估细胞凋亡水平；采用BCECF-AM探针和NH4Cl冲击法检测pHi和NHE1活力；采用pHe-pHi曲线评估pHi稳态维持能力；使用免疫荧光染色检测NHE1在HK2细胞和肾脏组织中的定位。结果酸性处理12 h，正常培养基恢复6 h可显著降低H/R处理后cleaved caspase 3和cleaved caspase 9表达水平，减少Annexin V和Tunel阳性细胞比例（P<0.05）。AP缓解H/R处理后的细胞内酸化（P<0.05），上调NHE1表达和活性，并上移pHe-pHi曲线；敲减NHE1表达下移AP后的pHe-pHi曲线。敲减NHE1减弱AP对H/R损伤的保护作用，表现为cleaved caspase 3和cleaved caspase 9表达水平升高（P<0.05）。低氯培养消除了AP早期pHi的波动，同时抑制了AP后NHE1表达上调和pHe-pHi曲线上移。IPC缓解I/R后的p Hi降低（P<0.05）并上移pHe-pHi曲线。IPC显著降低了I/R后KIM1和cleaved caspase 3表达水平，上调I/R后NHE1表达水平（P<0.05）。免疫荧光显示I/R后NHE1在近端肾小管上皮细胞表达增多。结论本研究首次在肾脏细胞H/R模型中证实AP的保护作用。AP通过诱导pHi的短暂波动上调NHE1表达和活性，进而诱导细胞内酸适应，最终减轻H/R损伤。

关键词：酸性预适应缺血预适应急性肾损伤钠-氢交换体1 细胞内pH

一贯煎对M1型骨髓巨噬细胞治疗肝硬化大鼠模型效果的影响及其机制分析

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临床肝胆病杂志 2024年第8期40卷 1612-1619页

作者：宗梦瑶简迅王丹阳许燕楠郑欣瑞邢飞飞陈高峰陈佳美刘平慕永平上海中医药大学附属曙光医院上海市中医药研究院肝病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203

目的观察一贯煎对M1型骨髓巨噬细胞(M1-BMDM)治疗2-AAF/CCl4诱导的大鼠肝硬化作用的影响与机制。方法分离BMDM,脂多糖诱导分化为M1-BMDM。雄性Wistar大鼠随机分为正常组(n=5)和造模组(n=45)。造模组大鼠予以50%CCl4每周2次皮下注射。第... 详细信息

目的观察一贯煎对M1型骨髓巨噬细胞(M1-BMDM)治疗2-AAF/CCl4诱导的大鼠肝硬化作用的影响与机制。方法分离BMDM,脂多糖诱导分化为M1-BMDM。雄性Wistar大鼠随机分为正常组(n=5)和造模组(n=45)。造模组大鼠予以50%CCl4每周2次皮下注射。第7周开始,将造模大鼠随机分为模型组(M组)、一贯煎组(YGJD组)、M1-BMDM组、M1-BMDM+YGJD组、索拉非尼组(SORA组),改用30%CCl4皮下注射以维持肝硬化进展,同时以2-AAF灌胃,且饮水中加入CCR2抑制剂,分组干预,9周末取材。观察血清肝功能、肝组织病理、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、肝星状细胞活化、肝纤维化及炎症相关因子、Wnt信号通路相关分子表达水平等。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与M组比较,M1-BMDM+YGJD组大鼠血清ALT、AST、TBil水平均明显降低(P值均医药协同M1-BMDM治疗肝硬化提供了新思路。

关键词：肝硬化巨噬细胞一贯煎 Wnt信号通路大鼠,Wistar

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骨髓巨噬细胞M2亚型共培养后的骨髓间充质干细胞移植治疗肝硬化大鼠模型的效果分析

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临床肝胆病杂志 2024年第1期40卷 96-103页

作者：郑欣瑞许燕楠王丹阳邢飞飞宗梦瑶张士豪战俊邑刘伟陈高峰陈佳美刘平慕永平上海中医药大学附属曙光医院上海市中医药研究院肝病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203

目的探讨骨髓巨噬细胞M2亚型(M2-BMDM)共培养后的骨髓间充质干细胞(BMSCM2)移植对四氯化碳/2-乙酰氨基芴(CCl4/2-AAF)诱导肝硬化大鼠模型进展的影响。方法分离大鼠BMDM并极化为M2表型;分离大鼠BMSC,培养至第3代时与M2-BMDM共培养后获取B... 详细信息

目的探讨骨髓巨噬细胞M2亚型(M2-BMDM)共培养后的骨髓间充质干细胞(BMSCM2)移植对四氯化碳/2-乙酰氨基芴(CCl4/2-AAF)诱导肝硬化大鼠模型进展的影响。方法分离大鼠BMDM并极化为M2表型;分离大鼠BMSC,培养至第3代时与M2-BMDM共培养后获取BMSCM2。CCl4皮下注射6周建立大鼠肝硬化模型。将模型大鼠随机分为模型组(M组)、BMSC组、BMSCM2组,同时设有正常组(N组),每组6只。第7周开始,模型大鼠于CCl4皮下注射的同时予以2-AAF灌胃,分组干预,10周末取材,观察肝功能、肝组织病理、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,以及肝星状细胞、肝祖细胞、胆管细胞、肝细胞标志物的变化情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与N组比较,M组大鼠血清ALT、AST活性均显著升高(P值均<0.01);与M组比较,BMSC组和BMSCM2组大鼠ALT、AST均显著降低(P值均<0.01),且BMSCM2组显著优于BMSC组(P值均<0.05)。与N组比较,M组大鼠肝脏Hyp含量、α-SMA mRNA及蛋白表达均显著升高(P值均<0.01);与M组比较,BMSC组和BMSCM2组Hyp含量、α-SMA表达均显著降低(P值均<0.05),且BMSCM2组α-SMA水平显著低于BMSC组(P<0.01)。与N组比较,M组大鼠肝祖细胞标志物EpCam、Sox9以及胆管细胞标志物CK7、CK19 mRNA表达均显著增加(P值均<0.01),肝细胞标志物HNF-4α和Alb表达均显著降低(P值均<0.01);与M组比较,BMSC组和BMSCM2组EpCam、Sox9、CK7和CK19 mRNA表达均显著降低(P值均<0.05),HNF-4α和Alb mRNA表达均显著增加(P值均<0.05);且与BMSC组比较,BMSCM2组EpCam和CK19 mRNA表达均显著降低(P值均<0.05),而HNF-4αmRNA表达显著增加(P<0.05)。结论M2-BMDM可提高BMSC对CCl4/2-AAF诱导大鼠肝硬化的治疗效应,为进一步提高BMSC治疗肝硬化的作用提供了新思路。

关键词：肝硬化间质干细胞巨噬细胞大鼠 Wistar

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HPLC法同时测定健腰密骨片浸膏粉中5种指标成分

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上海医药 2024年第3期45卷 71-75页

作者：商晓慧赵晓玲詹常森上海和黄药业有限公司/上海中药固体制剂创新工程技术研究中心上海201401

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝... 详细信息

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ5种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.9997;5种化合物的平均回收率分别为100.47%、104.37%、95.38%、95.93%、96.66%。该方法的专属性、重复性均良好。结论:该分析方法准确、重复性好,可作为健腰密骨片浸膏粉的质量控制方法。

关键词：健腰密骨片浸膏粉 HPLC 多成分定量分析

培干扰素α1b原液中残留DNA定量PCR检测法的验证

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国际生物制品学杂志 2024年第2期47卷 85-89页

作者：李珺薛亚慧杨宇峰田石华刘敏何成上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室上海200051

目的验证聚乙二醇修饰的干扰素(培干扰素)α1b原液中残留DNA检测的实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)。方法提取4批培干扰素α1b原液的残留DNA,使用qPCR检测试剂盒进行扩增反应,绘制标准曲线,建立残留DNA的qPCR检测方法,对建立的... 详细信息

目的验证聚乙二醇修饰的干扰素(培干扰素)α1b原液中残留DNA检测的实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)。方法提取4批培干扰素α1b原液的残留DNA,使用qPCR检测试剂盒进行扩增反应,绘制标准曲线,建立残留DNA的qPCR检测方法,对建立的方法进行线性、重复性、准确性、精密度、定量限和耐用性的验证,并与探针杂交法进行比较。结果qPCR检测在300 pg/μl~30 fg/μl浓度范围内线性关系良好。6次检测相对标准偏差为7.45%;加标回收率为95.67%~129.28%;不同人员检测相对标准偏差小于30%;定量限为30 fg/μl。不同孵育温度条件下检测结果无明显差异,耐用性良好。探针杂交法与qPCR的检测结果均小于中国药典2020年版规定的10 ng/剂。结论qPCR检测培干扰素α1b原液中DNA残留具有良好的线性、重复性、准确性、精密度和耐用性,适用于该项检测。

关键词：实时荧光定量聚合酶链反应残留DNA 探针杂交法方法验证质量控制

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对药物临床试验老年受试者依从性管理的建议

药物评价研究 2024年第3期47卷 457-462页

作者：胡薏慧杨晓燕汤洁彭朋元唯安上海中医药大学附属曙光医院临床研究中心上海201203 上海中医药大学附属曙光医院中药房上海201203

药物临床试验是评估新药安全性、有效性,推动医学进步,提供创新治疗方法不可或缺的关键步骤;在中国老龄化人口增加的趋势下,提升临床试验老年受试者的依从性至关重要。为确保研究结果更具代表性和适用性,建议采取以下措施:首先,制定个... 详细信息

药物临床试验是评估新药安全性、有效性,推动医学进步,提供创新治疗方法不可或缺的关键步骤;在中国老龄化人口增加的趋势下,提升临床试验老年受试者的依从性至关重要。为确保研究结果更具代表性和适用性,建议采取以下措施:首先,制定个性化支持计划和多元化的依从性监测方法;其次,根据老年人的生活方式和需求,调整试验设计以提升参与的舒适度和便捷性;此外,建立社会支持系统以提供更广泛的支持;最后,通过加强研究团队的培训,提高对老年患者的关怀水平,激发其积极性和合作度。这些举措有助于减小药物临床试验的选择性和信息偏倚,为改善医疗护理和推动医学科学的发展提供可靠的研究基础。通过科学、伦理和规范的试验设计和实施,可以更好地评估药物的效果,为患者提供更好的医疗选择。

关键词：药物临床试验老年受试者依从性信息偏倚研究结果