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mFVII／Fc融合基因慢病毒载体的构建及在hBMSCs中表达的研究

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中华泌尿外科杂志 2011年第5期32卷 339-343页

作者：刘胜来陈捷王共先汪泱汪新辉余刚薛金雄熊礼生南昌大学研究生院医学部 330006 南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所

目的构建人凝血因子VII（FVII）与免疫球蛋白Fc片段融合基因（mFVII／Fc）的慢病毒表达载体，并检测其在人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）中的表达情况，获取mFvII／Fc稳定表达的干细胞载体。方法体外克隆人凝血因子VII，用点突变技术在基... 详细信息

目的构建人凝血因子VII（FVII）与免疫球蛋白Fc片段融合基因（mFVII／Fc）的慢病毒表达载体，并检测其在人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）中的表达情况，获取mFvII／Fc稳定表达的干细胞载体。方法体外克隆人凝血因子VII，用点突变技术在基因水平将341部位Lys突变为Ala后，利用DNA连接酶与免疫球蛋白IgG1 Fc片段的基因融合，经酶切整合，测序鉴定后转染人胚肾293T细胞包装为重组mFVII／Fc慢病毒载体，鉴定载体构建成功后，测定慢病毒滴度。确定转染第三代hBMSCs的最佳MOI值后批量转染，荧光显微镜下观察GFP的表达情况，RT—PCR、ELISA分别在不同时间点对mFVII／Fc的mRNA及蛋白表达进行相对定量分析。结果所构建融合基因与GenBankID：AF272774对比，除同义变异外完全相符；包装的慢病毒滴度为2×10^8tu／ml；hBMSCs鉴定结果为CD＋（98．08％）、CD＋（97．63％）、CD；（0．31％）、CD＋（0．58％）；转染hBMSCs72h后的效率为（84±3）％，经RT—PCR及ELISA证实转染mFVII／Fc基因的hBMSCs有大量mRNA转录和蛋白表达水平。结论实验成功获得了融合基因的hBMSCs稳定遗传表达载体，为靶向前列腺癌组织因子研究及肿瘤基因治疗研究提供了实验依据。

关键词：凝血因子VII与Fc片段人骨髓间充质干细胞融合基因慢病毒载体

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上海市闵行区中小学生肥胖患病率调查

上海预防医学 2004年第5期16卷 209-210,214页

作者：姚经建夏红屠月珍孙兰沈水仙罗飞宏上海市闵行区疾病预防控制中心上海201100 上海市闵行区卫生局上海201100 复旦大学附属儿科医院上海200032

[目的 ]　了解上海市闵行区中小学生肥胖和超重患病率情况 ,为预防儿童肥胖制订防制策略及措施提供基础资料。　 [方法 ]　普查区内共 40 3 10名中小学学生的身高体重。采用体重指数 (BMI)和身高别体重法同时评价调查对象的肥胖患病率。... 详细信息

[目的 ]　了解上海市闵行区中小学生肥胖和超重患病率情况 ,为预防儿童肥胖制订防制策略及措施提供基础资料。　 [方法 ]　普查区内共 40 3 10名中小学学生的身高体重。采用体重指数 (BMI)和身高别体重法同时评价调查对象的肥胖患病率。　 [结果 ]　研究人群平均年龄 ( 12 .5 9± 3 .0 7)岁 ,总体BMI为 18.63± 3 .3 1,其中男性BMI高于女性。以BMI法为评价标准总体肥胖患病率为 2 .76%,超重患病率为 11.5 7%;以身高别体重法为参考标准则肥胖的患病率为 6.17%,超重的患病率为 6.76%,两种评价方法的总体患病率差异有极显著性。肥胖和超重患病率总体上呈现男高女低 ,并随年龄增加而逐渐减低。　 [结论 ]　闵行区中小学生的肥胖总体患病率呈现随年龄的增高而逐渐降低趋势。中小学生超重比例较高 ,应及早制订防制策略及措施。

关键词：上海市闵行区中小学生肥胖患病率体重指数流行病学

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中熟组合特优136的选育与应用

广西农业科学 2006年第4期37卷 362-363页

作者：宋智萍韦善富韦仕邦石瑜敏毛昌祥黎兆安周行谢丽萍覃顶贤凃业国广西农科院水稻所南宁530007 广西大学农学院南宁530004 柳州市丰都种业有限公司广西柳州545001

特优136是以龙特甫A为母本,R 136为父本配组育成的强优势感温型中熟组合,具有株型集散适中、穗粒结构协调性好、熟期适宜、米质优、抗逆性强等优点,适合于桂中、桂南稻作区作早、晚稻种植,桂北稻作区作晚稻种植。2006年2月通过广西农作... 详细信息

特优136是以龙特甫A为母本,R 136为父本配组育成的强优势感温型中熟组合,具有株型集散适中、穗粒结构协调性好、熟期适宜、米质优、抗逆性强等优点,适合于桂中、桂南稻作区作早、晚稻种植,桂北稻作区作晚稻种植。2006年2月通过广西农作物品种审定委员会审定。

关键词：杂交水稻中熟特优136 选育

用抑菌圈-定殖力双重测定法筛选姜瘟病的生防细菌研究

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中国农学通报 2005年第4期21卷 266-269页

作者：刘铭张敏尹福强涂勇张宇戢俊臣四川农业大学农学院四川雅安625014

2003年6月在雅安飞仙关多功乡13个未发病或发病较轻的生姜田块中分离到217个细菌菌株,其中三个(L1、D4、T10)菌株对姜瘟病有强抑菌作用,用利福平标记后在室内的灭菌土和非灭菌土中分别进行定殖能力的测定,结果表明:L1在平板上的抑菌圈... 详细信息

2003年6月在雅安飞仙关多功乡13个未发病或发病较轻的生姜田块中分离到217个细菌菌株,其中三个(L1、D4、T10)菌株对姜瘟病有强抑菌作用,用利福平标记后在室内的灭菌土和非灭菌土中分别进行定殖能力的测定,结果表明:L1在平板上的抑菌圈不是最大,而最终定殖密度却是最大,而T10抑菌圈最大,定殖能力却不是最大。在灭菌土中比非灭菌土中的定殖能力强。在田间防病试验中,防病效果分别达60.16%(L1)、39.10%(D4)、52.39%(T10)、此外试验结果还表明三个菌株都有不同程度的增产促长作用。

关键词：抑菌圈姜瘟病生防细菌测定法定殖力 2003年6月筛选定殖能力抑菌作用防病试验防病效果促长作用试验结果灭菌菌株利福平 T10 发病田块生姜田间

鸟结核分枝杆菌MAV-2753和结核分枝杆菌38ku蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第11期16卷 1290-1295,1301页

作者：丁寿鹏李祥芳高婧华陈晓文陈越吴利先王国富大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的通过生物信息学在线分析软件对鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)MAV-2753蛋白和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)38ku蛋白进行预测分析。方法从BLAST获取MAV-2753和38ku蛋白的氨基酸序列;利用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点和相对分子质量,氨基酸组成及比例,分子式及脂肪指数;利用SPOMA、SWISS-MODEL在线预测软件预测蛋白的二、三级结构;使用TMHMM Server2.0预测跨膜区;使用PortScale进行疏水性预测分析;使用SignlP5.0进行信号肽预测分析;应用ISoftBerry在线分析网址进行亚细胞定位;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线分析软件进行蛋白质相互作用分析;运用NetNGIyc 1.0 Server、NetGlycate 1.0 Server进行糖基化、赖氨酸化分析预测;通过IEDB在线预测软件进行B细胞抗原表位的预测分析。结果MAV-2753基因编码蛋白为Catalase-peroxidase,分子质量单位为81ku;由748个氨基酸组成,相对等电点为4.9;正电荷残基(ArG+Lys)为73,负电荷残基(Asp+Gly)为107;脂肪系数为72.59,总平均亲水性为-0.455,预测为疏水蛋白;无跨膜区;有60个磷酸化位点。亚细胞定位于胞外。38ku蛋白由pstS1基因编码,由374个氨基酸组成,相对等电点为5.14,分子质量单位为38ku;正电荷残基(ArG+Lys)为17,负电荷残基(Asp+Gly)为26;不稳定系数为25.56,脂肪系数为86.79,总平均亲水性为0.066,预测为亲水性蛋白。该蛋白无跨膜区,有60个磷酸化位点,亚细胞定位于胞外。结论MAV-2753、38ku蛋白有着多个磷酸化、糖基化位点,表明与其他细胞间存在信号传递,蛋白空间结构稳定,有多个B细胞优势表位,可为MAC肺病与肺结核的血清学诊断、疫苗开发奠定基础。

关键词：鸟结核分枝杆菌 MAV-2753蛋白 38ku蛋白血清学诊断

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椎管内肿瘤的MRI诊断与鉴别

医学信息（西安上半月） 2005年第6期18卷 641-642页

作者：林黛英林时勖曾向廷吴先衡汕头市中心医院MR室广东汕头515031

目的根据常见椎管内肿瘤的MRI表现,对肿瘤定位、定性诊断进行探讨,提高MRI对常见椎管内原发肿瘤的定位定性诊断水平。方法:回顾性分析145例经病理证实的椎管内原发肿瘤的MRI表现。结果髓内肿瘤36例,35例定位诊断正确,25例定性诊断正确;... 详细信息

目的根据常见椎管内肿瘤的MRI表现,对肿瘤定位、定性诊断进行探讨,提高MRI对常见椎管内原发肿瘤的定位定性诊断水平。方法:回顾性分析145例经病理证实的椎管内原发肿瘤的MRI表现。结果髓内肿瘤36例,35例定位诊断正确,25例定性诊断正确;髓外肿瘤109例,106例定位诊断正确,88例定性诊断正确。按解剖隔间定位诊断正确率97.2%,定性诊断正确率77.9%。结论MRI对常见椎管内原发肿瘤的诊断与鉴别诊断有有较高的价值。

关键词：椎管内肿瘤 MRI诊断鉴别诊断脊膜瘤神经源性瘤

旅游社区治理多主体共生行为模式演化探析--以青海省互助土族故土园为例

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湖北农业科学 2020年第24期59卷 236-240,F0003页

作者：邵利唐仲霞向程任奚娴柴健青海师范大学经济管理学院西宁810008 青海省自然地理与环境过程重点实验室西宁810008 青海师范大学地理科学学院西宁810008

基于共生理论,以青海省互助土族故土园为案例地,选取政府、企业、居民及游客作为共生主体单元,通过2次实地调研数据,分析和探讨旅游社区治理多主体共生行为模式及其演化。结果表明,①2012年与2017年不同治理主体相互之间均为正向共生关... 详细信息

基于共生理论,以青海省互助土族故土园为案例地,选取政府、企业、居民及游客作为共生主体单元,通过2次实地调研数据,分析和探讨旅游社区治理多主体共生行为模式及其演化。结果表明,①2012年与2017年不同治理主体相互之间均为正向共生关系;②2个时间段不同治理主体之间的相互作用及影响存在差异性;③与2012年相比,2017年政府-企业、政府-游客、居民-企业、居民-游客之间共生关联性有所加强,政府-居民、企业-游客之间共生关联性有所削弱;④共生行为模式由2012年的R-GE-T模式演化为2017年的E-R-G-T共生行为模式。

关键词：社区治理多主体共生行为模式演化互助土族故土园

猪Utx慢病毒过表达/干扰载体的构建和病毒包装

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家畜生态学报 2017年第8期38卷 7-13页

作者：闫海龙陈晓旭朱晋生张鹏飞李爽曾文先西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌 712100 榆林学院生命科学研究中心，陕西榆林 719000

UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)作为H3K27me2/3的去甲基酶,能够调控动物发育过程,并有着重要的生物学作用。根据猪Utx预测序列,扩增Utx的CDS区全长序列。利用Utx的CDS区序列信息,构建pCD513B-CMV-Utx过表达载体,设计并合成干扰shRNA和阴性对照寡核苷酸片段。其中干扰shRNA及阴性对照通过退火形成双链DNA,并插入pCD513B-U6慢病毒干扰载体。采用双酶切的方法和DNA测序鉴定重组载体。通过干扰和过表达载体质粒共转293T细胞,利用qRT-PCR筛选出最有效的干扰序列。重组质粒与其他3种慢病毒辅助包装质粒(pRsv-Rev、pGag-Pol、pVSV-G)共转染293T细胞包装慢病毒。结果表明,本试验成功扩增Utx基因的全长序列,且成功构建了Utx的过表达和干扰载体。qRT-PCR筛选出pCD513B-U6-Utx-shRNA-3干扰效率最显著,干扰效率为70%。本试验成功包装出慢病毒Lenti-Utx-shRNA、Lenti-NC和Lenti-Utx,测定的病毒滴度分别为6.1×107 tu/mL、4.8×107 tu/mL和3.9×105 tu/mL。此试验为进一步在猪源细胞中进行Utx基因的研究奠定基础。

关键词：组蛋白去甲基化 Utx shRNA 慢病毒过表达载体干扰载体

尿苷产生菌枯草芽孢杆菌Tc142分批发酵动力学研究

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现代食品科技 2008年第6期24卷 532-534,508页

作者：刘康乐谢希贤刘淑云天津科技大学生物工程学院天津300457

通过建立菌体生长、产物形成和基质消耗的动力学模型,并应用MATLAB软件进行模型拟合分析,对枯草芽孢杆菌Tc142(6-Aur+2-tur+Upase-)5L罐尿苷分批发酵实验数据进行分析,建立尿苷分批发酵动力学模型。结果是拟合模型能较好地反映尿苷产生... 详细信息

通过建立菌体生长、产物形成和基质消耗的动力学模型,并应用MATLAB软件进行模型拟合分析,对枯草芽孢杆菌Tc142(6-Aur+2-tur+Upase-)5L罐尿苷分批发酵实验数据进行分析,建立尿苷分批发酵动力学模型。结果是拟合模型能较好地反映尿苷产生菌Tc142的分批发酵过程。结论是以发酵动力学为指导,应用Matlab分析方法对尿苷发酵动力学模型进行拟合,其结果与实验结果相符。

关键词：尿苷分批发酵动力学数学模型 MATLAB