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马铃薯R2R3-MYB转录因子的克隆及植物表达载体的构建

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分子植物育种 2018年第18期16卷 5947-5952页

作者：杨奕琦徐佳妮秦玉芝熊兴耀周倩湖南农业大学植物保护学院植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 湖南农业大学园艺园林学院湖南省马铃薯工程技术中心长沙410128 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 湖南农业大学作物种质创新与资源利用国家重点实验室培育基地长沙410128

MYB转录因子家族是植物转录因子中最大的家族之一,广泛参与植物初生和次生代谢调控、细胞形态的建成、环境胁迫的应答等。前期转录组测序表明抗晚疫病的马铃薯材料加湘1号接种晚疫病菌后其MYB基因家族中的一个R2R3-MYB转录因子PGSC0003D... 详细信息

MYB转录因子家族是植物转录因子中最大的家族之一,广泛参与植物初生和次生代谢调控、细胞形态的建成、环境胁迫的应答等。前期转录组测序表明抗晚疫病的马铃薯材料加湘1号接种晚疫病菌后其MYB基因家族中的一个R2R3-MYB转录因子PGSC0003DMG400011243的表达量显著上调。为了探讨R2R3-MYB转录因子PGSC0003DMG400011243在马铃薯晚疫病抗病过程中发挥的作用。本研究通过PCR扩增了加湘1号中的该基因,并通过XcmⅠ酶切、连接将其装载到pCXSN载体上,构建了该基因的超表达载体pCXSN-JX-R2R3,并转化到农杆菌GV3101中。该研究为R2R3-MYB转录因子的基因转化及后续的功能分析提供了理论指导。

关键词： R2R3-MYB转录因子基因克隆表达载体构建

基于响应面模型与遗传算法的工具磨床立柱多目标优化设计

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制造技术与机床 2021年第4期 48-54页

作者：谢军廖映华谭州廖川斯兴瑶四川轻化工大学机械工程学院四川宜宾644000

以某型号工具磨床立柱为研究对象,应用SolidWorks建立立柱的三维模型,然后利用ANSYS Workbench软件对其在典型工况下进行静态特性分析,并根据分析结果对立柱进行多目标优化设计。优化时,首先确定设计变量,利用正交试验进行灵敏度分析,... 详细信息

以某型号工具磨床立柱为研究对象,应用SolidWorks建立立柱的三维模型,然后利用ANSYS Workbench软件对其在典型工况下进行静态特性分析,并根据分析结果对立柱进行多目标优化设计。优化时,首先确定设计变量,利用正交试验进行灵敏度分析,判断灵敏度较大的设计变量作为后续优化设计的自变量;然后通过二阶响应面法建立数学模型,采用理想点法构造评价函数;最后利用遗传算法进行优化求解。分析结果表明:改进后立柱最大变形量减少8.6%,最大等效应力减小5.1%,静态性能得到提高,达到了优化目的,同时可为其他类型工具磨床立柱优化设计提供理论依据。

关键词：立柱静态特性多目标优化

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土壤中杨树溃疡病生防菌的分离鉴定

林业科学 2015年第4期51卷 116-125页

作者：杨蕾梁军周国英倪杨吕全张星耀中南林业科技大学林学院长沙410004 国家林业局森林保护重点试验室中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所北京100091 南京林业大学南方现代林业协同创新中心南京210037

【目的】杨树溃疡病是中国杨树人工林重大生物灾害之一,采用生物防治的方法控制杨树溃疡病是持续有效的手段。本研究旨在从杨树林地土壤中分离出对杨树溃疡病菌有良好生防效果的拮抗微生物。【方法】以杨树溃疡病病原菌葡萄座腔菌为靶标... 详细信息

【目的】杨树溃疡病是中国杨树人工林重大生物灾害之一,采用生物防治的方法控制杨树溃疡病是持续有效的手段。本研究旨在从杨树林地土壤中分离出对杨树溃疡病菌有良好生防效果的拮抗微生物。【方法】以杨树溃疡病病原菌葡萄座腔菌为靶标,进行土壤中生防微生物的分离、筛选和鉴定。土壤微生物的分离采用稀释平板涂布法;拮抗微生物的筛选分为初筛、发酵液复筛和拮抗菌株离体复筛3步,初筛采用平板对峙法,拮抗菌发酵液复筛选择三明治法和改良琼脂扩散法相结合的方法,最终通过离体组织防治效果测定确定目的生防菌株;生防菌株的鉴定采用形态学观察和分子生物学鉴定相结合的方法。【结果】在河北省廊坊市和河南省原阳县的杨树林地中按上、中、下3层共采集48份土样,从土样中共分离得到微生物259株,其中细菌122株;放线菌106株;真菌31株,各土层微生物数量规律整体符合上层>中层>下层;通过平板对峙法初筛选择出8株抑菌带直径>4 mm的细菌和放线菌以及8株拮抗菌菌落直径>40 mm的真菌;再通过发酵液三明治法和改良琼脂扩散法复筛,筛选出8株对杨树溃疡病有良好抑制作用的拮抗菌,分别是细菌TYZ1B3和YX5B1,真菌LS10F1,LX5F1,LZ10F1,LS6F1,LX6F2和TLZ2F2;最终通过离体组织防治效果测定,从这8株拮抗菌株中筛选出1株土壤生防真菌LX6F2,其对杨树离体组织溃疡病的防治效果可达76.04%;经过形态学观察,菌株LX6F2的菌落、菌丝及孢子形态符合镰刀菌的特征,通过r DNA-ITS序列及其系统发育分析,测得生防菌株LX6F2的序列长度为563 bp,序列登录号为FR872729.1,其与编号为JN038467的木贼镰刀菌相似度高达100%,从而鉴定该菌株为木贼镰刀菌。【结论】该菌株的发现为杨树溃疡病的生物防治提供了新的原材料,对杨树溃疡病的可持续控制具有重要意义,可在后续研究中将进一步对其抑菌机理、有效拮抗成分及菌剂研制等进行研究。

关键词：土壤微生物杨树溃疡病木贼镰刀菌拮抗活性生防菌株

长链非编码RNA TUG1在结肠直肠癌组织中的表达与分析

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外科理论与实践 2018年第4期23卷 374-378页

作者：周勇崔荣石兴耀上海市嘉定区中医医院普外科上海201800

目的:检测结肠直肠癌组织长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene1,TUG1)的表达,并探讨其与结肠直肠癌临床病理因素及预后的相关性及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应检测106例结肠直肠癌病人的癌组织与相应的... 详细信息

目的:检测结肠直肠癌组织长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(taurine upregulated gene1,TUG1)的表达,并探讨其与结肠直肠癌临床病理因素及预后的相关性及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应检测106例结肠直肠癌病人的癌组织与相应的癌旁组织(距癌组织边缘>5 cm)TUG1表达。分析TUG1表达与临床病理的相关性以及TUG1表达与结肠直肠癌预后的相关性。术后随访3~60个月。结果:TUG1在结肠直肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P=0.003),表达水平与肿瘤直径(P<0.001)、CEA水平(P=0.049)以及TNM分期(P=0.005)密切相关。TUG1高表达的结肠直肠癌病人,生存率低于低表达病人(P=0.002 5)。多因素分析表明,TUG1可作为结肠直肠癌病人的独立预后因素。结论:TUG1在结肠直肠癌的发生发展中起重要作用,可作为反映结肠直肠癌生物学行为的有效指标。

关键词：结肠直肠癌牛磺酸上调基因1 实时定量聚合酶链反应预后

基于Web 2.0理念下的实验室新型沟通机制

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实验技术与管理 2016年第4期33卷 226-228,245页

作者：周琼熊兴耀邬克彬柳蓉廖晓莲湖南农业大学湖南省作物种质创新与资源利用国家重点实验室培育基地湖南长沙410128 中南大学公共管理学院湖南长沙410012

建构高效的实验室沟通机制是提高实验室服务效率的重要环节,沟通机制的建立是为了更好地实现个人利益和团队利益之间的协调关系,是增加团队合作和凝聚力的关键。从实验室的现行沟通机制的阈限分析出发,介绍新型的Web 2.0技术,运用Web 2.... 详细信息

建构高效的实验室沟通机制是提高实验室服务效率的重要环节,沟通机制的建立是为了更好地实现个人利益和团队利益之间的协调关系,是增加团队合作和凝聚力的关键。从实验室的现行沟通机制的阈限分析出发,介绍新型的Web 2.0技术,运用Web 2.0技术中强大的交互能力——即时沟通能力和知识分享能力,实现在新技术下的实验室新型沟通机制。

关键词：沟通机制 Web 2.0 服务效率

马铃薯晚疫病菌应答WRKY基因的结构功能预测与植物表达载体构建

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分子植物育种 2019年第10期17卷 3253-3258页

作者：卢昊杨奕琦秦玉芝熊兴耀周倩湖南农业大学植物保护学院植物疾病控制与利用湖南省高校重点实验室植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 湖南农业大学园艺园林学院湖南省马铃薯工程技术中心长沙410128 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 湖南农业大学作物种质创新与资源利用国家重点实验室培育基地长沙410128

WRKY是一类广泛参与高等植物各种抗逆调控活动的转录因子,可以通过激活下游相关信号转导途径调节自身的应激反应,进而增强植物抗逆性。本研究通过RNA-Seq从马铃薯(Solanum tuberosum)中筛选出一个晚疫病菌诱导WRKY转录因子基因StWRKY。... 详细信息

WRKY是一类广泛参与高等植物各种抗逆调控活动的转录因子,可以通过激活下游相关信号转导途径调节自身的应激反应,进而增强植物抗逆性。本研究通过RNA-Seq从马铃薯(Solanum tuberosum)中筛选出一个晚疫病菌诱导WRKY转录因子基因StWRKY。采用RT-PCR技术获得该基因CDS全长,并对其进行序列分析及结构功能预测。根据StWRKY蛋白序列进行同源性搜索,得到与其蛋白序列相似度较高的其他物种的蛋白序列,使用MEGA7软件对St WRKY蛋白序列及其同源序列进行多序列比对分析并构建了系统进化树。利用在线工具ProtParam对StWRKY进行氨基酸理化性质分析;利用SMART在线工具进行蛋白序列分析;利用SWISS-MODEL在线工具和PredictProtein在线平台分别对StWRKY蛋白二级结构和三级结构进行分析。结果表明,StWRKY核苷酸序列CDS全长为957 bp,编码含318个氨基酸的蛋白质,预测蛋白分子量为36.17 k D,等电点为6.49。既不是分泌蛋白也不是膜蛋白,未发现跨膜区、信号肽和复合螺旋区。StWRKY三维空间结构主要由无规卷曲以及β-折叠组成。通过XcmⅠ酶切、连接将StWRKY装载到pCXSN载体上,构建了该基因的超表达载体pCXSN-StWRKY。StWRKY基因的克隆,为进一步从分子水平上验证其抗晚疫病的生物学功能以及揭示马铃薯生物胁迫抗逆机制奠定基础,并为马铃薯抗病育种提供新的基因资源。

关键词： WRKY转录因子基因克隆表达载体构建序列分析

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防治杨树溃疡病内生菌的分离筛选及鉴定

植物保护学报 2014年第4期41卷 438-446页

作者：杨蕾周国英梁军倪杨吕全张星耀中南林业科技大学经济林培育与保护教育部重点实验室长沙410004 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护重点实验室北京100091

为筛选到对杨树溃疡病有良好生防效果的拮抗菌,采用平板对峙法初筛、发酵液"三明治"法和改良琼脂扩散法复筛,以及离体组织试验对杨树不同部位组织的内生菌进行了分离筛选,并对目的菌株进行了防治效果测定;采用形态学观察和ITS序列及其... 详细信息

为筛选到对杨树溃疡病有良好生防效果的拮抗菌,采用平板对峙法初筛、发酵液"三明治"法和改良琼脂扩散法复筛,以及离体组织试验对杨树不同部位组织的内生菌进行了分离筛选,并对目的菌株进行了防治效果测定;采用形态学观察和ITS序列及其系统发育树分析对其进行初步鉴定。结果表明从115株杨树内生菌中筛选出有拮抗效果的菌株24株,并复筛出拮抗效果良好的菌株5株,最终从杨树内生菌中筛选出1株杨树溃疡病拮抗真菌,编号为YGF9,其对杨树离体组织溃疡病防治效果可达76.47%,初步鉴定该菌株为黄绿木霉Trichoderma aureoviride。表明菌株YGF9可有效抑制杨树溃疡病病原菌的生长,是防治杨树溃疡病的潜在生防菌株。

关键词：内生生防菌杨树溃疡病黄绿木霉拮抗活性

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我国配制酒沉淀形成原因及处理方法研究进展

中国酿造 2016年第8期35卷 9-12页

作者：王洪罗惠波黄治国周平冯兴垚四川理工学院生物工程学院四川自贡643000 酿酒生物技术及应用四川省重点实验室四川自贡643000

传统配制酒酒精度适中,酒香浓郁,口感愉悦,具有保健功效和药理作用,受到广大消费者喜爱。但配制酒在货架期容易出现沉淀,影响品质和感官,一直阻碍着配制酒行业的发展,该文从沉淀形成的机理、沉淀的鉴定、沉淀的处理及预防进行了综述,以... 详细信息

传统配制酒酒精度适中,酒香浓郁,口感愉悦,具有保健功效和药理作用,受到广大消费者喜爱。但配制酒在货架期容易出现沉淀,影响品质和感官,一直阻碍着配制酒行业的发展,该文从沉淀形成的机理、沉淀的鉴定、沉淀的处理及预防进行了综述,以期提高配制酒的品质。

关键词：配制酒沉淀鉴定处理方法

马铃薯AP2/ERF转录因子的克隆及植物表达载体构建

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分子植物育种 2020年第8期18卷 2563-2568页

作者：王慧刘洪杨奕琦许思思熊兴耀周倩湖南农业大学植物保护学院植物疾病控制与利用湖南省高校重点实验室植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室长沙410128 湖南农业大学园艺园林学院湖南省马铃薯工程技术中心长沙410128 中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 湖南农业大学作物种质创新与资源利用国家重点实验室培育基地长沙410128

AP2/ERF基因家族转录因子普遍存在于植物中,参与植物体内的各种生物学过程,包括植物的生长发育、生物和非生物胁迫响应等。前期转录组测序的结果发现马铃薯‘加湘1号’一个AP2/ERF家族基因(PGSC0003DMG400012154)在接种晚疫病菌(Phytoph... 详细信息

AP2/ERF基因家族转录因子普遍存在于植物中,参与植物体内的各种生物学过程,包括植物的生长发育、生物和非生物胁迫响应等。前期转录组测序的结果发现马铃薯‘加湘1号’一个AP2/ERF家族基因(PGSC0003DMG400012154)在接种晚疫病菌(Phytophthora infestans)24 h后被显著激活。从接种*** 24 h的‘加湘1号’的总RNA中通过RT-PCR获得了该基因CDS序列为885 bp,BLAST分析显示该基因编码一个295个氨基酸残基的蛋白,并且含有1个AP2/ERF结构域,是AP2/ERF转录因子家族中的ERF亚家族的一员。本研究将该基因与XcmⅠ酶切的表达载体pCXSN连接,转化大肠杆菌,通过测序挑选插入正确克隆酶切验证,并成功转化农杆菌。本研究结果为进一步研究该基因的功能提供了帮助。

关键词：马铃薯晚疫病 AP2/ERF转录因子基因克隆表达载体构建